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串联型黄色荧光蛋白在Vero细胞中的表达 被引量:1
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作者 李继东 何生虎 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期962-966,共5页
试验旨在探索串联型黄色荧光蛋白(YFP)在真核细胞中的表达,以便于构建用于球虫转基因研究的载体。用PCR方法克隆了不含鼠鸟氨酸脱羧酶PEST序列的目的DNA片段YFP-1和YFP-2,并将其依次连接于原始载体pd2EYFP-N1以替换d2EYFP报告基因,将重... 试验旨在探索串联型黄色荧光蛋白(YFP)在真核细胞中的表达,以便于构建用于球虫转基因研究的载体。用PCR方法克隆了不含鼠鸟氨酸脱羧酶PEST序列的目的DNA片段YFP-1和YFP-2,并将其依次连接于原始载体pd2EYFP-N1以替换d2EYFP报告基因,将重组载体电转染Vero细胞,观察荧光情况。结果显示,重组载体pYFP-YFP-N1能够在Vero细胞中正常表达,串联型YFP基因可用于球虫转基因中载体构建。 展开更多
关键词 黄色荧光蛋白 VERO细胞 表达
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γ-干扰素基因pIRES改进型黄色荧光蛋白载体的构建
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作者 蓝育青 葛坚 +4 位作者 卓业鸿 林明楷 王金林 刘海泉 李艳艳 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期197-199,共3页
【目的】构建携带γ 干扰素基因 (ifn γ)的pIRES改进型黄色荧光蛋白载体 (pIRES EYFPIFN γ) ,为γ 干扰素基因的体内外表达及蛋白定位提供理想的标记。【方法】根据已知γ 干扰素基因序列 ,设计在目的片段两端分别带EcoRⅤ和NotⅠ酶... 【目的】构建携带γ 干扰素基因 (ifn γ)的pIRES改进型黄色荧光蛋白载体 (pIRES EYFPIFN γ) ,为γ 干扰素基因的体内外表达及蛋白定位提供理想的标记。【方法】根据已知γ 干扰素基因序列 ,设计在目的片段两端分别带EcoRⅤ和NotⅠ酶切位点序列的 2条引物 ,用PCR技术从质粒 pcDNA3IFN γ中扩增出ifn γ(499bp) ,PCR产物用 EcoRⅤ和 NotⅠ双酶切后回收纯化 ,定向克隆至商品质粒 pIRES EYFP ,重组质粒 pIRES EYFPIFN γ用限制性内切酶酶切和DNA序列分析鉴定。同时以脂质体为介导 ,将 pIRES EYFPIFN γ转染正常人眼Tenon囊成纤维细胞 ,4 8h后于荧光倒置显微镜下观察基因的表达。【结果】DNA序列分析证明PCR产物为ifn γ ,将重组质粒转染正常人眼Tenon囊成纤维细胞 ,荧光倒置显微镜下可见黄色荧光蛋白的表达 ,转染率约为 4 3%。【结论】成功构建 pIRES EYFPIFN γ载体为利用黄色荧光蛋白标记在体内外进行γ 展开更多
关键词 干扰素Ⅱ型 遗传学 黄色荧光蛋白 遗传载体 克隆 分子 序列分析 DNA
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CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对黄色荧光蛋白表达调控作用的研究
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作者 李继东 丁林军 何生虎 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1113-1116,共4页
探索CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对串联型黄色荧光蛋白(YFP)表达的调控作用,将含有串联型YFP、CMV启动子、柔嫩艾美耳球虫组蛋白4(H istone4)上游启动序列和肌动蛋白(Actin)下游调控序列的重组载体pCMV-YFP-YFP、pH4-YFP-YFP-AC... 探索CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对串联型黄色荧光蛋白(YFP)表达的调控作用,将含有串联型YFP、CMV启动子、柔嫩艾美耳球虫组蛋白4(H istone4)上游启动序列和肌动蛋白(Actin)下游调控序列的重组载体pCMV-YFP-YFP、pH4-YFP-YFP-ACT电转染Vero细胞和柔嫩艾美耳球虫子孢子,观察荧光情况。结果证明,CMV启动子不能驱动YFP在柔嫩艾美耳球虫中正常表达,而其自身基因的侧翼序列能够启动和调控串联型YFP在柔嫩艾美耳球虫中的正常表达。 展开更多
关键词 黄色荧光蛋白 柔嫩艾美耳球虫 电转染
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加强型黄色荧光蛋白和VEGF双基因载体在肝细胞共转染表达 被引量:5
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作者 王金林 闵军 +2 位作者 周晓东 陈亚进 陈积圣 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第4期254-256,共3页
【目的】构建携带加强型黄色荧光素蛋白 (EYFP)和人类血管内皮生长因子 (VEGF)的双基因真核表达载体pIRES EYFP/VEGF12 1,用EYFP作标记基因 ,研究外源性VEGF12 1基因在大鼠原代培养肝细胞转染表达 ,为实时监测VEGF12 1基因修饰肝细胞移... 【目的】构建携带加强型黄色荧光素蛋白 (EYFP)和人类血管内皮生长因子 (VEGF)的双基因真核表达载体pIRES EYFP/VEGF12 1,用EYFP作标记基因 ,研究外源性VEGF12 1基因在大鼠原代培养肝细胞转染表达 ,为实时监测VEGF12 1基因修饰肝细胞移植后状态提供基础。【方法】将 pcDNA3VEGF12 1中VEGF12 1定向克隆到 pIRES EYFP ,构建重组质粒 pIRES EYFP/VEGF12 1,经酶切、PCR扩增和部分DNA序列分析证实后 ,转染大鼠原代培养肝细胞 ,用荧光显微镜等观察转染表达。【结果】酶切、PCR扩增和部分DNA序列分析等证明pIRES EYFP/VEGF12 1质粒成功构建 ,转染大鼠原代培养肝细胞后 ,可以通过荧光显微镜观察到黄绿色荧光。【结论】构建了 pIRES EYFP/VEGF12 1质粒 ,为实时监测外源性VEGF12 1基因转染表达和VEGF基因修饰肝细胞的基因治疗奠定基础。 展开更多
关键词 黄色荧光蛋白 内皮生长因子 细胞培养 转染
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含多酶切位点融合黄色荧光蛋白的植物通用载体的构建与应用 被引量:1
5
作者 匡琛 朱晓义 +2 位作者 张亮 范世航 华玮 《江苏农业科学》 2019年第16期56-62,共7页
以植物表达载体pCAMBIA3301为基本骨架,以黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,简称YFP)为标签蛋白构建可融合目标蛋白的表达载体,并包含可用于外源基因插入的单一识别位点的核酸酶酶切位点(SpeⅠ、XbaⅠ、SmaⅠ、Bam HⅠ)。为了... 以植物表达载体pCAMBIA3301为基本骨架,以黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,简称YFP)为标签蛋白构建可融合目标蛋白的表达载体,并包含可用于外源基因插入的单一识别位点的核酸酶酶切位点(SpeⅠ、XbaⅠ、SmaⅠ、Bam HⅠ)。为了验证载体的实用性,将构建完成的载体转化到感受态GV3101农杆菌上,进行菌落PCR鉴定,再分别瞬时转化烟草下表皮和稳定转化拟南芥。激光共聚焦显微镜观察结果显示,在阳性转基因植株上均观察到荧光,在阴性对照上没有观察到荧光,表明YFP标签蛋白在转基因受体细胞中能够正常表达。pCAMBIA3301::YFP载体的成功构建为植物蛋白亚细胞定位及过表达转基因植株等相关领域的研究提供了稳定可靠的通用型载体资源。 展开更多
关键词 多酶切位点 黄色荧光蛋白 通用载体 激光共聚焦 植物基因表征工具
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绿色/黄色荧光蛋白双标记细胞的流式细胞术分析方案建立
6
作者 张秀艳 王文洁 《中国血液流变学杂志》 CAS 2017年第4期361-363,370,共4页
在现代生物医学研究中,荧光蛋白的使用越来越广泛,使用流式细胞术可对荧光蛋白标记的细胞进行分析.在标准配置的流式细胞仪中,绿色荧光蛋白(GFP)和黄色荧光蛋白(YFP)使用同一荧光通道检测,因此无法对GFP/YFP双标记的细胞群体进行分... 在现代生物医学研究中,荧光蛋白的使用越来越广泛,使用流式细胞术可对荧光蛋白标记的细胞进行分析.在标准配置的流式细胞仪中,绿色荧光蛋白(GFP)和黄色荧光蛋白(YFP)使用同一荧光通道检测,因此无法对GFP/YFP双标记的细胞群体进行分析.该文将介绍一种针对BD AriaⅢ流式细胞仪可行的GFP/YFP双标记细胞分析的滤光片组合方案,以实现对GFP/YFP双标记细胞的快速检测和分析. 展开更多
关键词 流式细胞术 绿色荧光蛋白 黄色荧光蛋白
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蓝色和黄色荧光蛋白在灵芝中的表达及黄色荧光蛋白在诱导型启动子Pcbh2活性分析中的应用
7
作者 黄雄敏 徐艳 徐军伟 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期47-55,共9页
本研究中通过密码子优化和内含子添加分别构建了蓝色荧光蛋白基因(bfp)表达载体PJW-EXP-intron-opbfp和黄色荧光蛋白基因(yfp)表达载体PJW-EXP-intron-opyfp,使用灵芝Ganodermalingzhi原生质体进行转化,筛选得到了表达BFP和YFP的工程菌... 本研究中通过密码子优化和内含子添加分别构建了蓝色荧光蛋白基因(bfp)表达载体PJW-EXP-intron-opbfp和黄色荧光蛋白基因(yfp)表达载体PJW-EXP-intron-opyfp,使用灵芝Ganodermalingzhi原生质体进行转化,筛选得到了表达BFP和YFP的工程菌株。工程菌株的菌丝在荧光显微镜下可分别检测到蓝色和黄色荧光信号,而野生型菌株(WT)的菌丝检测不到这2种荧光,结果显示我们在灵芝中实现了蓝色和黄色荧光蛋白的表达。基于本研究建立的荧光蛋白表达方法,我们评估了纤维二糖水解酶Ⅱ基因的启动子(Pcbh2)在微晶纤维素诱导下的活性。将黄色荧光蛋白基因插入到Pcbh2启动子的下游构建yfp-Pcbh2表达载体,经过转化获得了YFP-Pcbh2灵芝工程菌株。在微晶纤维素的诱导下,检测到YFP-Pcbh2菌丝体可发出黄色荧光信号,而不加微晶纤维素诱导时则没有检测到荧光,结果表明Pcbh2启动子在微晶纤维素诱导下具有转录活性。 展开更多
关键词 灵芝 蓝色荧光蛋白 黄色荧光蛋白 诱导型启动子 应用
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Lyz2^(Cre)介导的黄色荧光蛋白标记荷瘤小鼠不同部位髓系免疫细胞的效率检测
8
作者 张静茹 唐丽 《军事医学》 CAS CSCD 2023年第3期169-174,共6页
目的评价Lyz2^(Cre)介导的黄色荧光蛋白(YFP)标记荷瘤小鼠不同部位髓系免疫细胞的特异性及其效率。方法Lyz2^(Cre)小鼠与Rosa26RYFP小鼠交配,通过PCR基因型鉴定筛选出双阳性子代小鼠,待小鼠成年后,建立皮下肿瘤移植模型,14 d后,分离外... 目的评价Lyz2^(Cre)介导的黄色荧光蛋白(YFP)标记荷瘤小鼠不同部位髓系免疫细胞的特异性及其效率。方法Lyz2^(Cre)小鼠与Rosa26RYFP小鼠交配,通过PCR基因型鉴定筛选出双阳性子代小鼠,待小鼠成年后,建立皮下肿瘤移植模型,14 d后,分离外周血、骨髓以及肿瘤中的免疫细胞,利用流式细胞术分析不同部位髓系免疫细胞中YFP的标记效率。结果外周血中单核细胞表达YFP的比例为(36.87±2.03)%;中性粒细胞表达YFP的比例为(78.46±0.84)%;骨髓中单核细胞表达YFP的比例为(15.13±1.17)%;中性粒细胞表达YFP的比例为(69.62±1.75)%;肿瘤中单核细胞表达YFP的比例为(32.89±1.89)%;中性粒细胞表达YFP的比例为(65.56±4.17)%;肿瘤相关巨噬细胞表达YFP的比例为(40.80±3.89)%。结论Lyz2^(Cre)介导的YFP对于示踪某一类髓系免疫细胞的特异性和效率不高;Lyz2^(Cre)作为肿瘤髓系巨噬细胞的基因条件性敲除小鼠存在一定的缺陷。 展开更多
关键词 髓系 免疫细胞 黄色荧光蛋白 杂交 基因型 CRE重组酶 流式细胞术
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环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究 被引量:3
9
作者 孙金钰 郑屹峰 +4 位作者 巫启明 郭建辉 林春通 刘树滔 饶平凡 《福州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期795-800,共6页
采用基因工程方法,实现了cpYFP在毕赤酵母X33的表达,并与大肠杆菌BL21(DE3)表达做对比.结果表明,毕赤酵母胞外分泌的目的蛋白不仅背景较大肠杆菌表达的清晰,且荧光强度为前者的3倍.同时,毕赤酵母表达的重组cpYFP对超氧阴离子自由基反应... 采用基因工程方法,实现了cpYFP在毕赤酵母X33的表达,并与大肠杆菌BL21(DE3)表达做对比.结果表明,毕赤酵母胞外分泌的目的蛋白不仅背景较大肠杆菌表达的清晰,且荧光强度为前者的3倍.同时,毕赤酵母表达的重组cpYFP对超氧阴离子自由基反应的灵敏性高于大肠杆菌表达的cpYFP.这些结果表明,毕赤酵母表达体系可作为制备重组cpYFP的良好体系,也为cpYFP在自由基生物学领域的广泛应用提供充足的原料来源. 展开更多
关键词 环状排列黄色荧光蛋白 大肠杆菌 毕赤酵母 构建 表达
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串联型黄色荧光蛋白表达载体的构建及其在柔嫩艾美球虫中的瞬时表达 被引量:1
10
作者 李继东 郝力力 +2 位作者 刘贤勇 周晓艳 索勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期11-14,共4页
为了探索黄色荧光蛋白(YFP)在柔嫩艾美球虫子孢子中的瞬时表达情况,以柔嫩艾美球虫的组蛋白4(Histone4,H4)上游启动序列和肌动蛋白(Actin)下游调控序列为元件构建了串联型YFP重组转染载体pH4-YFP-YFP-ACT。将构建的载体经电穿孔法转染... 为了探索黄色荧光蛋白(YFP)在柔嫩艾美球虫子孢子中的瞬时表达情况,以柔嫩艾美球虫的组蛋白4(Histone4,H4)上游启动序列和肌动蛋白(Actin)下游调控序列为元件构建了串联型YFP重组转染载体pH4-YFP-YFP-ACT。将构建的载体经电穿孔法转染柔嫩艾美球虫子孢子,并在MDBK细胞中进行培养。结果显示,在荧光显微镜下可以观察到黄色荧光。提示,串联型YFP可以在柔嫩艾美球虫中瞬时表达。 展开更多
关键词 柔嫩艾美球虫 黄色荧光蛋白 瞬时转染
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信号肽-FRET荧光蛋白载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达 被引量:1
11
作者 孙学刚 宋革 +5 位作者 刘靖华 安海燕 李红乐 邢飞跃 张丽华 姜勇 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第4期310-312,共3页
目的构建带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白(pECFP-C1-SP)和增强型黄色荧光蛋白(pEYFP-C1-SP)的质粒载体,为使用荧光共振能量转移(FRET)技术研究LPS在细胞膜上的受体识别机制提供依据。方法采用点突变技术构建了带TLR4信号肽的载体,用... 目的构建带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白(pECFP-C1-SP)和增强型黄色荧光蛋白(pEYFP-C1-SP)的质粒载体,为使用荧光共振能量转移(FRET)技术研究LPS在细胞膜上的受体识别机制提供依据。方法采用点突变技术构建了带TLR4信号肽的载体,用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞,观察带信号肽载体和融合蛋白载体在细胞内的表达。结果DNA测序证明所构建的带TLR4信号肽的载体正确;酶切和DNA测序表明融合蛋白载体的构建正确,TLR4信号肽可以使蛋白主要表达在膜上。结论所构建的带信号肽的荧光蛋白载体是正确的,pECFP-C1-SP和pEYFP-C1-SP能够表达在细胞膜上,可有效地应用于膜蛋白相互作用的研究。 展开更多
关键词 荧光共振能量转移 信号肽 增强型青色荧光蛋白 增强型黄色荧光蛋白 细胞膜
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荧光蛋白在肿瘤的发生和发展方面的研究与应用
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作者 施佳 罗良生 《临床神经外科杂志》 CAS 2014年第2期147-150,共4页
荧光示踪技术是激发光通过激发荧光基团到达高能量状态,而后产生发射光,并利用生物荧光影像分析技术直接检测活体生物体内的细胞活动和基因行为。最常用的是绿色荧光蛋白( green fluorescent protein ,GFP),随后发现的红色荧光蛋... 荧光示踪技术是激发光通过激发荧光基团到达高能量状态,而后产生发射光,并利用生物荧光影像分析技术直接检测活体生物体内的细胞活动和基因行为。最常用的是绿色荧光蛋白( green fluorescent protein ,GFP),随后发现的红色荧光蛋白( red fluorescent protein ,RFP)在灵敏度和信噪比方面均比GFP高,此外还有黄色荧光蛋白( yellow fluorescent protein,YFP)等,这为基于GFP的体内研究提供了一个很好的互补工具。随着荧光蛋白在细胞生物学上的广泛应用,使活体细胞显像问题得以解决,并且获得了空前的发展。尤其是荧光蛋白可以对各种细胞过程进行显像示踪,这些蛋白可作为报告基因,独特的荧光光谱能在体内外对尚未明确的细胞过程进行示踪。比如肿瘤发生发展过程中的各个阶段在细胞水平有何异常?荧光蛋白的活体成像能观察各种肿瘤模型中肿瘤细胞的生长和发展,包括肿瘤最初的发生,肿瘤细胞随后的迁移和入侵,转移播种,生成血管以及肿瘤和宿主微环境间的相互作用等。荧光蛋白作为报告基因已被广泛应用于肿瘤各个阶段的研究中,本文就近些年来荧光示踪技术在肿瘤细胞发生和发展过程中的研究和应用作一综述。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 肿瘤发生发展 应用 protein 示踪技术 红色荧光蛋白 黄色荧光蛋白 报告基因
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我国学者培育出可同时表达4种荧光蛋白的克隆猪
13
《福建农业》 2011年第12期36-36,共1页
据悉,在中科院广州生物医药与健康研究院成功培育出了一种特殊的转基因克隆猪,这种克隆猪在特定波长的激发光下可分别发出红、黄、绿、青4种荧光,这是国际上首次获得能够同时表达4种荧光蛋白的转基因克隆猪。研究组通过电穿孔的方法... 据悉,在中科院广州生物医药与健康研究院成功培育出了一种特殊的转基因克隆猪,这种克隆猪在特定波长的激发光下可分别发出红、黄、绿、青4种荧光,这是国际上首次获得能够同时表达4种荧光蛋白的转基因克隆猪。研究组通过电穿孔的方法分别将红色、黄色荧光蛋白、绿色以及青色荧光蛋白的4种基因同时转入长白猪胎儿成纤维细胞,然后进行体细胞克隆,将克隆胚胎移入代孕母猪体内,最终获得11头转基因克隆猪。 展开更多
关键词 黄色荧光蛋白 克隆猪 培育 胎儿成纤维细胞 学者 体细胞克隆 转基因 生物医药
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水稻硫转运蛋白基因OsST的亚细胞定位 被引量:1
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作者 王雪艳 潘露琪 +2 位作者 楼依哲 葛颖慧 赵海军 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10190-10191,10332,共3页
[目的]构建水稻硫酸根转运基因OsST与YFP黄色荧光蛋白融合表达载体,对OsST蛋白进行亚细胞定位。[方法]从水稻叶片的cDNA中克隆OsST基因ORF全长,测序验证后连入pA7-YFP表达载体,通过基因枪将融合载体转入洋葱上表皮细胞,在激光共聚焦显... [目的]构建水稻硫酸根转运基因OsST与YFP黄色荧光蛋白融合表达载体,对OsST蛋白进行亚细胞定位。[方法]从水稻叶片的cDNA中克隆OsST基因ORF全长,测序验证后连入pA7-YFP表达载体,通过基因枪将融合载体转入洋葱上表皮细胞,在激光共聚焦显微镜下观察细胞中荧光发光部位。[结果]OsST蛋白定位于细胞膜和核膜上。[结论]为进一步研究硫转运蛋白的功能及硫酸根运输的机理奠定了基础。 展开更多
关键词 硫转运蛋白 亚细胞定位 黄色荧光蛋白 水稻
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甘蔗黄叶病毒P0蛋白分子特性及其抑制RNA沉默活性
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作者 林艺华 肖胜华 +4 位作者 刘营航 陈建生 傅华英 陈如凯 高三基 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第23期4627-4636,共10页
【目的】甘蔗黄叶病(yellow leaf,YL)是一种主要的甘蔗病毒病害,在全球多数甘蔗种植国家或地区普遍发生,已对甘蔗生产造成严重威胁。其病原为甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV),属于黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属成员。研... 【目的】甘蔗黄叶病(yellow leaf,YL)是一种主要的甘蔗病毒病害,在全球多数甘蔗种植国家或地区普遍发生,已对甘蔗生产造成严重威胁。其病原为甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV),属于黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属成员。研究SCYLV编码的沉默抑制子P0蛋白的分子特征、保守结构域及其在自然寄主甘蔗上抑制RNA沉默的功能,为下一步从RNA沉默水平解析SCYLV致病分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR克隆技术获得SCYLV中国分离物CHN-FJ4编码的RNA沉默抑制子基因P0及其两个缺失突变体P0Δ2-15(N端缺失15个氨基酸)和P0Δ155-256(C端缺失102个氨基酸),然后定向克隆到单子叶植物表达载体p Ubi-nos(空载体)上,获得重组质粒。利用甘蔗嫩叶组织瞬时表达系统鉴定病毒RNA沉默抑制子技术,结合Image J软件定量分析P0及其两个缺失突变体抑制外源基因EYFP瞬时表达活性的变化。番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus,TBSV)编码的P19作为沉默抑制子阳性对照。【结果】P0核苷酸序列的遗传进化分析结果显示,所获得的SCYLV病毒分离物CHN-FJ4为BRA基因型,与其他BRA基因型分离物氨基酸序列一致性为96.1%—98.4%。利用MEME在线软件预测P0蛋白的保守结构域,结果表明P0蛋白含有3个显著的保守区。分别位于第1—60、76—125和161—210氨基酸残基。通过Datamonkey在线服务器(http://www.datamonkey.org)提供的5种运算方法分析P0蛋白氨基酸位点的选择压力,结果显示P0蛋白具有8个氨基酸正向选择位点。将含有P0及其缺失突变体的重组质粒连同含EYFP报告基因的p TEM12质粒采用基因枪轰击法分别导入甘蔗嫩叶组织细胞,轰击后48—120 h,P0和P19逐渐地提高EYFP荧光表达点数和荧光表达水平;在120 h,与p Ubi-nos空载体(不含沉默抑制子)对照组相比,P0和P19均显著地提高甘蔗嫩叶组织EYFP荧光表达点数和荧光表达水平,分别达1.6倍和4.0倍以上。P0与P19抑制RNA沉默活性水平没有显著差异(P>0.05)。P0蛋白N端缺失15个氨基酸(P0Δ2-15)和C端缺失102个氨基酸(P0Δ155-256)均丧失了沉默抑制子的功能,荧光表达与不含沉默抑制子对照组相当。【结论】在甘蔗嫩叶组织EYFP瞬时表达体系上,P0能够显著地提高外源基因EYFP表达水平。P0蛋白N端15个氨基酸和C端102个氨基酸含有显著的保守区域,是P0发挥沉默抑制子功能所必需的。 展开更多
关键词 甘蔗黄叶病毒 P0蛋白 RNA沉默抑制子 黄色荧光蛋白
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YFP-CD18融合蛋白在U937细胞株中的表达与鉴定
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作者 严鸣 毛积芳 +3 位作者 钟纪根 何健 朱秋峰 徐仁宝 《生物技术》 CAS CSCD 2003年第4期4-6,共3页
目的 :构建并表达Mac - 1的β链CD18与黄色荧光蛋白 (YFP)的融合蛋白YFP -CD18,为进一步直视研究Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将CD18的全长cDNA与pEYFP -C1进行酶切 ,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载... 目的 :构建并表达Mac - 1的β链CD18与黄色荧光蛋白 (YFP)的融合蛋白YFP -CD18,为进一步直视研究Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将CD18的全长cDNA与pEYFP -C1进行酶切 ,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载体 ,并将其转染至U937细胞株中进行表达。通过荧光显微镜观察转染成功后的U937细胞黄色荧光是否存在 ,以及流式细胞术检测确定PMA刺激后YFP -CD18活化后可否由胞浆内转位至膜上和测定PMA活化前后转染的U937细胞与其配基ICAM - 1粘附活性的变化等方面来进行鉴定。结果 :经酶切鉴定 ,pYFP -CD18构建正确 ,转染U937细胞株后 ,可见YFP -CD18融合蛋白发出的黄色荧光。结论 :构建完成YFP -CD18融合基因并可以在U937细胞株中进行表达。 展开更多
关键词 YFP CD18 融合蛋白 U937细胞株 表达 黄色荧光蛋白
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表达H9N2禽流感病毒HA1蛋白的转基因和缓艾美耳球虫的构建 被引量:1
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作者 秦梅 汤新明 +4 位作者 刘贤勇 陶鸽如 索静霞 田秀玲 索勋 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2014年第4期233-239,共7页
H9N2亚型禽流感病毒已经被证实可以传播到人类,对它存在的潜在危害已受到越来越多的关注。因此,研究安全而有效的H9N2禽流感病毒疫苗已迫在眉睫。为研究和缓艾美耳球虫作为活载体表达及运输禽流感病毒抗原的潜能,本研究构建了可稳定... H9N2亚型禽流感病毒已经被证实可以传播到人类,对它存在的潜在危害已受到越来越多的关注。因此,研究安全而有效的H9N2禽流感病毒疫苗已迫在眉睫。为研究和缓艾美耳球虫作为活载体表达及运输禽流感病毒抗原的潜能,本研究构建了可稳定表达H9N2禽流感病毒HA1蛋白的转基因和缓艾美耳球虫。利用黄色荧光蛋白(YFP)及融合的乙胺嘧啶抗性基因(DHFR-TSm2m3)作为报告基因及筛选基因,我们将表达H9N2禽流感病毒HA1抗原的质粒载体核转球虫子孢子,接种鸡后在乙胺嘧啶药物的选择压力下进行筛选并连续传代获得转基因和缓艾美耳球虫系。利用染色体步移和免疫印迹证实了HA1基因的成功插入和表达;利用间接免疫荧光证实HA1蛋白定位于球虫子孢子细胞膜表面和头部。研究进一步发现,转基因球虫的繁殖力与野生球虫相当,感染后亦于第6d达到排卵囊高峰。该转基因和缓艾美耳球虫株具有作为疫苗活载体的潜能。 展开更多
关键词 和缓艾美耳球虫 转染 黄色荧光蛋白 H9N2禽流感病毒
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功能型DNA重组修复蛋白质RecR的体内分布示踪 被引量:3
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作者 邱洁芳 潘学峰 《自然科学进展》 北大核心 2009年第7期704-710,共7页
RecR是参与大肠杆菌(E.coli)同源重组的蛋白质,在真核生物中存在功能保守性组分.通过构建recR-yfp融合基因及其表达载体,对大肠杆菌菌体内RecR蛋白的分布情况进行了活体观察.显微镜观察结果表明,RecR蛋白一般在菌体的拟核区起作用.通过... RecR是参与大肠杆菌(E.coli)同源重组的蛋白质,在真核生物中存在功能保守性组分.通过构建recR-yfp融合基因及其表达载体,对大肠杆菌菌体内RecR蛋白的分布情况进行了活体观察.显微镜观察结果表明,RecR蛋白一般在菌体的拟核区起作用.通过对比紫外线敏感性,Re cR-YFP在重组质粒上提高了recR缺陷型大肠杆菌的抗紫外线能力,表明重组质粒表达的融合蛋白RecR-YFP具有生物活性,能够提高recR缺陷型大肠杆菌的存活率. 展开更多
关键词 RecR 黄色荧光蛋白DNA修复 同源重组 大肠杆菌
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维隆气单胞菌外膜蛋白AII的植物瞬时表达系统的构建
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作者 夏妍 赵利峰 +2 位作者 周天惠 张乐祎 赵宝华 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2014年第1期86-91,共6页
以维隆气单胞菌HBJY01为模板通过PCR技术扩增其外膜蛋白AII(AvompAII)基因片段,将序列正确的AvompAII基因片段与含有黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,yfp)基因的表达载体pCAMBIA1300重组,将该重组表达载体转化到农杆菌(Agrobac... 以维隆气单胞菌HBJY01为模板通过PCR技术扩增其外膜蛋白AII(AvompAII)基因片段,将序列正确的AvompAII基因片段与含有黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,yfp)基因的表达载体pCAMBIA1300重组,将该重组表达载体转化到农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101中用于转染烟草叶片细胞.通过激光扫描共聚焦成像系统检测方法和RT-PCR的方法来检测融合表达AvompAII基因的黄色荧光蛋白的表达与AvompAII基因在烟草叶片中的转录情况.从维隆气单胞菌HBJY01中克隆出大小为996bp的AvompAII基因序列,并成功构建了AvompAII蛋白的植物瞬时表达系统.通过该方法能方便可靠地构建植物瞬时表达系统,并进一步对维隆气单胞菌所引起的水产疾病的发现和实际生产应用提供了实验基础. 展开更多
关键词 维隆气单胞菌 外膜蛋白 黄色荧光蛋白 烟草 瞬时表达
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夹心ELISA法测定基因重组球虫表达异源蛋白的水平
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作者 罗伏兵 徐发荣 +5 位作者 王慧强 马志军 汤新明 刘贤勇 索勋 刘晓冬 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第8期36-38,I0005,共4页
为了评估基因重组球虫表达异源蛋白的水平,本文以表达黄色荧光蛋白的基因重组球虫为模型,建立检测基因重组球虫可溶性蛋白中黄色荧光蛋白含量的夹心ELISA方法。基于此,我们检测了不同启动子调控蛋白表达的基因重组球虫中黄色荧光蛋白的... 为了评估基因重组球虫表达异源蛋白的水平,本文以表达黄色荧光蛋白的基因重组球虫为模型,建立检测基因重组球虫可溶性蛋白中黄色荧光蛋白含量的夹心ELISA方法。基于此,我们检测了不同启动子调控蛋白表达的基因重组球虫中黄色荧光蛋白的含量,发现His4启动子调控表达的黄色荧光蛋白占球虫可溶性蛋白的3.1‰,而SAG13启动子调控表达的黄色荧光蛋白占球虫可溶性蛋白的9.4‰。结果表明,夹心ELISA法可用于检测基因重组球虫中异源蛋白的表达水平,并具有较高的灵敏性。本方法为评估基因重组球虫表达异源抗原的含量和优化基因重组球虫作为疫苗载体的研究提供了科学依据,同时也为其他类型疫苗载体或相关研究提供借鉴。 展开更多
关键词 基因重组球虫 黄色荧光蛋白 ELISA 表达水平 疫苗载体
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