1株马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌致病性分析

国内鲜有马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)相关报道,本研究对1株新疆马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌的致病性进行评估,以期为马乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础数据。使用选择性培养基从新疆健康马乳中分离金黄色葡萄球菌,然后通过生化鉴定和分子鉴定方法对金黄色葡萄球菌进行鉴定。对所获得的金黄色葡萄球菌进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、spa分型、药物敏感性检测、生物被膜形成能力、溶血活性、毒力基因检测、小鼠皮肤脓肿和致病性试验。再对分离株进行小鼠细胞的黏附、侵袭和胞内增殖试验,以评估其致病性。结果显示,从马乳中分离得到1株PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(1/65,1.5%),spa分型为t304。仅对青霉素耐药,无生物被膜形成能力,但携带9种毒力基因(sec、seg、seh、tsst-1、hla、hlb、clfA、clfB和cna),并且具有溶血活性。小鼠皮肤脓肿和致病性试验表明,其可导致小鼠形成皮肤脓肿,并且在高剂量感染时可导致小鼠死亡。ST22型金黄色葡萄球菌可在小鼠巨噬细胞中黏附(4.26%)、侵袭(6.45%)和胞内增殖,并可造成细胞凋亡。综上,马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌具有较强的致病力,可能在宿主致病和公共卫生安全等方面存在隐患。

多形性黄色瘤型星形细胞瘤的MRI多模态分析

目的 探讨多形性黄色瘤型星形细胞瘤(PXA)的核磁共振成像(MRI)多模态表现。方法 回顾性分析2018年2月—2023年2月多中心收治的35例经病理证实为PXA患者的临床资料,总结其MRI多模态表现。结果 35例患者中,33例(94.3%)发生于幕上,2例(5.7%)发生于幕下,34例(97.1%)为单发病灶,1例(2.9%)为多发病灶。囊性型4例(11.4%),囊结节性9例(25.7%),囊实性型8例(22.9%),实性型14例(40%)。MRI多表现为规则或不规则肿块,边界清晰或不清晰,增强扫描以均匀或不均匀明显强化为主,10例出现脑膜强化;弥散加权成像(DWI)呈等或稍高信号,平均表观弥散系数(ADC)值(0.79±0.39)×10^(-3) mm^(2)/s;磁共振灌注成像(PWI)呈等/稍高灌注;核磁共振波谱分析检查(MRS)示NAA峰降低,Cho峰升高;磁敏感加权成像(SWI)显示肿瘤可合并出血及钙化。7例无瘤周水肿,8例轻度水肿,9例中度水肿,11例重度水肿。Ⅱ级组与Ⅲ级组在年龄和肿瘤分型有统计学差异(P<0.05);在性别、瘤体最大径、形态、边界、瘤周水肿、脑膜强化、强化程度及强化方式方面均无统计学差异(P>0.05)。结论 PXA较为少见,其MRI表现复杂,认识其MRI多模态表现,有利于其诊断及鉴别诊断。

多形性黄色瘤型星形细胞瘤13例报道并文献复习

目的探讨多形性黄色瘤型星形细胞瘤的影像学表现及其治疗及预后,并分析影像学特征对预后的影响。方法回顾性分析武汉协和医院13例经手术病理证实的脑多形性黄色瘤型星形细胞瘤临床特点及MRI平扫及增强表现,其中1例进行了脑DWI检查,1例1 H-MRS检查,并探究其MR表现及其对预后的影响。结果 12例位于大脑半球浅表部位,其中肿瘤位于颞叶6例,额叶4例,顶、枕叶2例;1例病灶位于桥小脑角区。囊腔结节型9例,其中7例为大囊小结节,2例大囊大结节;实质型3例,囊型1例。增强扫描肿瘤结节及实质型瘤体均明显强化,瘤周不同程度水肿。所有患者均行肿瘤切除术,全切10例,大部分切除术3例。术后放疗4例,放化疗3例。术后随访平均2.7年,恢复满意10例,其中癫痫消失8例,头疼缓解2例;复发2例,死亡1例。结论多形性黄色瘤型星形细胞瘤多表现为良性,少数病例可能有恶变可能。MR对多形性黄色瘤型星形细胞瘤的诊断以及与邻近结构关系的确定有指导作用,还能指导放疗,制定手术方案并预测预后,术后应对有残余、复发或间变病例及时进行放、化疗。

多形性黄色瘤型星形细胞瘤影像学表现与临床病理对照

目的探讨多形性黄色瘤型星形细胞瘤的影像表现与临床病理特点。资料与方法回顾分析21例脑多形性黄色瘤型星形细胞瘤的CT、MR表现和临床病理特点。结果病变好发于脑实质表浅部位,单发,多位于颞叶;15例病变以囊性为主,其中10例为大囊小结节,5例大囊大结节;6例病变以实性为主。组织病理学检查,肿瘤细胞具有明显多形性,瘤细胞间见大量网状纤维及淋巴细胞浸润;出血、钙化少见。免疫组织化学示所有病例胶原纤维酸性蛋白表达阳性。临床上该病好发于儿童及青少年,多有癫痫发作。结论多形性黄色瘤型星形细胞瘤的影像学表现具有一定特征,病变表浅且单发,多呈囊性改变并伴有壁结节,结合应用影像诊断新技术(DWI、MRS及PET/CT)有助于提高诊断能力。

多形性黄色瘤型星形细胞瘤3例临床病理观察

目的探讨多形性黄色瘤型星形细胞瘤(PXA)的临床病理学特点及CD34在其鉴别诊断中的应用价值。方法对3例多形性黄色瘤型星形细胞瘤的临床特点、影像学表现、组织学形态及免疫组化结果进行观察,并结合文献复习讨论。结果 3例患者平均年龄23岁,2例位于顶叶,1例位于额叶。影像学上3例均位于幕上,其中1例呈囊性,囊内壁小结节明显强化;2例以结节状实性病变为主,未见强化。组织学均可见黄瘤样细胞和血管周围淋巴细胞浸润,其中2例伴梭形细胞成分,3例均未见核分裂象和血管内皮细胞增生。免疫组化示黄瘤样细胞CD68和GFAP(+),CD34弥漫(+),Syn散在(+),Ki-67增殖指数为2%～4%。结论 PXA是一种罕见的具有特殊影像学和临床病理特点的星形细胞肿瘤。CD34是PXA的一种敏感标记物,对于诊断PXA及与其他脑肿瘤相鉴别具有较高的应用价值。

8例多形性黄色瘤型星形细胞瘤临床分析

目的:探讨多形性黄色瘤型星形细胞瘤患者的临床特征及治疗。方法:回顾8例多形性黄色瘤型星形细胞瘤患者的临床资料。结果:患者平均年龄23.7岁,肿瘤位于大脑半球。临床表现主要以癫痫起病。最后确诊主要靠病理学。显微手术全切5例,大部分切除3例,放疗3例,放化疗2例。随访10个月～5年,6例存活,癫痫及头痛得到控制,2例复发,1例复发死亡。结论:多形性黄色瘤型星形细胞瘤是一个相对良性肿瘤,癫痫发作是最常见的症状,治疗上应手术全切,对术后有残余、复发或间变者可给予放疗,预后相对良好。

金黄色葡萄球菌稳定L型DNA的提取及酶切

本文从一例恶性淋巴瘤合并金黄色葡萄球菌Ｌ型败血症患者的骨髓内分离得到金黄色葡萄球菌稳定Ｌ型，用玻璃微珠机械研磨方法提取ＤＮＡ，纯化后被ＥＣＯＲＩ酶切，酶切ＤＮＡ片段可用于核酸杂交等分子物生学研究。

多形性黄色瘤型星形细胞瘤20例临床病理分析

目的探讨多形性黄色瘤型星形细胞瘤(PXA)的临床病理特点、组织学分类、免疫表型、鉴别诊断及预后情况。方法收集中国人民解放军总医院2005—2017年诊断为PXA患者20例,观察其临床、影像及病理学特征,对其随访,并进行文献复习。结果 20例患者男性11例,女性9例,发病年龄12～58岁,中位年龄21.5岁。临床主要症状为癫■及头痛。影像学检查:囊伴附壁结节型11例,实性为主6例,囊实性2例,囊性病变1例。增强后实性部分、附壁结节及囊壁不同程度强化。组织学表现为细胞的多形性及黄色瘤型星形细胞,可见嗜酸性颗粒小体,间质或血管周围淋巴细胞和浆细胞浸润,形成血管周围淋巴细胞"袖套";肿瘤细胞周围网状纤维丰富。6例PXA肿瘤细胞核分裂象≥5个/10HFP,伴有坏死。组织学分级WHOⅡ级PXA 14例,WHOⅢ级PXA 6例。免疫组化染色示所有病例GFAP和S-100(+),WHOⅡ级肿瘤BRAF V600E、CD34阳性率分别为50%(7/14)、78.6%(11/14)。WHOⅢ级肿瘤BRAF V600E、CD34阳性率33.3%(2/6)、50%(3/6)。结论 PXA是一种罕见好发于年轻人的具有特殊临床病理特征的中枢神经系统肿瘤,14例WHOⅡ级患者,3例出现复发,4例死亡,患者生存时间最短2年,最长4年6个月;5例有随访资料的WHOⅢ级PXA生存时间最短6个月,最长2年。PXA具有相对较好的预后,诊断需结合临床资料、影像学改变、病理特点,并需与其他脑肿瘤,如上皮样胶质母细胞瘤等鉴别。

多形性黄色瘤型星形细胞瘤与癫痫1例报告并文献复习

目的探讨实质型多形性黄色瘤型星形细胞瘤(PXA)的临床、影像学表现、病理学特点及致痫机制和外科治疗方案。方法回顾性分析1例PXA患儿的临床资料。结果患儿男,10岁,临床表现为反复癫痫发作。脑电图示右颞区为主的慢波、棘-慢波发放,头颅MRI平扫见右颞中部皮质结构异常,增强扫描局部呈不均匀片状强化。术中见病变位于右侧颞中回后部,局部皮质略肿胀、颜色稍黄、质地偏韧、边界欠清,自皮质表面向深部生长。术中皮质脑电图(ECo G)监测见癫痫放电主要位于病变及其周围皮质,扩大切除病变后再次监测未见异常癫痫波发放。术后随访9个月无癫痫发作。结论 PXA是一种少见的中枢神经系统肿瘤,多以癫痫发作为首发症状。在ECo G监测下行病变扩大切除是治疗PXA的有效方法。

中老年脑多形性黄色瘤型星形细胞瘤的MR分析

目的:分析中老年脑多形性黄色瘤型星形细胞瘤(PXA)的MRI表现。方法:回顾性分析12例经手术病理证实的中老年PXA的MR资料,所有患者均行MR平扫加增强检查。结果:12例均单发且位于脑表浅部位,11例位于幕上,1例位于幕下。10例囊实性,1例囊性,1例实性。囊壁和肿瘤实性部分T1呈等或稍低信号,T2呈等或稍高信号,增强后8例实性部分明显强化,4例呈斑点、片状不均匀轻到中度强化。4例壁无或轻度强化,8例囊壁部分或全部明显强化。5例无瘤周水肿,7例轻度瘤周水肿。2例囊实性病例术后复发且发生间变。结论:发生于中老年人的脑多形性黄色瘤型星形细胞瘤的MR特征类似于年轻人群的,术前MRI平扫及增强可以做出明确诊断。

产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达

目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得抗血清,进行重组蛋白免疫原性分析。结果成功克隆SEA全长基因,经DNA序列分析证实与GenBank收录序列具有100%的同源性。表达蛋白相对分子质量为31000,以包涵体形式存在。纯化、复性后获得有活性的rSEA蛋白,rSEA蛋白能够识别天然的SEA。结论SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,rSEA具备抗原性,为制备单抗、诊断试剂及金黄色葡萄球菌致病机制研究奠定了基础。

生产群奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因检测及PFGE分型研究

隐性乳房炎患牛与健康牛外观无异,不易判断,对奶牛业造成的损失严重。金黄色葡萄球菌是引起隐性乳房炎的重要病原菌,准确判断金黄色葡萄球菌型隐性乳房炎是预防和控制乳房炎的重要途径。目前国际上普遍采用乳中体细胞数(SCC)作为检测隐性乳房炎的主要指标,但是约40%的金黄色葡萄球菌型乳房炎牛乳汁中SCC低于20万/mL。笔者依据相邻两月SCC差值高低,采集两个奶牛场荷斯坦牛生产群第一胎泌乳牛奶样65头份,从中检出有6头份含金黄色葡萄球菌。用PCR方法扩增金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的特异基因nuc和mecA,结果发现,nuc基因检出率为100%(12/12),未检测到mecA基因。进一步用多重PCR方法检测金黄色葡萄球菌各种毒素基因,其中PVL基因在高SCC与低SCC奶样中的检出率分别为33.3%和100%,差异显著,这可能与PVL破坏白细胞有关。PFGE分型结果表明,所检测到的金黄色葡萄球菌可分为4个簇、5种类型,其中P2型(PVL)为流行株。结果提示,在荷斯坦牛生产群中,如果奶牛产奶量有所下降而SCC也不高时,应辅以分子检测手段来判断是否患有金黄色葡萄球菌型隐性乳房炎。

金黄色葡萄球菌L型对肿瘤组织和培养细胞影响的研究

目的探讨金黄色葡萄球菌(金葡菌)L型感染对C57小鼠肿瘤组织和体外培养猴肾细胞的影响。方法用金葡菌L型感染C57小鼠及猴肾细胞,再用革兰氏染色、免疫组化染色和聚合酶链反应(PCR)检测C57小鼠肝组织及诱发的小鼠肿瘤组织中金葡菌L型阳性率,并观察感染后猴肾细胞的病理形态学变化。结果C57小鼠肝组织及肿瘤组织中金葡菌L型感染率分别为0%(0/10)和70%(7/10),L型抗原表达率分别为0%(0/10)和70%(7/10);金葡菌L型DNA阳性表达率分别为0%(0/10例)和70%(7/10例)。猴肾细胞感染L型原生小体后体外培养48h部分出现空泡样变样(类似病毒感染后的形态学变化),局部区域细胞密集(轻度增生)。结论金葡菌L型DNA已在感染的体内、外细胞内出现,且在诱发的肿瘤细胞内表达显著增高,推测其在诱发体细胞增生和癌变中起重要作用,很可能和病毒的致瘤机理相似。

金黄色葡萄球菌L型对胆囊癌细胞的致病变研究

目的研究金黄色葡萄球菌L型对胆囊癌细胞(GBC-SD)的致病变作用。方法金葡菌L型感染GBC-SD细胞后,采用光学显微镜、透射电子显微镜及PCR检测其能否侵入细胞,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法、增殖细胞核抗原(PCNA)法检测其能否促进细胞增殖,采用基因芯片检测其引起的细胞基因改变。结果PCR检测以及光镜、电镜拍照显示金葡菌L型能够粘附并且进入GBC-SD细胞,MTT法、PCNA检测表明金葡菌L型能够促进GBC-SD细胞增殖。基因芯片结果显示金葡菌L型作用后的GBC-SD细胞有15个基因表达异常,取表达上调基因含表皮生长因子组件粘蛋白类似激素受体2(EMR2)、表达下调基因细胞外基质蛋白2(ECM2)进行RT-PCR法验证,与基因芯片结果符合。结论金葡菌L型能够进入GBC-SD细胞中并促进其增殖,引起细胞EMR2基因上调、ECM2基因下调,提示金葡菌L型可能与胆囊癌的发生、发展存在一定相关性。

原位杂交检测子宫内膜癌中金黄色葡萄球菌L型DNA

目的 研究细菌L型感染与子宫内膜腺癌的相关性。方法 用革兰染色、免疫组化和DNA核酸探针原位杂交等方法 ,对 6 6例子宫内膜腺癌 ,30例子宫内膜增生症进行检测。结果 子宫内膜腺癌和内膜增生症中革兰氏染色细菌L型阳性率分别为 5 4 5 % ,5 6 7% ;免疫组化染色 (S -P法 )检测阳性率分别为 5 6 1%和 6 0 6 % ;2 0例子宫内膜腺癌标本 ,用金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )L型地高辛标记的核酸探针作原位杂交 ,结果发现 45 %的宫内膜腺上皮细胞核内显示有金葡菌L型DNA阳性颗粒。结论 提示细菌及其L型可侵入子宫内膜腺上皮细胞 ,导致细胞异常增生甚至肿瘤发生。证明子宫内膜腺癌的发生与细菌L型感染有一定的相关性。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因型及其与耐药性的关系

目的 :了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)基因型及其与耐药性的关系 ,为MRSA感染的治疗选药及分子流行病学研究提供实验依据。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增MRSAmec基因高变区 (HVR) ,据扩增片段大小差异进行基因分型 ,结合 5种抗菌药物的MIC值 ,分析基因型与耐药性的关系。结果 :86株MRSA被分为A、B、C、D 4种基因型 ,以A(5 2 .3%)、D(39.5 %)型多见 ,B、C型少见 ,但后 2型耐药性更高 ,各型菌均对万古霉素敏感。结论 :治疗MRSA感染以选万古霉素 ,或联合阿米卡星、利福平为宜 ,HVR基因分型可作为MRSA感染分子流行病学研究的新手段。

热诱导潜在食物中毒威胁源重组M型金黄色葡萄球菌肠毒素去折叠及聚合过程

热失活工艺是降低加工食品中潜在的细菌和毒素含量的有效手段。M型金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins M,SEM)归属于V型超抗原,具有较弱的催吐活性,是一种潜在的金黄色葡萄球菌所致食物中毒威胁源。本研究利用圆二色光谱、荧光光谱、变性/活性聚丙烯酰胺凝胶电泳监测重组M型金黄色葡萄球菌肠毒素(recombinant staphylococcal enterotoxin M,rSEM)热诱导变性过程。结果表明,在低于40℃时,rSEM具有富含α-螺旋(17%)、β-折叠(32%)、转角(21%)的天然折叠态结构,分子表面唯一的121号色氨酸残基位于β-掌型结构域中相对疏水的环境中。随着温度从42℃升高到55℃,rSEM二级结构中减少的α-螺旋含量被增加的β-折叠/转角含量所弥补,蛋白质分子之间聚集状态未发生明显改变,最大荧光发射波长明显蓝移,同时350 nm和340 nm波长处的荧光强度比表现出反S型曲线,说明42~55℃温和加热可导致另一种形式的rSEM折叠中间态(intermediate state,IS)形成。在55~90℃温度范围内,rSEM二级结构基本维持稳定。与此同时,当加热温度从65℃升高至80℃时,350 nm与340 nm波长处的荧光发射强度比并未显示出蛋白处于完全变性状态,说明在加热过程中rSEM二级结构基本维持稳定,而三级结构具有较大动态变化的可能性,这可能与β-掌型结构域可以通过诱导契合结合具有不同构象的主要组织性相容复合体等位基因产物有关系。此外,在70℃乃至更高的温度,rSEM的聚集程度明显增加并且在90℃时达到最大。综上,rSEM中间态形成、聚合体产生以及稳定的β-折叠/转角结构是该蛋白在高温下依然保持热稳定性的基础。通过对rSEM热诱导去折叠过程的研究有助于阐明rSEM耐热机理,未来利用该方法对其他各类金葡菌肠毒素热失活机制进行类似研究将利于食品安全性生产工艺过程的改善。

金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测

[目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素（SEB）为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺激动物产生抗体。以自制SEB为免疫抗原注射BALB/c小白鼠,其最高效价为1∶100 000。SEB浓度在1-1 000 ng/ml范围内,竞争抑制率与SEB浓度的对数值呈显著线性关系。当SEB的浓度为5-500 ng/ml时,随样品中SEB浓度的增加,污染样品的回收率变异系数减小,检测准确度提高。[结论]对不同污染程度的牛奶样品,利用间接竞争ELISA法检测其SEB残留的灵敏度远远高于生化法。

金黄色葡萄球菌L型致间质性肺炎的实验动物模型的建立

目的观察各实验动物感染金黄色葡萄球菌(金葡菌)L型后肺脏和其它重要脏器的病理变化.方法高渗培育金葡菌L型,经静脉和腹腔人工感染小白鼠、大白鼠等动物,光镜观察其相应脏器变化.结果发现主要脏器实质细胞发生变性、慢性炎细胞浸润和间质细胞增生性改变.结论细菌L型具有侵入和破坏组织脏器实质细胞的能力,引起相应脏器发生间质性炎症改变.