黄精皂苷与多糖超声辅助提取工艺优化及降血糖活性研究

目的:以黄精为原料,开发高效协同提取黄精皂苷(Polygonatum sibiricum sponins,PSSs)和多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharides,PSPs)的工艺,并考察提取物及其复合物对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性。方法:采用超声波法辅助复合酶解提取PSSs和PSPs,考察超声料液比、超声时间、超声温度、酶解时间、酶添加量、酶解料液比、热水提取温度及热水提取时间等因素对PSSs、PSPs得率的影响,并利用Box-Behnken试验进行优化。结果:PSSs和PSPs的最佳协同提取工艺条件为超声温度50℃,超声时间50 min,超声料液比1∶25(g/mL),酶解时间2 h,酶添加量3053 U/g,酶解料液比1∶25(g/mL),热水提取温度80℃,热水提取时间1 h,此条件下,两步提取PSSs总得率为12.22%,PSPs得率为27.07%;PSSs和PSPs对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性均具有抑制作用,且二者复合后仍具有较好的抑制作用。结论:经优化后获得了黄精皂苷和多糖高效协同提取的工艺条件,且与单一组分相比,二者复合后降血糖活性有所提高。

黄精皂苷对慢性应激抑郁大鼠大脑皮层5-HT_(1A) R-β-arrestin2-akt信号通路的影响

目的探讨黄精皂苷(SRP)对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响及部分机制。方法 60只SD大鼠随机均分为正常组、模型组、SRP(400、200、100 mg/kg)组和氟西汀(2 mg/kg)组。采用7种不同应激方法建立大鼠慢性应激抑郁模型,观察大鼠行为学指标变化;免疫组化法测定大脑皮层区5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)的表达;Western blot法分析大脑皮层区5-HT1AR、β-arrestin2、akt蛋白表达水平。结果应激刺激后,与正常组相比,模型组大鼠体重降低、自主活动次数减少,处于抑郁状态。免疫组化法及Western blot法结果显示,与正常组相比,模型组大脑皮层5-HT1AR表达降低,β-arrestin2、akt表达升高(P<0.05),而SRP组可以逆转这种现象(P<0.05,P<0.01)。结论中药SRP的抗抑郁作用可能与调节5-HT1AR/β-arrestin2/akt信号通路有关。

黄精皂苷对慢性应激抑郁大鼠海马5-HT1AR/cAMP/PKA信号通路的影响

目的探讨黄精皂苷(SRP)对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响及部分机制。方法 SD大鼠60只随机分为6组:正常组、模型组、SRP(100、200、400 mg/kg)组和氟西汀(2 mg/kg)组。采用不同应激方法建立大鼠慢性应激抑郁模型,观察大鼠行为学指标变化,放射免疫法测定海马环腺苷酸(cAMP)含量,免疫组化法测定海马5-羟色胺受体(5-HT1AR)、蛋白激酶A(PKA)、反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达水平。结果应激刺激后,与正常组相比,模型组大鼠自主活动次数减少,体重降低,糖水消耗减少,处于抑郁状态。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组海马5-HT1AR、cAMP、PKA、CREB表达显著降低,SRP组5-HT1AR、cAMP、PKA、CREB表达显著上调(P<0.01)。结论 SRP对慢性应激抑郁大鼠的行为学有改善作用,可能是通过调节5-HT1AR/cAMP/PKA/CREB信号通路发挥抗抑郁作用。

抗黄精皂苷多克隆抗体的制备

首先将薯蓣皂苷通过3-羟基位的改造,制成3-琥珀酰薯蓣皂苷,再通过碳二亚胺将其与牛血清白蛋白和卵清蛋白偶联制成免疫原和包被原,免疫新西兰大白兔制备出多克隆抗体,抗体效价为1∶12800,为进一步建立黄精皂苷ELISA方法打下基础。

酶联免疫吸附法检测黄精皂苷

利用效价为1：12800（方阵滴定法测得）的兔抗薯蓣皂苷多克隆抗体，建立黄精皂苷酶联免疫吸附（ELISA）检测方法。抗体的最佳稀释度为1：3000，包被抗原的最佳稀释度为1：10000；回归方程I=32.021 logC＋189．02，相关系数R^2=0．9974，最低检测下限I10为2．468×10^-3μg/mL。回收率为80．33％～103.88％，与人参皂苷和强心苷的交叉反应率分别为3．24％和7．48％。测得黄精总皂苷质量分数为0．1366％。

黄精皂苷对糖尿病肾病大鼠肾损伤的保护作用及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨黄精皂苷对糖尿病肾病大鼠肾损伤的保护作用及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法采用单次腹腔注射大剂量链脲佐菌素(55 mg/kg)建立糖尿病肾病大鼠模型,并随机分为模型组,黄精皂苷低(35 mg/kg)、高(70 mg/kg)剂量组及厄贝沙坦(17.5 mg/kg)组,每组10只;另随机选取10只健康Wistar大鼠作为正常组,各组灌胃给药,1次/d,正常组及糖尿病肾病模型组灌胃等体积蒸馏水,给药时间为16周。检测各组大鼠一般状态、肾脏系数、尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白总量、肾脏组织病理形态变化、Ⅳ型胶原及Wnt4、β-catenin表达。结果与模型组比较,黄精皂苷组大鼠一般状态及肾脏病理形态均得到一定程度改善;与模型组比较,黄精皂苷组大鼠肾脏系数,尿素氮、血肌酐及第8、12、16周的24 h尿蛋白总量明显减少(P<0.05);与模型组比较,黄精皂苷组大鼠Ⅳ型胶原及Wnt4、β-catenin表达均也明显降低(P<0.05)。结论黄精皂苷可以通过阻断Wnt/β-catenin信号通路的激活,抑制肾小管间质纤维化进程,最终发挥肾脏保护作用。

黄精皂苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎作用及其机制

目的在脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)中研究黄精皂苷通过NF-κB/MAPKs信号通路发挥体外抗炎作用及其机制。方法 MTT比色法检测黄精皂苷对RAW264.7细胞活性的影响,Griess试剂法检测NO释放,ELISA试剂法检测细胞释放TNF-α、IL-6的水平,流式细胞仪检测细胞释放ROS的水平,JC-1荧光染色法检测胞内线粒体膜电位水平变化,Western blot法检测细胞iNOS、COX-2、p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65、p-p38、p-ERK、p-JNK蛋白表达。结果黄精皂苷质量浓度为20、40、80μg/mL时对RAW264.7细胞没有毒性。不同质量浓度的黄精皂苷对LPS诱导RAW264.7细胞导致的NO、TNF-α、IL-6、ROS的释放均有很好的抑制作用,对iNOS、COX-2、p-IKKα/β、p-p65、p-IκBα、p-p38、p-ERK、p-JNK蛋白表达也有抑制作用。结论黄精皂苷通过抑制NF-κB/MAPKs信号通路来发挥体外抗炎作用。

黄精皂苷的研究进展

黄精皂苷(Saponin of Rhizoma Polygonati)是黄精药理作用的活性成分之一,主要包括甾体皂苷类和三萜皂苷类等79种化合物。总结了近年来黄精皂苷的提取方法;综合评价了其在调节免疫力、抗抑郁、改善记忆力、抗肿瘤、降血糖、抗炎、抑菌、抗病毒等多个方面的药理活性作用。指出其发展不足,并进行了综合的展望,以期为黄精皂苷的深入研究与综合利用提供参考和理论基础。

黄精皂苷提取条件的Design-Expert优化及其降血糖效果初步研究

目的:优化黄精皂苷提取工艺并研究黄精皂苷降血糖效果。方法:利用设计软件Design-Expert回归设计得到黄精皂苷提取率与提取温度、提取时间、乙醇浓度关系的回归模型优化提取工艺;建立糖尿病动物模型;取模型内小鼠50只,随机分为模型对照组、阳性对照组(二甲双胍200 mg·kg^(-1))、样品组高(300mg·kg^(-1))、中(200mg·kg^(-1))、低(100mg·kg^(-1))剂量组,阳性对照组、样品组按10 ml·kg^(-1)的剂量灌胃给药,模型对照组、空白组(10只模型外小鼠)给予等量的生理盐水,连续给药7 d后,测定餐后1 h的血糖值。结果:通过二次回归设计得到黄精皂苷提取率与提取温度、提取时间、乙醇浓度关系的回归模型,得到优化的提取工艺参数为:提取温度20.7℃,提取时间12.28 h,乙醇浓度为82%(v/v),此条件下黄精皂苷的提取率为2.95%。降血糖实验中,阳性对照组与样品各剂量组小鼠餐后血糖值均明显低于模型对照组(P<0.01或P<0.05)。样品高剂量组小鼠血糖值显著低于中剂量和低剂量组(P<0.01),与阳性对照组血糖值比较差异无统计学意义(P>0.05),与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。样品低剂量组和中剂量组血糖值差异无统计学意义(P>0.05),与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:通过二次回归设计得到的回归模型能够较好的预测黄精皂苷提取率,预测值和试验结果相对误差约为1%。降血糖实验证明,黄精皂苷提取物对用四氧嘧啶建立糖尿病小鼠降血糖效果显著。

正交法优化闪式提取黄精皂苷工艺研究

目的:用正交法优化闪式提取黄精皂苷工艺。方法:在单因素实验基础上,利用L_9(3~4)正交试验设计优化闪式提取黄精皂苷工艺,经优化后的的工艺条件为料液比例1∶20;提取电压100 V,提取时间40 s,提取次数3次(40 s/次)。结果:料液比例对提取量影响显著,此条件下黄精皂苷提取量达到(38.92±0.67)mg·g^(-1),对比不同提取方式得出,提取效果为:闪式提取>超声提取>乙醇浸提提取。结论:闪式提取法有利于黄精皂苷的提取。

黄精皂苷提取工艺的研究进展

皂苷是存在于黄精中的主要化合物,它具备良好生物活性。黄精皂苷提取法中常用乙醇浸提,但效用较低,新兴方法中超声和微波法较常见;黄精皂苷纯化常用大孔树脂法。掌握如何有效提取黄精中皂苷类成分,对黄精资源的开发利用具有重要意义。

黄精皂苷对抑郁模型小鼠行为及脑内单胺类神经递质的影响

目的:研究黄精皂苷对抑郁小鼠行为学及脑内单胺类神经递质(NE,DA和5-HT)的影响。方法:以孤养加慢性不可预见性刺激进行抑郁症小鼠造模,将小鼠分为空白组、模型组、对照组和三个剂量的黄精皂苷组(100,200,400 mg.kg-1),并进行自主活动测定、水迷宫试验以及脑内单胺类神经递质含量的测定。结果:模型组小鼠的自主活动、学习记忆能力以及脑内的单胺类神经递质含量均明显下降。黄精皂苷各剂量组能显著提高抑郁小鼠的自主活动和学习记忆能力,同时增加抑郁小鼠脑内单胺类神经递质含量。结论:黄精皂苷能够纠正抑郁症小鼠行为学变化,并且能够提高脑内NE,DA,5-HT的含量。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS分析黄精九蒸九晒炮制过程中化学成分的变化

目的应用固相萃取结合超高效液相色谱-电喷雾四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS),对黄精九蒸九晒炮制过程中的化学成分进行分析鉴定。方法采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水作为流动相梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,在电喷雾负离子模式下进行检测,四级杆飞行时间串联质谱对各主要色谱峰进行归属。结果根据所获得的精确相对分子质量,同时结合色谱保留行为、质谱裂解规律、特征碎片离子、对照品比对以及相关文献报道,共鉴定炮制前后黄精中的61个化学成分,包括16个甾体皂苷类成分、12个黄酮类成分、5个木脂素类成分、1个香豆素类成分、3个生物碱类成分、4个脂肪酸类成分、3个氨基酸类成分、2个糖类成分、4个酯类成分、1个醛类成分、1个有机酸类成分及9个未知成分。结论炮制对黄精中的化学成分影响很大,随着炮制时间的增加如成分异构化、原生苷种类以及含量减少、苷元含量的增加等。九蒸九晒黄精增效作用炮制或许与其化学成分变化有关,为黄精九蒸九晒炮制机制的研究提供理论依据,为黄精的进一步开发利用提供科学依据。