多位点序列分型应用于致病性黄疸出血群钩端螺旋体分析

目的初步探讨MLST(multilocus sequence typing)分型技术在致病性钩端螺旋体中的应用。方法对我国3个省份的39株致病性钩端螺旋体黄疸出血群菌株提取DNA,采用7个位点进行PCR扩增、序列测定,应用eBURST和BioNumerics(Version5.10)软件进行分析。结果 39株菌株呈现5个ST型别,ST1为中国三省份中主要的基因型,占53.85%(21/39)。eBURST分析显示:39株菌株分为2个Clonal complexes和1个singleton,其中Group1占66.67%(26/39),Group2占20.51%(8/39),一个singleton占12.82%(5/39);BioNumerics软件聚类分析显示:39株菌株分为3个Group,与eBURST分析中的分群结构一致。MLST基因型别具有明显的地域性特征。结论 MLST方法可初步应用于致病性钩端螺旋体分子流行病学、种群结构、亲缘进化关系等研究。

改良酶免疫斑点法检测黄疸出血群钩端螺旋体抗体

目的 改良检测黄疸出血群钩端螺旋体 (IcteroheamorrhagiaeSerogroup)抗体的酶免疫斑点 (Dot—Im muoblot)试验方法并作初步应用。方法 抗原片经封闭后冻存 ,取代在检测前封闭的步骤 ,继而按常规加样、洗涤、加辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG及底物。应用此方法共检测 176例临床疑似钩端螺旋体病 (Ieptospirosis)患者。结果 176例中黄疸出血群钩端螺旋体抗体阳性共有 71例 ,阳性率为 40 %。结论 改进的方法简便、有效 。

2020-2022年湖南省鼠类钩端螺旋体病监测与菌株分型

目的初步了解湖南省钩端螺旋体病主要宿主动物鼠类的流行病学概况及分离菌株血清学和MLST基因型特征。方法2020-2022年在湖南省湘潭、涟源、双峰及浏阳4个钩体病监测点,开展鼠种构成调查、钩体分离培养、菌株鉴定工作。采用暗视野显微凝集试验(Microscopic agglutination test,MAT)对分离菌株开展血清群鉴定。利用MLST(Multilocus sequence typing)方法开展基因分型分析,分别对7个位点(glmU、pntA、sucA、tpiA、pfkB、mreA和caiB)进行普通PCR扩增、测序、序列分析。结果4个湖南钩体病监测点共捕啮齿类和食虫目动物461只,平均鼠密度为2.52%,共分离菌株56株,来源于黑线姬鼠、黄胸鼠和鼩鼱3个种类,钩体分离率是12.15%。湖南省4个监测点以黑线姬鼠为优势鼠种,占88.72%。经MAT鉴定显示:56株湖南钩体分离株隶属于黄疸出血群和澳洲群两个血清群,黄疸出血群为当地主要流行血清群,占94.64%。MLST分型结果显示:56株湖南省分离株ST型别包括ST1、ST128和ST1053个基因型,其中ST1(57.14%)和ST128(37.50%)为湖南主要流行ST型。利用BioNumerics软件进行UPGMA聚类分析显示:56株菌株被分为3个不同Clades,分别对应3个不同ST型,ST型分布在不同动物种类和地域上呈现明显差异。结论黄疸出血群、ST1和ST128为湖南省主要流行型别,初步了解湖南省钩端螺旋体病鼠类动物流行病学概况及流行菌株分子分型特征,对湖南省钩体病的防控和疫苗制备提供科学依据。

黄疸出血群钩端螺旋体MLVA分型研究

目的初步探讨MLVA（multiple—locus variable—number tandem-repeat analysis）技术在黄疸出血群钩端螺旋体基因分型中的应用。方法选取7个VNTR位点，对我国致病性钩端螺旋体黄疸出血群菌株提取基因组DNA，采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳技术检测，应用BioNumerics（Vetsion4．0）软件进行聚类分析。结果共对117株钩端螺旋体的7个VNTR位点进行了检测，聚类分析分为3个群（A群、B群、C群）28种基因型，其中A群占11．97％（14／117）、B群占0．85％（1／117）、C群占87．18％（102／117）；多态性指数介于0．0831与0．8005之间；MLVA基因型存在明显的地域性。结论MLVA分型技术可初步对钩端螺旋体进行遗传学分类鉴定，应用该技术，将在钩体病分子流行病学研究中发挥重要的作用。

1株致病性黄疸出血群钩端螺旋体病流行菌株与其同血清群疫苗株的比较基因组学分析

目的对1株致病性黄疸出血群钩端螺旋体(简称钩体)病流行菌株与其同血清群疫苗株进行比较基因组学分析。方法应用高通量测序技术对黄疸出血群钩体流行株200502(简称流行株200502)进行全基因组序列测定,并与其同血清群疫苗株56601进行比较基因组学分析;选取GenBank中已公布的包括疫苗株56601在内的9株不同基因种的代表性钩体菌株构建系统发育进化树。结果流行株200502全基因组序列全长为4543190 bp,含有编码基因3580个,其中具有直系同源簇(clusters of orthologous groups,COG)功能2192个。流行株200502与疫苗株56601基因组平均核苷酸一致性为99.2%,存在共有基因3245个,流行株200502含有特有基因242个。以疫苗株56601为参考,在流行株200502中共鉴定出2005个插入缺失(indel)和19799个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,其中编码区有8485个同义SNP位点、3484个非同义SNP位点,涉及菌株的细胞运动、信号转导机制、防御机制等相关基因。流行株200502与L.interrogans、L.noguchii和L.kirschneri 3个基因种进化亲缘性较近。结论获得了我国当前黄疸出血群流行株200502基因组的基本特征,确定了其与血清型疫苗株56601的差异,为钩体疫苗的改进提供了实验依据。

1970—2019年四川省黄疸出血群钩端螺旋体基因分型特征

目的了解四川省黄疸出血群钩端螺旋体基因分型特征,为钩体病分子流行病学调查和防治工作提供科学依据。方法采用多位点序列分型方法(Multilocus sequence typing,MLST)对四川省1970—2019年间从病人和宿主动物体内分离到的102株黄疸出血群钩体菌株进行基因分型,使用BioNumerics Version 7.6软件对MLST分型结果进行聚类分析。结果102株钩体菌分为5个ST型别,遗传相似度为20%~100%,型别为ST1、ST17、ST36、ST98、ST203,其中ST1为优势基因型,其次为ST17。通过BN软件聚类表明,102株钩体菌隶属于4个克隆群,1970—1981年间分离的22株黄疸出血群钩体包含以上5个ST型,呈多样化,1982年后分离的菌株仅含ST1和ST17型。ST1型分布范围最广泛,宿主动物类型最多。结论四川省黄疸出血群钩体菌株具备较高的遗传多样性,有潜在的感染人的风险,应加强对钩体主要宿主动物的监测工作。

犬钩端螺旋体黄疸出血群LipL32在大肠杆菌中的高效表达

本试验收集了临床发生黄疸病犬的尿液,提取基因组DNA,经16s rRNA基因PCR鉴定,表明该犬存在钩体黄疸出血群毒株感染。以该基因组DNA为模板,扩增获得lipL32基因,并对该基因进行了原核表达,结果显示该抗原在大肠杆菌中获得高效可溶性表达。该蛋白的成功制备为犬钩体的诊断及新型亚单位疫苗的研制提供了广谱候选抗原。

钩端螺旋体黄疸出血群赖株LipL41基因的克隆表达及鉴定

目的 对钩体黄疸出血群赖株LipL4 1基因进行克隆、表达及鉴定。方法 采用高保真PCR ,从我国钩体黄疸出血群赖株基因组中扩增全长LipL4 1基因片段 ,并构建原核表达系统。结果 所克隆的LipL4 1基因核苷酸和氨基酸序列与已发表LipL4 1基因序列 (GenbankL4 6 794 )同源性分别为 96 2 5 %和 98 87% ;所表达的目的蛋白经Westernblot证实为具有良好免疫反应性的广谱抗原。

上海地区犬钩端螺旋体病流行病学调查

为了调查上海地区犬钩端螺旋体病流行情况,采用显微镜凝集试验(MAT)判断犬血清抗体对应的钩端螺旋体血清型的方法,对上海地区采集到的276份犬血清样品进行钩端螺旋体流行病学调查与分析。血清学试验结果显示,阳性率为11.96%(33/276),上海地区主要流行的钩端螺旋体血清型是黄疸出血赖型、犬型、拜伦型、秋季型、澳洲型和巴叶赞型。钩端螺旋体病是由钩端螺旋体属的不同血清型致病性钩体引起的一种常见的人兽共患传染病。钩端螺旋体病存在于世界各地诸多国家,钩端螺旋体病对我国的侵害也很严重。人类和动物在感染了致病性钩端螺旋体后会表现出不同的临床症状,例如,易被忽视的流感症状,较为严重的黄疸、肺出血,甚至是多器官衰竭和死亡。

动物钩端螺旋体病流行特点与防控

1流行病学1.1病原钩端螺旋体是一种纤细、螺旋状的细菌,长度约为6~20μm,宽度约为0.1~0.2μm,分为致病性和非致病性两类,对人类和动物具有致病性的已知有22个血清群,超过300个血清型。1.2流行特点动物钩端螺旋体病在全球范围内广泛存在,几乎所有地区(除极地地区)都有该病发现。钩端螺旋体可感染多种动物,但流行的血清型数量有限,而且每种血清型往往有特定的宿主。

黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体外膜单克隆抗体免疫保护作用的探讨

作者采用黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体(钩体)外膜免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合等技术,获得单克隆抗体E4B7D5。亚类鉴定为IgG_1,凝集效价为1:25 600。被动免疫保护试验证明:将单克隆抗体E4B7D5腹水稀释100倍,给实验组豚鼠每只每天腹腔注射1ml,连续6天,能使豚鼠在接受同型017株钩体2ml(每毫升1×10~3条)的攻击后,存活率达80％,且存活20天的豚鼠处死解剖,未见任何病变;3个对照组的存活率分别为10％,20％和10％,该三组仅有4只存活20天,经处死解剖,其中 3只发现较多的陈旧性肺出血。作者认为,单克隆抗体E4B7D5对同型017株钩体有免疫保护作用。

黄疸出血群钩端螺旋体LAMP-LFB快速检测方法的建立与应用

目的基于环介导恒温扩增(LAMP)结合纳米生物传感条(LFB)技术,建立并评价黄疸出血群钩端螺旋体(钩体)的LAMP-LFB快速检测方法。方法以黄疸出血群钩体O抗原基因簇中的糖基转移酶基因(gtf)为检测靶标并设计特异性LAMP引物。通过对LAMP引物的特定标记(FIP-FAM和LF-Biotin)和优化试验,建立LAMP-LFB快速检测方法,并分析其灵敏度和特异性。应用建立的LAMP-LFB、普通PCR方法和显微凝集试验(MAT),分别对53株钩体分离菌株进行鉴定,比较分析鉴定结果并评价LAMP-LFB方法的实用性。结果灵敏度和特异性试验显示,LAMP-LFB方法可检出黄疸出血群赖型56601基因组DNA的最低浓度为100 fg/μL,检测特异性为100%,与其余血清群和非钩体菌株核酸无交叉反应。菌株鉴定结果显示,LAMP-LFB与MAT鉴定结果完全一致,符合率为100%,其敏感性高于PCR方法。此外,LAMP扩增产物经LFB验证,可直接通过观察检测线(TL)和质控线(CL)进行结果判定。结论基于gtf基因建立的LAMP-LFB检测技术方便、快捷且重复性好,可快速、灵敏、特异地鉴定黄疸出血群钩体菌株,能够作为有价值的黄疸出血群钩体菌株快速鉴别或诊断方法。

经ECMO成功救治1例重症肺出血型钩端螺旋体病

钩端螺旋体病(简称钩体病)是一种重要的自然疫源性疾病,是世界上发病率和死亡率最高的人畜共患病[1],可由不同型别的致病性钩端螺旋体引起。现总结1例由问号钩端螺旋体引起的重症肺出血型、黄疸出血型钩端螺旋体病,分析该患者的临床资料、影像学及疾病转归,重点介绍重症肺出血型钩端螺旋体病经体外膜氧合(ECMO)治疗好转的过程,以提高临床医师对于ECMO可用于早期支持弥漫性肺泡出血导致的急性呼吸衰竭的认识,提高临床救治成功率。

江油地区首次发现黄疸出血群赖型钩端螺旋体

本文报告了四川省江油市１９９５年９月，钩端螺旋体病（以下简称钩体病）暴发流行期间，首次从３３例病人血液标本检出钩体７株，阳性率为２１．２１％，分属二个血清群三个血清型、黄疸出血群黄疸出血型５株，赖型１株，七日热群棉兰型１株。培养鼠肾２２５份，检出钩体３１株（待定１株，失传１株），阳性率为１３．７８％，以黄疸出血群赖型为主要血清型，病原体带菌宿主以黑线姬鼠为主，为我市稻田型钩体病的主要传染源，携带钩体与本次钩体病暴发流行人间主要流行菌群和型一致。

蓝狐出血性黄疸钩端螺旋体病的诊治

山东省东营市积利商贸公司良种狐场蓝狐突发以短期发热后出现出血性黄疸、血尿、贫血、出血，迅速消瘦衰竭而死亡的疾病．经垦利县兽医站专家临床检查，病狐剖检及实验室诊断，确诊为蓝狐出血性黄疸钩端螺旋体病。

钩端螺旋体病黄疸出血型1例

患者 男,42岁。主因畏寒、发热2天,腹痛、血便36小时入院。患者于入院前2天因饮酒两小时后出现畏寒、发热,伴头痛、恶心、呕吐两次,非喷射性,呕吐物为胃内容物。于入院前36小时出现腹痛、黑便,后为鲜红色水样便20余次,每次量约30～50ml,伴有里急后重,腹部下坠感。同时出现烦躁、谵语,面部及双下肢散在出血点。当地拟诊为“坏死性小肠炎,中毒性休克”,