基于泛基因组学和消减蛋白质组学技术筛选金黄色葡萄球菌新型抗菌靶点及其药物的分子对接分析

目的:应用泛基因组学和消减蛋白质组学技术从金黄色葡萄球菌基因组中筛选新抗菌靶点,为抗金黄色葡萄球菌药物的研发奠定基础。方法:在美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库中以金黄色葡萄球菌为关键词检索全基因组测序数据,收集50个测序级别为Complete的菌株基因组数据。采用BPGA工具对基因组数据进行泛基因组分析获得金黄色葡萄球菌核心基因,采用消减蛋白质组学技术从中筛选获得潜在抗菌靶点,以潜在抗菌靶点为受体,采用LibDock软件从美国食品药品监督管理局(FDA)批准的药物库中筛选潜在的抗金黄色葡萄球菌药物,并采用分子对接技术分析药物和靶点的结合能力。结果:50个金黄色葡萄球菌基因组中共有14379个基因家族,其中1620个为核心基因。消减蛋白质组学分析,酪氨酸自激酶1335为潜在的抗金黄色葡萄球菌靶点。采用LibDock软件筛选出巴龙霉素、替诺福韦二吡呋酯和阿德福韦等9个化合物可能针对该靶点蛋白发挥抗金黄色葡萄球菌作用,分子对接结果显示靶点与化合物结合力良好。结论:酪氨酸自激酶可能是一种抗金黄色葡萄球菌潜在的靶点。

中美食品中金黄色葡萄球菌检验标准的异同

金黄色葡萄球菌是一种常见的能引起食物中毒的食源性致病菌,如若控制不当,会严重危害人类健康。准确的鉴定是食源性致病菌防控工作的关键,而检验标准又是食源性致病菌鉴定的基础与依据。为使我国食品中金黄色葡萄球菌的检测更加科学准确,本文对中国及美国食品中金黄色葡萄球菌的检验标准进行了系统比较分析。结果表明,我国食品中金黄色葡萄球菌的检验标准与美国所使用标准既有不少的相同点,在检验方法数量、操作步骤等方面又有很多的不同点。美国所使用标准中有些细节规定非常值得我国借鉴,比如血浆凝固酶试验结果分级及补充生化鉴定试验的规定。建议在我国食源性致病菌相关检验标准的制修订过程中,积极借鉴其他国家及国际组织检验标准中的先进之处,不断提高我国食品安全标准的制修订水平。

赶黄草水煎液对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响

目的 探究赶黄草水煎液在体外对金黄色葡萄球菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜(MRSA)形成的影响。方法 采用微量肉汤稀释法测定赶黄草水煎液对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),根据MIC和MBC绘制杀菌曲线,采用结晶紫染色法和激光共聚焦观察赶黄草水煎液对SA和MRSA生物膜形成的影响,并通过测定胞外多糖和胞外DNA的含量研究赶黄草水煎液破坏SA和MRSA生物膜的作用方式。结果 赶黄草水煎液对SA的MIC和MBC分别为1.36和2.71 mg/mL,对MRSA的MIC和MBC为2.71和5.73 mg/mL;赶黄草水煎液可使SA和MRSA均生长受到抑制,抑制生物膜的形成、减少胞外多糖和胞外DNA的释放。结论 赶黄草水煎液对SA和MRSA具有良好的抑菌作用,可通过抑制胞外多糖和DNA的分泌破坏生物膜的形成。

NF-κB(p50/p65)介导的促炎微小RNA信号转导在金黄色葡萄球菌感染中的作用

目前已经在金黄色葡萄球菌感染中鉴定并部分表征了NF-κB(p50/p65)调节的微小RNA (miRNA),miRNA包括miR-125b、miR-193b-5p、miR-128、miR-146a、miR155、bta-miR-223和miR-30a。试验结果显示,在金黄色葡萄球菌感染性疾病中,这种促炎性miRNA家族的上调协调了致病性基因表达,为阐述金黄色葡萄球菌感染机制、疾病的传播和严重程度提供了新的可能。本文就当前研究领域涉及NF-κB调节miRNA介导的信号传导途径,以及针对NF-κB和/或促炎性miRNA信号传导的治疗策略进行综述,为后续相关研究提供参考。

黄色羊肚菌鉴定及人工栽培研究

羊肚菌是一种天然的发酵乳酸和脂肪酶制剂,具有多种保健功效,其所具备的营养价值以及美容养颜等功能在各行业中都占据重要地位。文章阐述了目前的羊肚菌种类及具体分布情况,概述了根据羊肚菌生长环境探索人工栽培技术研究的发展情况,分析了我国目前在人工栽培黄色羊肚菌技术上所存在的问题,针对存在的问题进行了栽培研究,希望为我国黄色羊肚菌人工栽培产业发展以及有效降低羊肚菌人工栽培成本等方面提供参考意见。

4株金黄色葡萄球菌噬菌体的分离鉴定、生物学特性及其基因组分析

金黄色葡萄球菌能够引起食源性疾病,易产生多重耐药性,因此噬菌体在金黄色葡萄球菌防控方面的应用受到了广泛关注。该研究分离了4株噬菌体SAPYZU-04、SAPYZU-15、SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14。并对其形态学特征,生物学特性以及全基因组序列进行分析。结果表明,烈性噬菌体SAPYZU-04和SAPYZU-15属于Herelleviridae科,温和噬菌体SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14属于Azeredovirinae亚科。而且,烈性噬菌体SAPYZU-04和SAPYZU-15裂解率高达100%(51/51),然而温和噬菌体SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14的裂解率分别为94%(48/51)和86%(44/51)。当温度为40~60℃,pH值为3~12时,4株噬菌体的活性较高。一步生长曲线显示,烈性噬菌体SAPYZU-04和SAPYZU-15的潜伏期均为10 min,裂解量分别为每个细胞210和322 PFU;而温和噬菌体SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14的潜伏期分别为15和30 min,裂解量分别为每个细胞52和49 PFU。全基因组序列分析结果表明4株噬菌体均不含任何毒力、耐药基因,但烈性噬菌体SAPYZU-04和SAPYZU-15具有多个裂解酶基因和DNA代谢相关基因。该研究证实2株烈性噬菌体SAPYZU-04和SAPYZU-15的裂解谱更广、潜伏期更短、爆发量更大,更适合作为潜在的生物抑菌剂,应用于食品安全领域。

枯草芽孢杆菌BBs-27发酵液性质及脂肽对黄色镰刀菌的抑菌作用

枯草芽孢杆菌BBs-27从药用植物石豆兰中分离,对黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)具较强抑菌活性。为进一步掌握发酵液中抑菌成分及抑菌机制,对发酵液耐酸碱、紫外照射、酶解等特性进行研究,在此基础上,借助LC-MS技术对发酵液中脂肽类型进行鉴定,并从形态、生理和转录组3个层面上分析抑菌机制。结果表明,发酵液pH=6时抑菌活性最强,pH<4或>10时活性明显降低。超过10 min紫外照射活性显著降低。易被其他3种蛋白酶水解,但对胃蛋白酶不敏感,推测抑菌物是以脂肽类为主且包含少量蛋白质,LC-MS分析证实,抗菌肽主要是伊枯草菌素和丰原素两大类。SEM结果显示,脂肽处理下菌丝卷曲、畸形、异常膨大。脂肽对菌丝体内SOD、POD、CAT及可溶性蛋白、可溶性糖均有显著影响,5项生理指标均与抑菌率极显著相关。以禾谷镰刀菌基因组为参照组装,样品中Q20>96%,Q30>91%,GC含量在52.27%-52.87%,比对率>78%。共筛选出712个DEGs,包括393个上调基因和319个下调基因。Go功能注释分类显示,712个DEGs主要涉及到6个生物学过程、11个细胞组分和12个分子功能。KEEG分析显示,DEGs显著富集在碳水化合物、脂、氨基酸、辅助因子和维生素代谢等途径,筛选出了重要的脂肽响应基因GAO、CHS3、MPG1、FGSG_02016、IPDH、ODC,它们通过干扰细胞壁、细胞膜、氨基酸、抗氧化酶的正常合成来影响菌体生长。该结果为进一步开发和利用安全微生物农药奠定理论基础。

黑松—黄色须腹菌共生体根际菌根辅助细菌的筛选及鉴定

采用干皿对抗法和双接种盆栽试验,从黑松-黄色须腹菌(Rhizopogen luteous,Rl)菌根根际土壤中分离筛选获得2株菌根辅助细菌HR10和HR15菌株。离体互作结果表明,菌株HR10和HR15的菌体及胞外代谢产物均可有效提高Rl菌丝的生长,其菌体对Rl菌丝生长的增长率分别达到13.1%和33.6%。盆栽试验表明,HR10和HR15菌株分别与Rl双接种黑松幼苗后对松苗生长有显著的促进作用,同时还有效提高了根系的菌根侵染率,单接Rl处理的菌根侵染率为40.83%,Rl+HR10和Rl+HR15处理的分别为71.54%和60.97%。单接种HR10和HR15也可促进黑松生长,其中单接种HR10处理松苗长势好于双接种。这说明HR10和HR15既是黑松-黄色须腹菌的菌根辅助细菌,也是植物促生细菌,对黑松的生长具有直接的促进作用。经形态学观察、Biolog微生物系统鉴定及16S rRNA分析,菌株HR10和HR15分别被鉴定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)和藤黄微球菌(Micrococcus luteus),两者在GenBank数据库中的登录号分别为FJ040808和FJ040810。

受黄色镰刀菌侵染的马铃薯薯块的抗氧化酶、细胞壁防御酶及StLTPa1基因的表达特性

黄色镰刀菌Fusarium culmorum为黑龙江省马铃薯干腐病主要致病菌,干腐病可以导致马铃薯在窖藏过程中发生腐烂,影响薯块的商品价值和食用价值,为进一步研究马铃薯干腐病的发生和防治,本研究采用黄色镰刀菌对不同抗性的马铃薯块茎进行侵染,对病原菌侵染过程中薯块的抗氧化酶及细胞壁降解酶变化及病程相关基因的表特性进行了研究。结果表明,当黄色镰刀菌侵染块茎时,块茎中的可溶性蛋白和丙二醛(malondlaldehyde,MDA)含量,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活性、几丁质酶(chitinase)和β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-glucanase)活性都呈现不同程度的上升趋势。非特异性脂质转移蛋白基因St LTPa1表达量随着黄色镰刀菌的侵染时间呈波动性,在植物防御反应中发挥一定的作用。

致皮肤软组织感染社区获得性金黄色葡萄球菌的分子生物特征分析

目的：了解解放军总医院第一附属医院致皮肤软组织感染社区获得性金黄色葡萄球菌（ CA-SA）的流行情况、耐药特点、毒力和致病因素信息。方法收集2009年1月至2010年8月皮肤科、门诊、急诊55例患者化脓性皮肤软组织感染检测标本，进行细菌鉴定和药敏试验，采用多位点序列分型（ MLST）、金黄色葡萄球菌A蛋白（ SPA）分型和毒素基因检测筛查。结果55例中分离到社区获得性甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（CA-MSSA）12株；药敏结果显示CA-MSSA除对红霉素、克林霉素、四环素、庆大霉素和左氧氟沙星耐药性较高（8.3％～50.0％），对其他抗菌药物均敏感。毒素基因检测显示杀白细胞素（pvl）、肠毒素C（sec）和毒性休克综合征毒素－1（tsst-1）在CA-MSSA中的阳性率分别为33.3％，25.0％和8.3％，未检测到葡萄球菌肠毒素H（seh）和葡萄球菌表皮剥脱毒素（et）；结合MLST和SPA分型，发现CA-MSSA中的克隆有ST5-t002（2株）、ST22-t309（2株）及 ST398-t034、ST15-t5864、ST7-t091、ST25-t078、ST30-t318、ST121-t1425、ST800-t1425、ST630-t377各1株。结论我院致皮肤软组织感染CA-MSSA菌株对抗菌药物的敏感性较高，分子分型具有多样性，携带多种毒素。

下呼吸道感染患者痰菌中金黄色葡萄球菌的感染及耐药性变化

研究12年间下呼吸道感染患者痰菌中金黄色葡萄菌的感染情况及耐药性的变化。结果下呼吸道感染患者中金黄色葡萄球菌的感染有增高趋势。其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的构成比增高非常显著。MRSA对环丙沙星的耐药性增高也非常显著。

乳酸链球菌素对金黄色葡萄球菌抑制条件的研究

研究温度、pH、使用浓度及保存条件等对乳酸链球菌素抑 制金黄色葡萄球菌的影响,结果表明,温度、pH会显著影 响乳酸链球菌素的活性,酸性条件下,乳酸链球菌素对温 度较稳定,随着pH的增加,温度越高,乳酸链球菌素活 性下降越显著。乳酸链球菌素对沙门氏菌无抑制作用,在 温度为10℃、pH5.0的条件下100mg/kg浓度的乳酸链球 菌素在96h内可以抑制培养基中浓度为5.0×106个/mL 的金黄色葡萄球菌的生长。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌烫伤样皮肤综合征16例临床及药敏分析

1．1一般资料2009年8月-2012年5月本院收治的261例金黄色葡萄菌烫伤皮肤综合征中16例经细菌培养为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），16例中男11例，女5例，年龄11个月～8岁，婴幼儿共6例，3～5岁患儿8例。患者来自城镇2例，其余14例均来自乡村。发病季节：1—3月1例，4—6月2例，7～9月12例，10～12月1例；病程1～10d。

核桃枝干上一株黄色镰刀菌的鉴定及室内防治药剂筛选

近年来发生的核桃幼茎变黑腐烂病害严重影响该地区的产业健康发展。为确定病原,提高施药防治效果,对核桃幼茎病原生物进行分离、鉴定及室内杀菌剂筛选。结果表明,宜昌核桃枝干黑腐病主要由黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)引起,且对不同真菌杀菌剂均有一定的敏感性。室内毒力测定结果显示,40%氟硅唑乳油对黄色镰刀链菌的毒力相对最强,EC50为0.3837μg/mL;其次为43%戊唑醇悬乳剂,EC50为9.1921μg/mL;毒力最弱的是70%甲基硫菌灵可湿性粉剂,EC50为2010.961μg/mL。在生产实践中可考虑用40%氟硅唑乳油和43%戊唑醇悬浮剂作为该种病害的主要防治药剂。

基于流式分析技术的奶粉中金黄色葡萄球菌活菌快速定量检测方法研究

建立了一种奶粉中金黄色葡萄球菌活菌快速定量检测新方法。以异硫氰酸荧光素偶联的金黄色葡萄球菌多克隆抗体特异性标记金黄色葡萄球菌,再通过碘化丙啶来区分死活菌,建立流式分析法,并应用于奶粉样品中金黄色葡萄球菌活菌定量检测。结果表明,该流式分析法特异性好;当人工污染奶粉样品中金黄色葡萄球菌浓度在2.72×10^(3)~2.80×10^(8) CFU/mL之间时,流式检测方法与平板计数方法检测结果一致;该方法的检测限为2.72×10^(3) CFU/mL,检测时间为35 min。该方法具有快速和高效的优点,在食源性致病菌的快速检测和预警中具有良好的应用前景。

进境美国高粱种子中产黄色镰孢菌的检测与鉴定

从进境的美国高粱种子中分离到一株疑似产黄色镰孢菌(Fusarium thapsinum)的菌株A009。该菌株菌落形态和显微特征均与产黄色镰孢菌一致。基于双基因位点(ITS、EF-1α)进行最大似然分析,构建系统发育树。结果表明,菌株A009与Fusarium thapsinum(Gibberella thapsina)聚集在一个分支上,最大相似度为100%。致病性测试表明,菌株A009接种高粱幼苗叶片,4 d后在接种部位出现萎蔫症状。根据上述试验结果,将进境美国高粱种子中的菌株A009鉴定为产黄色镰孢菌。

木醋液对几种植物病原真菌的抑菌活性与作用机制

为探究木醋液在植物病害生物防治中的实际应用及其对病原菌的作用机制,试验通过测定菌落生长直径和半数有效浓度(EC_(50)值)评价木醋液对几种供试植物病原真菌的抑菌活性。考察木醋液对供试敏感菌株孢子萌发、菌丝干重、细胞膜通透性、细胞壁完整性、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、还原性糖含量和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量等指标的影响,结合电镜观察菌体超微结构变化揭示其作用机制。结果表明:木醋液对7种供试植物病原真菌均具一定的抑制效果,对黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)的抑菌作用表现最为显著,其EC_(50)值为4.98μL·mL^(-1),在5.5μL·mL^(-1)时,木醋液对其孢子萌发和生物量抑制率分别达90.09%和95.22%。经木醋液处理后,F.culmorum的细胞结构遭到破坏,其菌丝细胞壁变薄且不完整,细胞器结构紊乱,细胞膜通透性增加;菌丝体碱性磷酸酶活性、可溶性糖含量、还原性糖含量、可溶性蛋白含量和ATP含量显著降低;碘化丙啶染色孢子后,孢子荧光强度显著增加。以上结果表明,木醋液主要通过破坏真菌细胞结构、扰乱菌体物质代谢和能量代谢来实现其抑菌效果。

ITP伴金黄色葡萄球菌肺炎并发心肌梗死患者1例

ITP(血小板减少性紫癜)是一种自身免疫性疾病,主要临床表现为出血,如皮肤黏膜、消化道、颅内出血等,近30%的成人ITP为难治性的,慢性难治性ITP的并发症发生率甚至死亡风险极高[1]。金葡菌肺炎多表现以痰、血、胸水培养结果有金黄色葡萄菌生长为主要依据[2]。但本患者临床特点为高热畏寒,咳嗽、咳痰,合并肝功能异常,胸部CT双肺多发散在多个大小不等类圆形空洞及斑片影,