黄瓜花叶病毒山东株(CMV-SD)RNA2全长cDNA克隆的构建及全序列分析

分别利用５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ确定了ＣＭＶＳＤＲＮＡ２的５’和３’末端序列，在此基础上，利用ＲＴＰＣＲ得到了ＲＮＡ２的５’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２５和３’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２３，并通过拼接构建了ＲＮＡ２全长ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２Ｆ。通过对ｐＣ２５和ｐＣ２３进行序列测定，得到了ＲＮＡ２的全序列。序列分析结果表明ＣＭＶＳＤＲＮＡ２由３０４８ｎｔ组成，其中存在２个部分重叠的阅读框ＯＲＦ１（７９～２６５２ｎｔ）和ＯＲＦ２（２４１４～２７４６ｎｔ），分别编码８５８ａａ的２ａ蛋白和１１１ａａ的２ｂ蛋白，并在２ａ蛋白的序列中发现了动植物病毒复制酶所特有的两个保守序列。该株系ＲＮＡ２核苷酸序列与分属ＣＭＶＩ亚组的Ｆｎｙ株系和ＩＩ亚组的Ｑ株系ＲＮＡ２的核苷酸序列同源性分别为９１７％和７５６％；２ａ蛋白的氨基酸序列同源性分别为９３８％和６７７％，２ｂ蛋白的氨基酸序列同源性分别为８３０％和５１３％。同源性比较的结果表明ＳＤ株系属于ＣＭＶＩ亚组。

西瓜花叶病毒-2新疆株的纯化

研究了西瓜花叶病毒 2新疆株的纯化 .感病西葫芦叶组织在含有w =0 .2 %巯基乙醇和 0 .0 1mol·L- 1乙二胺四乙酸二钠 (EDTA)的 0 .5mol·L- 1的磷酸钾缓冲液中匀浆 ,用匀浆体积 1/4的氯仿澄清 ,粗提取液中的病毒经含有 φ =1%TritonX 10 0和w =3%NaCl的w =6 %聚乙二醇沉淀 ,并以含有 0 .5mol·L- 1尿素、w =0 .1%的巯基乙醇和 0 .0 1mol·L- 1EDTA的 0 .5mol·L- 1磷酸钾缓冲液悬浮 ,后经含有w =0 .1%巯基乙醇和 0 .0 1mol·L- 1EDTA的w =10 %～ 4 0 %蔗糖密度梯度离心 ,获得了经电子显微镜、紫外检测和接种试验证实侵染活性为 94 .8%的纯化病毒 .纯化病毒的A2 6 0 /A2 80 =1.2 1,A2 6 0 /A2 4 5=1.15 ,纯化病毒产量约为每kg西葫芦感病叶组织中可提取 16mg .

黄瓜花叶病毒新疆株的桃蚜传播特性

研究了桃蚜传播黄瓜花叶病毒新疆株(CMV-XJ)的规律,结果表明:无毒蚜虫能够获毒的最短取食时间为30s,获毒率随取食时间的延长而提高,取食时间为70 s以上时,获毒率达100%;带毒蚜虫传毒的最短取食时间为0.25 h,当取食时间超过最短传毒时间时,传毒率随取食时间的增加而升高,取食时间达2 h以上时,传毒率达100%;带毒蚜虫能够传毒的最少头数为1头,传毒率随单株植物带毒蚜虫数目的增加而升高,单株虫量达15头以上时,传毒率达100%.说明桃蚜可以高效率地传播黄瓜花叶病毒新疆株.

西瓜花叶病毒-2新疆株的桃蚜传播特性的研究

研究了桃蚜传播西瓜花叶病毒-2新疆株(WMV-2-X J)的规律,结果表明,无毒蚜虫能够获毒的最短取食时间为30 s,获毒率随取食时间的延长而提高,取食时间为70 s以上时,获毒率达100%;带毒蚜虫传毒的最短取食时间为0.25 h,当取食时间超过最短传毒时间时,传毒率随取食时间的增加而升高,取食时间达2h以上时,传毒率达100%;带毒蚜虫能够传毒的最少头数为1头,传毒率随单株植物带毒蚜虫数目的增加而升高,单株虫量达15头以上时,传毒率达100%.说明桃蚜可以高效率地传播西瓜花叶病毒-2新疆株.

黄瓜花叶病毒感染引起甜瓜植株苯丙氨酸解氨酶和叶绿素的变化

研究黄瓜花叶病毒新疆株(cucumber mosaic virus-XJ,CMV-2-XJ)感染抗性不同的甜瓜品种后苯丙氨酸解氨酶和叶绿素含量的变化,结果表明:与健康对照相比,受感染植株的酶活性均有所增高,但抗性品种“新玉”增高的幅度是感性品种“网纹香”的2倍,酶活性峰早出现12 d,即抗性品种酶活性增高幅度大,酶活性峰出现早;叶绿素的变化则与抗性呈负相关,抗性品种“新玉”受CMV-XJ感染后的叶绿素含量与健康对照差异不大,而感性品种“网纹香”的叶绿素含量则比健康对照下降了62.9%.说明苯丙氨酸解氨酶和叶绿素含量的变化均与甜瓜品种对CMV-2-XJ的抗性呈现规律性的相关性,这种规律性可用于甜瓜品种对CMV-XJ抗性鉴定的生物化学分析.