检测蚊虫感染黄病毒属病毒Real-time PCR方法的建立

目的建立SYBR Green Real-time PCR检测和筛选黄病毒属病毒方法。方法参照文献报道的通用引物,以JEV cDNA和DEN cDNA为模板,建立RT-PCR和SYBR Green Real-time PCR,检测和筛选黄病毒属病毒,并比较两者的敏感性。结果此黄病毒属引物适合两种反应体系,SYBR Green Real-time PCR方法的敏感性是RT-PCR方法的100倍,最低检出病毒浓度为0.5×10-2PFU/ml。结论建立的两种方法均可用于黄病毒属病毒检测,以SYBR Green Real-time PCR方法具有更高的敏感性,对于黄病毒属病毒初筛检测具有应用价值。

黄病毒属病毒RT-heminested-PCR方法的建立并用于蚊虫检测

目的建立适合检测蚊虫携带黄病毒属病毒通用引物反转录半巢式PCR(RT-heminested-PCR)方法。方法根据GenBank黄病毒属病毒非结构蛋白基因(nonstructuralproteins gene)NS5序列,在保守区设计2对(3条)黄病毒属病毒通用引物,以日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)cDNA、登革病毒(Dengue virus,DENV)Ⅰ～Ⅳ型cDNA为模板优化条件建立RT-heminested-PCR方法;以日本脑炎病毒减毒活疫苗(SA14-14-2strain)测定该方法的敏感度,并用于野外采集蚊虫检测。结果在50只淡色库蚊中RT-heminested-PCR方法检测减毒活疫苗JEV最低检出浓度为1×10-2 PFU/mL。用该方法检测云南省普洱市采集的54组(540只)蚊虫,扩增产物经测序确认9组含有乙型脑炎病毒﹑3组含有登革病毒II型﹑1组含有登革病毒I型﹑1组含未报道的黄病毒属病毒,该病毒与Quang Binh virus同源性最高。结论黄病毒属病毒通用引物RT-heminested-PCR方法适合于蚊虫种群黄病毒属病毒监测。其不但适应已知黄病毒属病毒的检测,而且具备检测新型黄病毒属病毒的潜能。

黄病毒属病毒感染性克隆的构建及应用

黄病毒属病毒感染性克隆的构建为探讨黄病毒致病机制和研究基因结构功能,新型疫苗制备,表达载体构建,假病毒包装等提供了新的技术平台。笔者对黄病毒属病毒感染性克隆的构建策略、方法及应用综述如下。

黄病毒属病毒复制子载体研究进展

RNA复制子是一种能自主复制的RNA载体,保留了病毒非结构蛋白(复制/转录酶)基因,而结构蛋白基因缺失或由外源抗原基因替代,复制/转录酶可控制载体RNA在细胞质中高水平复制以及外源基因的高水平表达。在黄病毒属病毒感染性克隆基础上,其复制子载体得到了成功的构建。黄病毒属病毒复制子为病毒基因组结构功能研究、表达载体构建、假病毒包装及新型疫苗制备等提供了新的技术平台。本文综述黄病毒属病毒复制子的构建原理、方法及应用。

黄病毒属虫媒病毒减毒疫苗研究新进展

黄病毒属虫媒病毒多为新发突发传染病的病原体,已在全球引发多起突发公共卫生事件,对人类健康构成严重威胁。减毒疫苗是黄病毒属虫媒病毒最有效的疫苗类型,通过连续细胞传代筛选的黄热病病毒和乙型脑炎病毒减毒疫苗对预防这两种黄病毒感染发挥了重要作用。近年来,利用病毒反向遗传学技术对黄病毒基因组进行定点改造以获得减毒表型,在黄病毒属虫媒病毒疫苗研制中取得重要进展。本文就黄病毒属虫媒病毒减毒疫苗的历史和研究现状进行综述。

腺病毒载体的黄病毒属病毒疫苗研究进展

黄病毒属病毒有70多种,包括寨卡病毒(ZIKV)、登革病毒(DENV)和乙型脑炎病毒(JEV)等,已知其中超过33种病毒能够感染人类。已批准上市的黄病毒属病毒疫苗只有3种,大部分黄病毒属病毒仍缺乏安全有效的疫苗。腺病毒载体疫苗具有安全性高、成本低、便于储存和运输等优势。目前,已有2个腺病毒载体ZIKV疫苗进入早期临床试验,登革病毒、乙型脑炎病毒、西尼罗病毒和黄热病毒的腺病毒载体疫苗尚处于动物实验阶段。腺病毒载体黄病毒属病毒疫苗的研发还存在腺病毒的预存免疫、腺病毒载体免疫原性不足,以及黄病毒属病毒之间抗体依赖增强效应等问题。本文检索2006年1月—2023年6月发表的国内外相关文献,对腺病毒载体黄病毒属病毒疫苗研究现状和面临的挑战及其解决方案进行综述,为该类疫苗研发提供参考。

单克隆抗体2A10在蛋白芯片技术检测黄病毒属病毒中的应用

目的 本研究拟探讨1株黄病毒属特异的单克隆抗体2A10作为检测抗体在同时检测5种黄病毒属病毒的蛋白芯片中的应用价值.方法 将病毒的特异性单抗作为捕获抗体进行点样,制备用于检测5种黄病毒属病毒的抗体芯片,然后分别加入拟检测的病毒灭活抗原,捕获病毒颗粒后,加入荧光染料CY3标记的2A10检测抗体进行孵育,通过扫描并分析芯片上不同抗体的荧光强度,确定2A10检测抗体的效价和可检测的病毒滴度,并对2A10的检测效果进行评价.结果 蛋白芯片检测结果表明,2A10可作为检测抗体用于对5种黄病毒属病毒的检测,CY3标记的2A10效价为1∶160,以脾传脑炎（TBE）病毒为例,可检测的病毒滴度为1250 PFU.结论 单克隆抗体2A10作为一株黄病毒属特异的单抗,可以用于蛋白芯片技术检测黄病毒属病毒.

黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法建立

目的建立用于检测黄病毒属的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法。方法从GenBank中检索黄病毒属代表株的全基因序列,通过DNAstar进行序列比对和blast进行保守序列搜索和分析,用Beacon Designer 7.0软件进行引物和TaqMan探针设计,以乙脑毒株MB090509 RNA为模板,优化反应条件并应用于现场蚊虫标本检测。结果确定黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR反应条件为:45℃15 min,95℃10 min,95℃10 s→54℃45 s,40次循环,引物和探针终浓度为200 nmol/L。灵敏度为常规RT-PCR方法 100倍,检出限2.9×10-3噬斑形成单位(PFU)/mL,与甲病毒属、东南亚十二节段RNA病毒属、布尼亚病毒属均无交叉反应。从161份现场蚊虫标本中检测出11份阳性标本,经病毒分离、测序均被证实为乙脑病毒。结论本研究建立的黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法具有广泛应用价值。

黄病毒属嵌合疫苗研究新进展

黄病毒属所引起的病毒病迄今仍无特效的治疗方案,亟需发展新型疫苗用于预防。其中,登革四价嵌合疫苗虽成功上市,但因安全性等问题,现已被限制使用。乙脑、寨卡的嵌合疫苗还在积极研制中。本研究综述了现阶段三种病毒的流行趋势及其嵌合疫苗的研究状况。

埃及伊蚊对重要黄病毒易感性研究概况（一）

埃及伊蚊Aedesaegypti是黄热病（Yellowfever，YF）和登革热的主要传播媒介，分布于世界各地。我们就埃及伊蚊种群遗传、媒介感受态的生理遗传、蚊与黄病毒相结合的受体、环境因素对虫媒病毒传播的影响、埃及伊蚊对黄病毒媒介感受态变化、绘制控制埃及伊蚊对黄病毒媒介感受态的基因图、埃及伊蚊媒介感受态遗传、鉴定控制埃及伊蚊媒介感受态的基因等方面的研究，做出综述。以加强下列关键问题：Aedesaegypti种群当中媒介感受态多少变化归因于遗传效应，环境因子引起变化如何。在这些遗传位点等位碱基，如何决定感受态？如何探索遗传和环境成分影响自然种群内媒介感受态。

瘟病毒属3种病毒多聚蛋白酶基因同义密码子偏爱性分析

【目的】分析黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和羊边界病毒(BDV)3种病毒多聚蛋白酶基因密码子的使用特点,初步探讨3种病毒多聚蛋白酶基因的进化及对不同宿主的适应策略。【方法】运用EMBOSS软件的CHIPS和CUSP程序及CodonW在线分子生物学软件,分析CSFV、BVDV和BDV的有效密码子数(ENc),碱基GC含量(Gcall),密码子第1、2、3位GC含量(GC1、GC2、GC3),相对同义密码子使用度(RSCU)及同义密码子第3位的GC含量(GC3s),并对3种病毒多聚蛋白酶基因的ENc进行绘图分析。【结果】CSFV、BVDV、BDV 3种病毒多聚蛋白酶基因的ENc值分别为51.205,51.323和52.580,表明3种病毒多聚蛋白酶基因的密码子偏好程度均较低;上述3种病毒多聚蛋白酶基因的GC含量分别为46.84%,45.99%和45.71%,均不超过50%;除BDV多聚蛋白酶基因同义密码子含量表现为GC1>GC3>GC2外,CSFV和BVDV均表现为GC3>GC1>GC2,且除CSFV的GC3为52.02%外,所有病毒的GC1、GC2、GC3均小于50%,可见3种病毒间的碱基组成(GC含量)及ENc值差异较小。RSCU分析表明,与CSFV偏爱使用G/C结尾的密码子不同,BVDV和BDV更偏爱使用以A结尾的密码子,这可能与病毒对宿主的适应策略有关。ENc绘图分析(Nc-plot)说明,碱基组成对密码子使用模式影响较小。【结论】CSFV、BVDV、BDV 3种病毒多聚蛋白酶基因密码子的偏好性较低,这可能是病毒进化过程中对宿主的一种适应策略。

慢性丙型肝炎病毒感染治疗进展及展望

丙型肝炎病毒（hepatiti C virus,HCV）为单股正链RNA病毒,黄病毒属,人群普遍易感.主要传然源是丙型肝炎患者,主要传播途径有血液传播、性传播、母婴传播等.目前尚无针对HCV特异性预防疫苗,80%HCV感染者会转变为慢性感染.慢性HCV感染具有隐匿性、进展性等特点,30～50年后可能进展为肝硬化或者肝癌.在发生率或流行率持续维持高水平的国家中,由于HCV导致的相关性肝硬化及肝细胞癌患者人数逐年增加,给患者家庭乃至整个社会带来非常沉重的负担.

福建省丙型肝炎病毒感染的首次调查报告

1989年Choo等首先成功地从受慢性NANBH感染的黑猩猩血浆标本克隆了丙型肝炎病毒(HCV)_cDNA;它是一种与黄病毒属和温病毒属关系密切的单股正链RNA病毒;为了解丙型肝炎在我省的感染情况,我们从1990年初至1991年2月在福州市传染病医院逐月采集首次肝功异常的急性病毒性肝炎住院患者131例的血清进行了调查研究,现将结果报告如下。