侵染花生的黄瓜花叶病毒CA株核酸全序列分析

对侵染花生的黄瓜花叶病毒CA(CMVCA)株系进行克隆和序列分析。CMVCARNA1全长3356个核苷酸(nt),编码分子量为111kDa的1a蛋白;RNA2全长3045nt,编码分子量为96.7kDa的2a蛋白和13.1kDa的2b蛋白;RNA3全长2219nt,编码分子量为30.5kDa的3a蛋白和分子量为24kDa的外壳蛋白(CP)。序列同源性比较表明,CMVCARNA1、2、3与CMV亚组IACMVFny、亚组IBCMVSD、亚组IICMVQ株系序列同源性,RNA1分别为91.3%、91.1%和76.5%,RNA2分别为92.1%、90%和71.2%,RNA3分别为96.1%、92.6%和74.5%;与同属花生矮化病毒(Peanutstuntvirus,PSV)RNA1、2、3序列同源性分别为67.1%、58.2%和55.7%。上述研究未发现CMVCA基因组与PSVRNA链的重组,CMVCA对花生的侵染应是该株系适应于花生的遗传变异、长期进化的结果;对RNA35′NTR结构分析以及RNA35′NTR和CP系统进化树分析表明,CMVCA属CMVIB亚组。

宁沪杭地区黄瓜花叶病毒(CMV)株系群划分的初步研究

宁沪杭地区黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）株系群划分的初步研究程宁辉１杨金水１濮祖芹２方中达２方荣祥３关键词黄瓜花叶病毒，鉴别寄主，株系，毒力黄瓜花叶病毒（ＣｕｃｕｍｂｅｒＭｏｓａｉｃＶｉｒｕｓ，ＣＭＶ）是由蚜虫以非持久性方式传播的世界性分布的植物病毒种群，已...

黄瓜花叶病毒2个分离物的亚组鉴定及株系分化研究

基于黄瓜花叶病毒甜菜分离物CMV-X J1和CMV-X J2独特的生物学特性,利用RT-PCR对接种寄主植物进行了检测。RT-PCR产物的RFLP结果显示,2个病毒分离物的M spI酶切图谱与CMV亚组I病毒的酶切图谱很相似,但经EcoR I酶切后出现显著差异;进一步对2个分离物的外壳蛋白基因进行了克隆,序列分析表明,CMV-X J1和CMV-X J2归属CMVIB亚组,二者存在着株系分化的趋势。

黄瓜花叶病毒香蕉株系衣壳蛋白转基因烟草的研究

构建了侵染香蕉的黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）两个株系（ＢＳ和ＨＩ）的衣壳蛋白（ＣＰ）基因的植物表达载体，并通过农杆菌共培养法和基因枪法，分别将两个株系的ＣＰ基因转化入了两种烟草植株。其ＣＰ基因转化频率及植株再生率研究结果表明，农杆菌共培养法比基因枪法、土耳其烟比本生烟、农杆菌１：１０倍稀释液比培养原液和１：１００倍稀释液，具有更高的转化频率和植株再生能力。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和ＰＣＲ一Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｏｌｔ检测ＣＰ基因整合研究结果表明，在两株系ＣＰ基因转化的各１２株烟草中，各有９株含有各自的ＣＰ基因。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｏｌｔ分析表明，在各７株转基因植株中，各有５株具有各自ＣＰ基因的ｍＲＮＡ的转录。ＤＡＳ一ＥＬＩＳＡ检测表明，各５株转基因植株中都含有各自株系不等量表达的ＣＰ。用ＨＩ株系进行攻击接种表明，具有ｍＲＮＡ转录和翻译的两株系的各５株转基因植株都显示了较高的抗病水平。

黄瓜花叶病毒的株系鉴定研究进展

黄瓜花叶病毒的株系鉴定研究进展李华平，胡晋生，范怀忠（华南农业大学植保系，广州５１０６４２）（夏威夷大学植病系，美国夏威夷９６８２２）关键词黄瓜花叶病毒，株系种类，株系鉴定ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｕｃｕｍｂｅｒＭｏｓａｉ...

黄瓜花叶病毒香蕉株系的衣壳蛋白基因克隆和序列分析

对侵染香蕉的黄瓜花叶病毒广东３个株系的衣壳蛋白（ＣＰ）基因，进行了克隆和序列分析。以提纯病毒ＲＮＡ为模板，应用ＲＮＡ反转录酶（ＡＭＶ）合成ＣＰ基因ｃＤＮＡ，再用ＴａｑＤＮＡ聚合酶进行ＰＣＲ扩增。通过常规基因克隆法将扩增的ＣＰ基因克隆入载体，选取每一株系的ＣＰ基因与载体表达方向相同和相反的各一个克隆，进行插入片段的全序列分析。结果表明，每一重组克隆测序长约７５０个核苷酸，任一株系其插入方向相反的两个重组克隆，其测定的序列完全互补；ＣＰ基因长６５７个核苷酸，可编码２１８个氨基酸。３个株系ＭＭ、Ｂ和ＣＳ间核苷酸序列同源率为％。６５％－９７．１１％，其中，田与ＣＳ关系紧密，而与ＭＭ关系稍远。３个株系与其它ＣＭＶ株系相比较，显示了与ＣＭＶ亚组Ⅰ相比与亚组Ⅱ有较紧密的同源关系。序列分析结果表明：广东３个分离物可划分为３个不同的株系。

我国辣椒上黄瓜花叶病毒株系分化研究

我国辣椒病毒病的主要毒原之一,是黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV),侵染辣椒产生花叶、蕨叶、环斑、坏死条斑或全株矮化等症。一般年份减产20％～30％,流行年份严重病田造成绝收。为了培育抗CMV的辣、甜椒新品种,必须先查清我国辣椒上CMV株系分化。 沿用小室(1973)和都丸(1970)划分烟草上CMV株系的方法区分我国辣椒上CMV株系。

侵染红花的黄瓜花叶病毒的鉴定及株系初步研究

１９９５和１９９６年分别在武昌和云南红花病株上获得两个黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）分离物ＣＭＶ—ＣＷ和ＣＭＶ—ＣＹ。ＣＭＶ—ＣＷ引起红花黄化花叶、严重矮化，而ＣＭＶ—ＣＹ仅引起红花轻花叶。在供试２３种植物中，两个分离物侵染１６种植物。两个分离物均能被桃蚜以非持久性方式传播，不通过红花种传；体外稳定性状分别为：致死温度５５～６０℃和５０～６０℃，稀释限点１０－４～１０－５和１０－３～１０－４，体外存活期３ｄ和４ｄ；病毒颗粒球状，直径分别为２７．２ｎｍ和２８．０ｎｍ；外壳蛋白分子量分别为２７５００和２８１００Ｄ。ＣＭＶ—ＣＷ和ＣＹ血清学性质和ＣＭＶ—ＣＡ相近。通过ＲＴ—ＰＣＲ扩增，获得ＣＭＶ—ＣＷ和ＣＭＶ—ＣＹ预期的５３４ｂｐ病毒外壳蛋白基因ｃＤＮＡ片断。株系研究表明，参试的ＣＭＶ—ＣＷ、ＣＭＶ—ＣＹ和其他２个ＣＭＶ中国分离物在温度敏感实验和血清学性质上与ＣＭＶ—Ｄ株系一致或相近，属于ＣＭＶ亚组Ｉ。依据在一组寄主植物上的反应，将４个参试ＣＭＶ分离物作了初步株系划分。

黄瓜花叶病毒香蕉株系(CMV-Xb)RNA3 cDNA的克隆和序列分析

通过RT PCR方法 ,设计两对引物 ,克隆了黄瓜花叶病毒香蕉株系 (CMV Xb)RNA3 ,并进行了核苷酸和蛋白质水平上的分析。结果表明Xb株系RNA3全长 2 2 0 5nt,具有两个蛋白编码阅读框架 (ORF) ,其中 5’端 (97～ 936nt)编码一个 2 79aa的 3a蛋白 ;3’端 (12 2 5～ 1871nt)编码一个 2 18aa的CP蛋白。 5’非编码区域为 96nt;基因间隔区 (IR)长2 88nt;3’NR含有 32 4nt。通过与亚组Ⅱ其它株系RNA3核苷酸和所编码产物推导的氨基酸序列分析发现 ,亚组Ⅱ株系无论在编码区还是非编码区的核苷酸同源性都相对较高 ;亚组Ⅱ株系在进化过程中具有连续性。

一种引起花生严重矮化的黄瓜花叶病毒的(CMV)株系鉴定

根据病毒生物学特性、颗粒形态和血清学性质,明确由山东泰安花生矮化病株上分离的一个病毒分离物为黄瓜花叶病毒(CMV)一个株系,并暂定名为CMV花生矮化株系(CMV-CS)。CMV-CS引起花生叶片显著变小,植株严重矮化以及蚜传效率低而不同于我国花生上流行比较普遍的CMV-CA株系.

黄瓜花叶病毒M株系引致烟草症状恢复的初步研究

黄瓜花叶病毒M株系在白肋烟上具有典型的症状恢复现象,本研究用提纯病毒和DAS-ELISA建立了CMV-M病毒定量检测方法。研究发现,症状严重程度与叶片中的病毒浓度呈正相关:最早发病的黄化叶每克病组织中病毒可高达790μg,而恢复叶片上部再发病的花叶症状病叶中每克病组织中病毒也可高达508μg,恢复叶片中病毒含量很低,每克叶片中最高也没有超过6μg,仅为发病叶片病毒浓度的1/85～1/135,远低于根和茎中的病毒浓度。RT-PCR和生物学检测结果表明恢复叶片中确实存在具侵染活性的病毒,而且病毒在长达半个月以上一直保持很低浓度。结果表明恢复叶中可能存在有效的病毒防御机制,其具体机理有待进一步研究。

核酸酶保护试验在黄瓜花叶病毒株系鉴定中的初步应用

采用黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）亚组Ⅰ株系Ｆｎｙ－ＣＭＶＲＮＡ＿２的１２０９～１６２６核苷酸片段和亚组Ⅱ株系Ｌｓ－ＣＭＶＲＮＡ＿２的２００２～２４３３核苷酸片段的ｃＤＮＡ克隆，体外转录，同时掺入￣（３２）Ｐ获得负链ＲＮＡ探针，与纯化的番茄和甜椒上的ＣＭＶ中国分离物的ＲＮＡ杂交，结果表明：ＣＭＶ番茄和甜椒中国分离物与Ｆｎｙ－ＣＭＶ的核苷酸有高度同源性，隶属于Ｆｎｙ－ＣＭＶ为代表的亚组Ⅰ株系。并利用Ｋ－ＣＭＶ株系（亚组Ⅰ，源于中国）的ＲＮＡ＿２全长ｃＤＮＡ克隆的两个ＥｃｏＲＩ位点间的核苷酸序列（１６５７～２１２５ｎｔ）作探针，与上述两种ＣＭＶ中国分离物的ＲＮＡ杂交，进一步比较分析了这两个分离物和Ｋ－ＣＭＶ株系的关系。讨论了核酸酶保护法在ＣＭＶ株系鉴定中的作用。

苏浙部分地区黄瓜花叶病毒（CMV）株系群划分初探

将苏浙部分地区蔬菜的２９个ＣＭＶ分离物接种鉴别寄主的反应初步归纳为４个株系群；其中株系群Ⅳ寄主范围最广，分离物数占总数５５．２％，且体外稳定性及蚜虫传毒率均高，这就为上述地区的蔬菜抗病育种和田间病毒病防治提供了依据。

黄瓜花叶病毒两株系的生物学、血清学及外壳蛋白基因序列比较

对从豌豆和赤豆分离的黄瓜花叶病毒P1和RB分离物的生物学、血清学及外壳蛋白(CP)基因序列进行了比较。两分离物在豆科的豌豆、蚕豆、豇豆和菜豆上的症状完全不同,P1为系统症状,而RB为局部枯斑,因此将P1和RB分别定名为豆科系统感染株系和豆科局部坏死株系。血清学反应表明P1和RB均属亚组Ⅰ。CP基因序列测定表明P1和RB与亚组Ⅰ的分离物核苷酸同源率在94％以上,编码氨基酸同源率在95％以上,而与亚组Ⅱ分离物的核苷酸同源率在80％以下,编码氨基酸同源率也仅为82％～83％,进一步证明P1和RB均属亚组Ⅰ。初步分析表明P1和RB的CP基因与这些分离物在豆科植物上的症状反应差异无关。

黄瓜花叶病毒分离物核酸酶保护试验(RPA)方法的株系分化研究

采用黄瓜花叶病毒((CMV)亚组Ⅰ株系Fny—CMV及亚组Ⅱ株系Ls—CMV的RNA2的特定序列片段的cDNA克隆,体外转录,同时掺入32P标记制备负链RNA探针,再与纯化的甜椒上的CMV中国分离物的RNA进行杂交,检测其与探针之间的同源性。共检测样品分离物3份。试验结果表明:河南新乡和北京密云的CMV甜椒分离物与Fny-CMV的核苷酸有高度同源性,隶属于Fny-CMV为代表的亚组Ⅰ株系。来自福建的样品与亚组Ⅱ的Ls-CMV株系有高度同源性,隶属于 CMV亚组Ⅱ株系。本试验同时利用源于我国CMV亚组Ⅰ的K株系的RNA2两个EcoR Ⅰ位点间1657-2125 nt的核苷酸序列为探针,同样与以上3份CMV中国分离物进行RNA杂交,进一步比较分析了这几个分离物与我国亚组Ⅰ的K-CMV 株系的关系,证明了我国CMV存在亚组与株系分化。

黄瓜花叶病毒弱株系CMVP_1卫星RNA的cDNA合成、克隆及序列分析

黄瓜花叶病毒弱株系ＣＭＶＰ_１卫星ＲＮＡ的ｃＤＮＡ合成、克隆及序列分析周雪平，刘勇，薛朝阳，李德葆（浙江农业大学生物技术研究所，杭州３１００２９）ＣｌｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓａｔｅｌｌｉｔｅＲＮＡｇｅｎｅｏｆｃｕｃｕｍｂｅ?..

黄瓜花叶病毒M株系全序列测定

在定向克隆和序列分析试验中,白肋烟(Nicotiana tabacumcv.white Burley)为繁殖寄主,根据美国NCBI核酸数据库中CMV基因组RNA1,RNA2和RNA3基因序列,共设计3对特异性引物。对3对特异性引物进行PCR扩增,分别得到3.3 kb的RNA1、3.0 kb的RNA2和2.2 kb的RNA3 PCR扩增产物。M-CMV基因组cDNA经过序列测定,3条链的长度分别为:M-CMVRNA1全长3 361 bp,分子量为111 kDa的1a蛋白;RNA2全长3 037 bp,含有两个分子量为96.7 kDa的2a蛋白和分子量为13.1 kDa的2b蛋白;RNA3全长2 215 bp,分别编码分子量为30.5 kDa的3a蛋白和分子量为24 kDa的外壳蛋白(cp)。这是继国内CMV-CD、CMV-CA全序列报道之后的首次M-CMV全序列分析,为以后采用基因突变、置换方法观察寄主的症状变化做了前期工作。

不同蚜虫对黄瓜花叶病毒(CMV)亚组Ⅰ、Ⅱ分离物传播效率比较研究

采用北京地区发生的5种主要蚜虫桃蚜、棉蚜、萝卜蚜、豆蚜、修尾蚜,对黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ、Ⅱ的两个分离物YQ和ZL进行了室内蚜虫传毒效率比较研究。同时,在田间露地栽培条件下,混合投放了5种蚜虫,研究了它们对亚组Ⅰ、Ⅱ病毒传播效率的差别。结果表明,不同种类的蚜虫对亚组Ⅰ、Ⅱ病毒YQ和ZL的室内传毒效率有不同的偏向,而多种蚜虫混合投放于田间时,这些蚜虫对CMV亚组Ⅱ病毒ZL的田间综合传播效率显著高于对亚组Ⅰ病毒YQ的传播效率。

侵染烟草的黄瓜花叶病毒株系分化研究

根据已报道的黄瓜花叶病毒（CMV）外壳蛋白（CP）基因序列合成1对引物，对侵染烟草的黄瓜花叶病毒贵州分离物的病毒外壳蛋白基因进行基因扩增和序列分析。结果表明：40个CMV贵州分离物和CMV株系亚组ⅠB系列CP基因核苷酸相似性为95.1%~100.0%，与CMV株系亚组ⅠA系列CP基因核苷酸相似性为92.3%~98.2%，亚组ⅡCP基因核苷酸相似性为78.2%~80.5%。表明贵州CMV分离物与CMV株系亚组ⅠB系列同源性关系更密切，因而它们都属于CMV株系亚组ⅠB系列。

黄瓜花叶病毒研究进展

介绍了近年来对黄瓜花叶病毒 (CMV)在生物学特性、血清学特性、基因组研究、卫星 RNA以及该病毒的防治等方面的最新研究进展 .此外 ,由于黄瓜花叶病毒株系众多 ,其株系的划分和分类对研究致病机理和各个株系之间的关系具有重要的作用 ,重点介绍了根据生物学。