腺相关病毒载体pAGX(+)的构建

目的 构建腺相关病毒 (AAV)载体并进行鉴定 ,以介导真核细胞的基因传递和表达。方法 以基因重组技术构建AAV载体 ,用Southern杂交、狭缝杂交以及激光共聚焦显微镜等鉴定构建的AAV载体。结果 成功地获得了重组AAV表达载体pAGX( + ) ,藉报告基因EYFP鉴定pAGX( + ) ,见pAEYFP经包装的重组AAV储存液的感染滴度达 1 .3 9× 1 0 7TU(transmissionunit) /ml、复制滴度达1 .94× 1 0 11颗粒 /ml。Southern杂交表明EYFP基因获得成功拯救。rAAV/EYFP颗粒成功转导COS 7细胞 ,EYFP获得表达 ,并整合入COS 7细胞基因组 ,而藉质粒载体pEYFPCMV介导的转移 ,EYFP未能整合。结论 成功地构建了一个AAV载体 ,并成功地介导了基因的转移、表达和整合。