黄皮叶黄酮类化合物的抗氧化性研究

【目的】研究黄皮叶黄酮类化合物的抗氧化性,为黄皮叶的开发利用提供参考依据。【方法】采用邻苯三酚自氧化法、水杨酸法和硫代硫酸钠滴定法,分别测定黄皮叶黄酮类化合物对超氧阴离子自由基、羟自由基的清除率以及油脂的过氧化值,探讨黄皮叶黄酮类化合物的抗氧化性。【结果】黄皮叶黄酮类化合物对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除作用均呈正相关,当其浓度达0.12 mg/mL时,对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除率均超过50.0%;黄皮叶黄酮类化合物对油脂的抗氧化性随着黄酮浓度的增加而增强。【结论】黄皮叶黄酮类化合物具有清除超氧阴离子自由基、羟自由基的作用,同时具有良好的抗油脂氧化活性,开发利用市场前景广阔。

黄皮叶提取物对食品中常见致病菌抑菌作用研究

研究黄皮叶化学成分和抑菌作用。采用纸片扩散法对黄皮叶不同溶剂提取物进行初步抑菌试验,在此基础上采用纸片扩散法和稀释法对乙醇提取物进行抑菌试验,并对乙醇、石油醚提取物进行化学成分的预试验。结果显示,乙醇提取物中含有较多的生物碱、有机酸、香豆素、黄酮和酚类等;石油醚提取物中主要含有挥发油、甾体和萜类等物质。不同溶剂提取物对常见病原菌的抑菌效果为乙醇>石油醚,而水提物则无抑菌效果。黄皮叶乙醇提取物对食品中常见致病菌均有较强的抑菌效果。其最低抑菌浓度分别是:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均为<4mg/mL、啤酒酵母<8mg/mL。表明乙醇提取物对4种常见病原菌的抑菌效果显著。

黄皮叶不同溶剂提取物抗过敏活性研究

研究了黄皮叶的化学成分和抗过敏活性,用不同溶剂提取黄皮叶活性成分,并进行化学成分预实验和HPLC分析,通过透明质酸酶抑制实验法评价其抗过敏活性,并对水提物抗过敏活性的剂量-效应关系进行分析。结果显示,提取物中含有酚类、黄酮、生物碱、有机酸、香豆素等成分。水和乙醇提取物对透明质酸酶的抑制率分别为89.3%和75.3%,石油醚提取物没有抑制作用。纯化物A1和B1的抑制率分别为92.6%和95.9%,且B1在0.5～8.0mg/mL浓度范围内,随浓度增加,抗过敏作用加强,呈明显的剂量-效应关系。与广西甜茶相比,抗过敏活性明显高于甜茶。HPLC分析显示,抗过敏主要成分为酚类和黄酮。

微波辅助提取黄皮叶黄酮类化合物及其种类初步鉴别

【目的】研究黄皮叶黄酮类化合物的提取工艺条件及鉴别其黄酮种类,为黄皮叶的开发利用提供依据。【方法】采用微波辅助提取黄皮叶黄酮类化合物,通过单因素试验及正交试验优化乙醇浓度、浸提温度、微波功率和微波时间等提取参数,同时还对黄皮叶黄酮类化合物进行初步鉴别。【结果】对黄皮叶黄酮类化合物提取率影响较大的因素是乙醇浓度和浸提温度,其最佳提取工艺为:乙醇浓度75%、固液比1∶20、浸提温度55℃、浸提时间1.5h、微波功率160W、微波时间40s,该提取工艺条件下,黄皮叶总黄酮类化合物提取率达3.28%,比常规方法高0.27%(绝对值)。通过颜色反应鉴别,初步确定黄皮叶提取液中黄酮的种类主要为双氢黄酮、查尔酮和黄酮醇等。【结论】以微波辅助提取黄皮叶黄酮类化合物具有操作简单、成本低、用时短、稳定性好等特点,值得开发利用。

广西黄皮叶挥发油化学成分GC-MS分析研究

目的:对广西黄皮叶挥发油进行气相-质谱研究。方法:利用水蒸气蒸馏法提取广西黄皮叶挥发油,采用气相色谱-质谱联用法鉴定化学成分,归一化法测定各成分相对含量。结果:从广西黄皮叶挥发油中共分离出40多个组分,鉴定了其中32个化合物,占总量的90%以上,主要成分为石竹烯(25.31%)、石竹烯氧化物(14.86%)、β-红没药烯(8.95%)、斯巴醇(8.88%)、柏木-8(15)-烯-9-醇(7.54%)、α-法呢烯(6.51%)等,并鉴定出12种文献未见报道的组分。结论:广西黄皮叶挥发油中含倍半萜醇类、倍半萜烯类及其含氧衍生物等多种化学成分,本试验为广西黄皮叶的进一步开发利用提供了科学依据。

超声波辅助法提取细叶黄皮叶总黄酮及其清除羟自由基活性的测定

对超声波法提取细叶黄皮叶中黄酮类物质进行了研究,通过单因素及L9(34)正交实验,最佳提取工艺条件为A1B3C3D3,即:温度60℃,乙醇浓度60%,超声波功率90 W,料液比1∶25,提取时间70 min。此条件下细叶黄皮叶总黄酮提取率达5.730%。在设置的5个质量浓度梯度下,总黄酮提取液对羟自由基的清除效果与其质量浓度呈正相关,当样品质量浓度为0.694 g/L时,其清除率达49.1%。

黄皮叶提取物对TNF-α分泌的影响及其机制

目的:探索黄皮叶提取物对TNF-α的影响及对TNF-α蛋白调控是否通过TLR4/My D88/TRAF6信号通路。方法:ELISA法检测TNF-α含量;MTT试验检测黄皮叶提取物和LPS对RAW264.7细胞抑制率的影响;对细胞随机分组,Western Blot法检测分组后TLR4、TRAF6蛋白表达。结果:黄皮叶提取物、LPS对细胞生长无明显抑制;黄皮叶提取物使TNF-α水平降低;与LPS组比较,LPS+My D88抑制剂组、LPS+黄皮叶提取物组、LPS+黄皮叶提取物+My D88抑制剂组明显抑制TNF-α分泌,差异有统计学意义(P<0.05),分别使TLR4和TRAF6蛋白降低至74%、21%,70%、27%,44%、8.5%。结论:黄皮叶提取物抑制TNF-α形成并主要介导TLR4/My D88/TRAF6信号通路中My D88依赖信号通路抑制TNF-α形成。

黄皮叶萃取物镇咳、祛痰及平喘作用研究

目的研究黄皮叶不同溶剂萃取物的镇咳、祛痰、平喘作用。方法 (1)将60只小鼠随机分为正常组、枸橼酸喷托维林组、石油醚萃取物组、二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物组及水提物组,给予相应药物灌胃7d,用浓氨水引咳,观察小鼠咳嗽潜伏期及2min内咳嗽次数。(2)将另60只小鼠随机分为正常组、氯化铵组、石油醚萃取物组、二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物组及水提物组,灌胃相应药物7d后采用腹腔注射5%酚红溶液,观察小鼠气管酚红排泌量。(3)70小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、石油醚萃取物组、二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物组及水提物组,于第1、7、14天腹腔注射卵蛋白致敏液;第18～22天给予相应药物灌胃,并用卵蛋白溶液雾化激发,观察哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及细胞分类计数。结果 (1)与正常组比较,石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物能延长小鼠咳嗽潜伏期并减少2min内咳嗽次数,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)与正常组比较,二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物及水提物能增加小鼠气管酚红排泌量,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)与模型组比较,石油醚萃取物能减少哮喘小鼠BALF液中白细胞总数、嗜酸性粒细胞比例及中性粒细胞比例,差异有统计学意义(P<0.01)。结论黄皮叶萃取物具有明显的镇咳、祛痰及平喘作用。

气相色谱-质谱联用对海南产黄皮叶挥发油成分分析

目的:研究海南产黄皮叶挥发油的化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法提取黄皮叶挥发油,运用气相色谱-质谱联用技术对黄皮叶挥发油成分进行分析,并采用峰面积归一化法确定各成分的相对百分含量。结果:共分离出41个峰,分析鉴定了其中的39种成分,所鉴定的成分占挥发油总量的98%以上,其中相对质量分数较高的成分有β-石竹烯(44.721%)、α-石竹烯(23.236%)、α-葎草烯(6.050%)、石竹烯氧化物(5.511%)、橙花叔醇(3.635%)等。结论:海南产黄皮叶挥发油中主要成分为倍半萜及其氧化物,主要成分为β-石竹烯,与其他产地黄皮叶挥发油成分及含量方面存在一些差异。

黄皮叶超声提取物的抑菌性能研究

利用超声回流法获取不同溶剂(水、乙酸乙酯、无水乙醇、丙酮、环己烷)的黄皮叶提取物,选用滤纸片扩散法进行抑菌试验、二倍稀释法测定最小抑菌浓度,研究黄皮叶提取物对十种微生物的抑制作用.结果表明:乙酸乙酯、无水乙醇、丙酮提取物对供试的细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色葡萄球菌、四联微球菌、蜡状芽孢杆菌)有明显抑菌效果.乙酸乙酯提取物对大肠杆菌、白色葡萄球菌的最小抑菌浓度为3.2 mg/mL;对金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为6.3 mg/mL;对四联微球菌的最小抑菌浓度是12.5 mg/mL.乙酸乙酯提取物抑菌性受温度、pH影响较大,受光照影响不明显.各种溶剂的超声提取物对供试真菌(黑曲霉、青霉、根霉、白色念珠菌)均无抑菌效果.该研究结果为开发利用黄皮叶的防腐、抑菌作用提供参考.

GC-MS法分析黄皮叶和假黄皮叶中挥发油成分的差异

目的:分析黄皮叶和假黄皮叶中挥发油成分的差异。方法:通过水蒸气蒸馏法分别提取黄皮叶和假黄皮叶中的挥发油。然后采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术进样分析获得总离子流图,采用HPMSD化学工作站对总离子流图中各色谱峰进行质谱扫描后,通过检索比对图谱库NIST Version 1.7鉴定两种药材中挥发油的化学成分,并采用峰面积归一化法计算各成分的相对质量分数。结果:从黄皮叶、假黄皮叶挥发油中分别鉴定出了43、31个成分,相对质量分数总和分别为97.59%、98.57%。其中,相对质量分数超过1%的成分分别有19、18个,均主要为倍半萜类;相对质量分数超过5%的挥发油成分分别有7、5个,在黄皮叶挥发油中主要以(-)-斯巴醇(12.35%)和(E)-5-{(1R,3R,6S)-2,3-二甲基三环[2.2.1.02,6]庚烷-3-基}-2-甲基戊-2-烯醛(14.70%)为主,在假黄皮叶中主要以(E)-倍半水合桧烯(24.94%)和1-(1,5-二甲基-4-己烯基)-4-甲基-苯(16.15%)为主。两者中共有挥发油成分4个,分别为α-蛇麻烯、(E)-5-{(1R,3R,6S)-2,3-二甲基三环[2.2.1.02,6]庚烷-3-基}-2-甲基戊-2-烯醛、石竹烯氧化物和(-)-斯巴醇,两者中共有成分含量差异均不大。结论:黄皮叶和假黄皮叶挥发油中成分类型基本相似,但具体成分组成和含量差异较大,不可相互替代使用。

黄皮叶中5种重金属元素的含量测定

黄皮叶药材经硝酸－高氯酸（10＋2）湿法消解后，采用原子吸收分光光度法测定铜元素含量，采用原子荧光法测定砷、汞、铅、镉元素的含量，建立了黄皮叶药材中5种重金属元素的含量测定方法，并测定了不同产地及批次黄皮叶药材中这5种元素的含量。5种元素回收率在94．25％～104．1％之间，8批黄皮叶中铜、砷和铅元素含量均低于国家限量标准，部分产地和批次药材中的重金属汞、镉元素含量高于国家限量标准。

黄皮叶的生药学研究

对黄皮(Clausena lansium)叶进行了性状、显微组织及理化鉴别研究,为其质量标准的制定提供了资料.

响应面优化黄皮叶中的活性因子超声提取工艺及其抗氧化活性研究

目的优化黄皮叶中活性因子总黄酮的超声提取工艺条件,并测定其抗氧化活性。方法以乙醇体积分数、超声时间及料液比为影响因子,以黄皮叶总黄酮得率为评价指标,在单因素试验基础上,采用响应面法优选黄皮叶总黄酮超声提取工艺,并测定黄皮叶总黄酮体外清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-1-picryl hydrazyl,DPPH)自由基、羟自由基和总抗氧化的活性。结果黄皮叶总黄酮的最佳提取工艺条件为乙醇体积分数18%、超声时间73 min、料液比31∶1(m L/g)。在此条件下,黄皮叶总黄酮得率达到(1.300±0.006)%。黄皮叶总黄酮得率大小的主次因素为乙醇体积分数>超声时间>料液比,其中超声时间与料液比因素之间的交互作用显著。黄皮叶总黄酮体外清除DPPH和羟自由基的IC50值分别为0.282 mg/m L、1.152 mg/m L,用三价铁还原抗氧化能力(ferric-reducing antioxidant power,FRAP)法测得1 mg/m L黄酮的FRAP值为533.3μmol/L。结论该所选工艺合理、可行,可用于黄皮叶总黄酮的超声提取;三种测定方法均说明黄皮叶总黄酮在一定浓度下有抗氧化活性。

响应面分析法优化黄皮叶中生物碱的提取工艺研究

优化了黄皮叶中提取生物碱的工艺条件。在超声波辅助条件下,采用响应面分析法,以超声时间(A)、料液比(B)、溶媒浓度(C)等为主要影响因素,获得最佳提取工艺条件。结果表明:在超声时间49 min,料液比1∶14,溶媒浓度5.67%的条件下,黄皮叶中生物总碱的提取率为:0.3560%。最佳提取工艺条件可用于指导生产中黄皮叶生物总碱的提取,其超声时间(A)、料液比(B)、溶媒浓度(C)等对生物总碱提取率的相互影响关系式为:Y=-1.31604+0.047721A+0.0377930B+0.083515C-1.85000E-005AB-1.24000E-004AC-4.46000E-004BC-4.73500E-004A2-1.25900E-003B2-6.27200E-003C2。

黄皮叶提取物滴丸的制备及初步稳定性评价

目的：制备黄皮叶提取物滴丸并考察其稳定性。方法：以滴丸的圆整度、丸重差异、溶散时限为评价指标,采用L9（34）正交实验法优选滴丸最佳制备工艺,通过影响因素实验考察滴丸的稳定性。结果：优选的滴丸制备工艺为：基质为PEG6000,药物与基质比例为1∶3,料液温度为70℃-80℃,冷凝液温度为10℃-15℃;影响因素实验结果表明,黄皮叶提取物滴丸中槲皮素含量受到湿、热因素影响较大。结论：黄皮叶提取物滴丸制备方法简单、重复性好,所制备滴丸的圆整度、丸重差异及溶散时限均符合2015版中国药典第四部通则滴丸剂项下要求,稳定性实验提示应低温干燥避光保存。

黄皮叶总黄酮的提取及鉴别

目的:探究黄皮叶总黄酮的提取及鉴别方法。方法:采用纯物理的工艺操作流程和紫外可见分光光度法提取黄皮叶中的黄酮类物质,并对该物质进行鉴别验证。结果:样品中总黄酮的含量C=3.83%,回收率为89.98%。结论:实验过程全物理化,无化学变化及污染产生,提取率较高,是提取黄皮叶黄酮类物质的可靠途径。

HPLC法测定黄皮叶醇提取物中芦丁的含量

目的：建立黄皮叶醇提取物中芦丁的含量测定方法,为黄皮叶的开利用发提供参考。方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（150mm×4.6mm,5μm）,甲醇-水-乙腈-冰乙酸（20∶60∶10∶1）为流动相,流速1mL/min,柱温25℃,检测波长360nm。结果：芦丁在0.801 6-4.00 80μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9）,平均回收率为97.6%,RSD为1.5%（n=6）。结论：该方法结果准确度高,精密度好,可用于黄皮叶醇提取物中芦丁的含量测定。

黄皮叶总黄酮的含量测定及其抗氧化活性研究

目的建立黄皮叶中总黄酮的质量分数测定方法,并考察其体外抗氧化活性。方法以芦丁为对照品,采用Al(NO_3)_3·9H_2O-NaNO_2显色法及紫外-可见分光光度法测定黄皮叶总黄酮的质量分数,FRAP(Ferric ion reducing antioxidant power)法对黄皮叶黄酮类成分的抗氧化活性进行评价。结果方法学考察结果符合定量要求,芦丁质量浓度在8~64μg/m L的范围内与吸光度线性关系良好(r=0.999 1),平均回收率为99.9%,RSD为1.9%(n=6)。黄皮叶总黄酮的抗氧化能力相当于0.1~0.3 mg/m L的维生素C溶液。结论建立的质量分数测定方法简单快速、重复性良好、结果准确可靠,可用于黄皮叶的质量控制;黄皮叶总黄酮提取液具有良好的抗氧化作用,具有开发成新的天然抗氧化剂的广阔前景。