基于谱-效关系筛选菊茎叶总黄酮抗氧化物质基础及其机制探讨

为探讨菊茎叶总黄酮(total flavonoids from stems and leaves of Chrysanthemum morifolium,TFCSL)抗氧化应激的活性成分,阐明其药效物质基础和作用机制。采用HPLC建立不同批次TFCSL指纹图谱;以高浓度葡萄糖诱导人脐静脉内皮细胞建立氧化损伤模型,将丙二醛含量、乳酸脱氢酶含量和超氧化物歧化酶活性作为药效指标;采用灰色关联度和偏最小二乘法分析其谱-效关系确定抗氧化药效物质基础;基于网络药理学结合分子对接探究核心靶点及作用通路。从12批次TFCSL指纹图谱中确定12个共有峰,指认其中9个化学成分;各批次总黄酮样品均可减少细胞凋亡、降低丙二醛及乳酸脱氢酶含量、提高超氧化物歧化酶活性;综合2种数学模型确定峰5(芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷)、峰6(异绿原酸C)、峰7(香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷)为抗氧化物质基础;筛选出的3个活性成分作用于抗氧化应激的33个靶点;关键靶点为TNF、CASP3、EDNRA、XDH、PTGS2、MMP2,主要涉及脂质和动脉粥样硬化信号通路、IL-17信号通路、糖尿病并发症AGE-RAGE信号通路、TNF通路、MPKA通路等信号通路;分子对接结果显示活性成分与关键靶点之间均有较好的结合力。表明TFCSL抗氧化应激的物质基础可能为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、异绿原酸C、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷,推测通过TNF、CASP3等靶点作用动脉粥样硬化信号通路、IL17信号通路发挥作用,体现菊茎叶多成分、多靶点抗氧化的作用特点。

黄芩茎叶发酵黄酮的体外抑菌及抗炎作用研究

试验旨在探究黄芩茎叶发酵黄酮的抗菌抗炎效果,以大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌为试验菌种,测定最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)及抑菌圈大小。50只SPF级昆明小鼠随机分为5组,每组10只,除对照组(Con组)各组小鼠均腹腔注射脂多糖(LPS,4 mg/kg),Con组灌胃相同剂量的生理盐水,阳性药物组(LPS+DM组)灌喂0.5 mg/kg地塞米松,原药组(LPS+SBSL组)和发酵药物组(LPS+FSBSL组)灌喂8 mg/kg原药和发酵黄酮。试验期7 d。结果显示,发酵黄酮MIC、MBC值最低的分别是大肠杆菌和金黄色葡萄球菌;在250 g/L条件下,发酵黄酮对大肠杆菌、痢疾志贺氏菌和金黄色葡萄球菌具有中等敏感性。与LPS组相比,LPS+FSBSL组小鼠死亡率明显降低;LPS+SBSL组小鼠肝脏指数极显著高于LPS+FSBSL组(P<0.01),LPS组脾脏指数极显著高于Con组(P<0.01)。与LPS组比,LPS+DM组和LPS+SBSL组小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)含量极显著升高(P<0.01);与LPS+DM组比,LPS+SBSL组和LPS+FSBSL组小鼠血清IL-6含量极显著升高(P<0.01)。与Con组比,LPS组小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著升高(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+FSBSL组小鼠肺脏组织中IL-6含量显著升高(P<0.05)。与LPS+SBSL组相比,LPS+FSBSL组小鼠肺脏组织中白细胞介素-1β(IL-1β)含量显著升高(P<0.05)。研究表明,黄芩茎叶发酵黄酮对痢疾志贺氏菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑菌效果,安全剂量为8 mg/kg,对LPS感染后小鼠的死亡率具有抑制作用,同时可以调节LPS感染后小鼠血清和肺脏中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α含量。

黄芩茎叶总黄酮抗心律失常作用研究

目的 观察黄芩茎叶总黄酮 (以下简称总黄酮 )的抗心律失常作用。方法 采用乌头碱和冠状动脉结扎复灌诱发大鼠的室性心律失常、哇巴因诱发豚鼠的室性心律失常模型 ,记录总黄酮对乌头碱和哇巴因致室早 (VP)、室颤 (VF)、心脏停跳 (HS)的剂量和冠状动脉结扎复灌致 VP、VF及 HS发生率。结果 总黄酮 2 0 ,4 0 mg/kg显著增加乌头碱致 VP、VF及 HS的阈剂量 ,减少冠脉结扎复灌诱发大鼠 VP、VF及 HS的发生率 ;可提高哇巴因诱发豚鼠 VP、VF的阈剂量 ,但对致死剂量无明显影响。结论 总黄酮对实验性心律失常有显著的拮抗作用。

黄芩茎叶总黄酮治疗2型糖尿病性高脂血症大鼠的实验研究

目的观察黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对2型糖尿病性高脂血症大鼠血糖、血脂代谢及胰岛素抵抗的影响,探究其可能的作用机制。方法高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病合并高脂血症大鼠模型,观察SSTF对大鼠血糖、血脂、胰岛素敏感性指数、抗氧化能力等方面的影响。结果SSTF大、小剂量组(150,75mg·kg-1)能显著降低实验大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,不同程度的降低甘油三酯(TG)水平,显著升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平和胰岛素敏感性指数(ISI)。SSTF能显著降低血清和肝脏中丙二醛(MDA)的含量,显著增加血清超氧化物歧化酶(SOD)的活性,不同程度地提高血清谷胱甘肽(GSH)含量。结论黄芩茎叶总黄酮降糖、降脂作用确切,并能改善胰岛素抵抗作用。SSTF的作用机制可能和其显著的抗氧化作用有关。

黄芩茎叶总黄酮预处理对缺血再灌注心肌脂质过氧化损伤的保护作用

目的：探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)预处理对缺血再灌注心肌脂质过氧化损伤的保护作用。方法：雄性大鼠分为SSTF预处理组、缺血再灌组和假手术组,缺血再灌术前给SSTF组大鼠SSTF(50、100、200mg·kg^1·d^(-1))灌胃,制备缺血再灌模型,分别测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)水平。结果：SSTF预处理可不同程度显著降低缺血再灌注引起的MDA含量,提高SOD活性,降低LDH、CK水平。结论：SSTF预处理能通过保护心肌抗氧化酶的活性,抵制脂质过氧化反应,减轻自由基对心肌的损害,对缺血再灌注心肌产生保护作用。

黄芩茎叶总黄酮调血脂作用研究

黄芩茎叶总黄酮 (以下简称总黄酮 )是黄芩茎叶的主要有效部位。动物实验结果证明 ,在给大鼠喂以高脂饲料的同时 po总黄酮能明显抑制血清总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)和低密度脂蛋白 (L DL- C)的升高。对已经形成高脂血症的大鼠 ,也能明显降低血清 TC、TG、L DL- C的水平及动脉粥样硬化指数 (AI,AI=TC-HDL- C/ HDL- C)。

黄芩茎叶总黄酮对人宫颈癌Hela细胞株体外生长的影响

目的探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)治疗人宫颈癌的可行性。方法配制含人宫颈癌细胞的细胞悬 液(4×105个／ml),取96孔板,每孔接种细胞悬液100μl,阴性对照组设6个孔均不点药,阳性对照药为5-氟尿嘧 啶(5-Fu),取0.01、0.1、1、10、100μg／ml5个浓度,SSTF选取浓度与5-Fu相同,每个浓度点3个孔,37℃5％CO2 培养48-72小时后采用MTT法在酶标仪上以570nm波长测定吸光度(A),计算SSTF和5-Fu抑制Hela细胞 株体外生长的抑制率和半数抑制浓度(IC50)。结果 SSTF、5-Fu均可明显抑制肿瘤细胞的生长,其IC50分别为 20.5、10.5μg／ml。结论SSTF能抑制人宫颈癌Hela细胞体外生长,具有一定细胞毒性作用,可作为临床治疗宫 颈癌的药物进一步深入研究。

黄芩茎叶总黄酮预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨黄芩茎叶总黄酮(Scutellaria baiculensis stem-leaf total flavonoid,SSTF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法40只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和SSTF预处理组。SSTF组大鼠于术前1周分别灌胃不同剂量的SSTF〔(17.5、35、70mg/(kg.d)〕,另两组给等量生理盐水。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型。缺血30min、再灌注2h后,观察大鼠心电图的变化;并用免疫组织化学法检测心肌组织中Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果SSTF抑制了缺血再灌注损伤大鼠心电图T波升高,降低了心律失常发生率。缺血再灌注组Bcl-2蛋白表达阳性细胞率明显比假手术组低(P<0.05),Bax蛋白表达阳性细胞率明显较假手术组高,而SSTF预处理组Bcl-2蛋白表达阳性细胞率明显高于缺血再灌注组(P<0.05),Bax蛋白表达阳性细胞率明显较缺血再灌注组为低(P<0.05)。结论SSTF预处理对缺血再灌注的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达进而抑制心肌细胞凋亡有关。

黄芩茎叶总黄酮调血脂作用及其机制的研究

目的:观察黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对实验性高脂血症大鼠脂代谢的影响,初步探讨SSTF降脂机制。方法:在建立大鼠高脂血症模型基础上,观察SSTF对大鼠血脂水平、脂蛋白代谢酶、抗氧化能力等方面的影响。结果:SSTF能显著降低高脂血症大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度,显著升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和ApoAI浓度,提高血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活性。SSTF能显著降低血清和肝脏丙二醛(MDA)含量,增加血清超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结论:SSTF能明显调节高脂血症大鼠脂质代谢紊乱,对脂蛋白有一定的调节作用。提示SSTF可减少动脉粥样硬化的发生,其调脂机制初步认为与提高脂蛋白代谢酶LCAT的活性和提高抗氧化能力有关。

黄芩茎叶总黄酮保肝作用的实验研究

目的研究黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对小鼠急性肝损伤的保护作用。方法小鼠灌胃给药,用四氯化碳(CCl4)和乙醇制备肝损伤模型,用比色法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性、肝脏丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果SSTF(50、100、200mg/kg)可明显降低损伤小鼠血清ALT活性和肝脏MDA含量,提高肝脏SOD活性。结论SSTF对小鼠急性肝损伤有一定的保护作用,其机理可能与SSTF的抗脂质过氧化作用有关。

黄芩茎叶总黄酮对培养大鼠心肌细胞H_2O_2损伤的保护作用

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮保护培养大鼠心肌细胞抗过氧化氢(H2O2)损伤。方法:应用H2O2培养大鼠心肌细胞损伤模型,采用乳酸脱氢酶(LDH)活性及MTT代谢率的测定等方法。结果:与H2O2损伤组比较,黄芩茎叶总黄酮保护组的LDH释放量显著减少(P<0.01),而MTT代谢率显著增高(P<0.01)。结论:黄芩茎叶总黄酮能保护培养大鼠心肌细胞,减轻自由基损伤。

黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血清致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的研究黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对高甘油三酯(HTG)血清致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养HUVEC,终浓度为100 mg.L-1、200 mg.L-1、400 mg.L-1的SSTF分别与HTG氧化损伤的HUVEC共同孵育16 h,通过检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内活性氧(ROS)水平的变化,观察SSTF的保护作用,并通过RT-PCR法检测NADPH氧化酶4(NOX4)mRNA表达,Western blot法检测NOX4蛋白表达。结果各浓度组的SSTF均可明显升高HTG氧化损伤的HUVEC的SOD活性,明显降低MDA含量,减少HUVEC内ROS水平,下调NOX4mRNA表达和蛋白表达(P<0.01)。结论 SSTF对HTG致HUVEC氧化损伤具有保护作用,其可能通过抑制NADPH氧化酶表达进而减少ROS的生成来发挥它的抗氧化作用。

黄芩茎叶总黄酮对大鼠实验性高脂血症的预防作用(英文)

背景:黄芩是一味常用中药,传统药用其根,茎叶一向是被废弃,为充分利用黄芩茎叶资源,本研究所对黄芩茎叶的药理药化进行了系统研究。目的:探讨黄芩茎叶的主要药效部位总黄酮对大鼠实验性高脂血症的预防作用。设计:随机对照实验。单位:承德医学院中药研究所。对象:实验于1999-03/2000-01在承德医学院中药研究所完成。wistar大鼠60只,雄性,初始体质量(200±10)g,由中国医学科学院实验动物繁育场提供,合格证号:01-3008。干预:大鼠60只被随机分为6组,每组10只,正常对照组,高脂模型组,总黄酮小、中、大剂量组(剂量分别为12.5,25,50mg/kg)和氯苯丁酯组(剂量为25mg/kg)。正常对照组饲喂基础饲料,高脂模型组饲喂高脂饲料,总黄酮大、中、小剂量组和氯苯丁酯组,在喂高脂饲料的同时给予相应剂量的药物。连续给药30d,观察大鼠的血脂变化。主要观察指标:应用CL-7200型全自动生化分析仪,检测大鼠血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇的含量,并计算动脉粥样硬化指数(总胆固醇-高密度脂蛋白/高密度脂蛋白)。结果:纳入60只大鼠均进入结果分析。①大鼠血清总胆固醇含量:高脂模型组明显高于正常对照组犤(5.01±1.05,2.33±0.35)mmol/L,(P<0.01)犦;总黄酮小、中、大剂量组分别为(4.15±1.12,3.03±0.31,2.98±0.56)mmol/L,小剂量组与模型组比较差异无显著性(t=1.74,P>0.05),中、大剂量组与模型组比较差异显著(t=5.66～5.23,P<0.01)。②大鼠血清三酰甘油的含量:总黄酮小、中、大剂量组分别为犤(1.22±0.56,1.56±0.41,1.24±0.45)mmol/L犦,与模型组犤(2.14±0.74)mmol/L犦比较差异显著(t=2.19～3.45,P<0.05～0.01)。③大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量:总黄酮小、中、大剂量组分别为犤(2.67±0.45,1.41±0.23,1.29±0.23)mmol/L犦,与模型组犤(3.94±0.42)mmol/L犦比较差异显著(t=5.77～12.71,P<0.05～0.01犦。④大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量:总黄酮小、中、大剂量组分别为犤(0.72±0.23,0.91±0.32,1.05±0.23)mmol/L犦,小剂量组与模型组犤(0.56±0.21)mmol/L犦比较差异无显著性(t=1.51,P>0.05),中、大剂量组与模型组比较差异显著(t=2.92～4.38,P<0.05～0.01)。⑤动脉粥样硬化指数:总黄酮小、中、大剂量组分别为(2.96±1.35,2.10±0.97,1.55±0.41),与模型组(4.23±0.65)比较差异显著(t=3.54～9.49,P<0.01)。结论:黄芩茎叶总黄酮对大鼠长期喂以高脂饲料所造成的血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇的升高有明显的抑制作用,并使高密度脂蛋白胆固醇的含量有一定程度的升高,表明总黄酮对大鼠实验性高脂血症有明显的预防作用。

黄芩茎叶总黄酮调节EAE大鼠Th17/Treg平衡的研究

目的观察黄芩茎叶总黄酮(Scutellaria baicalensisstem-leaf total flavonoids,SSTF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠疾病严重程度和Th17、Treg细胞的影响,初步探讨黄芩茎叶总黄酮对多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)的治疗作用。方法将50只大鼠随机分为正常组、模型组、黄芩茎叶总黄酮高剂量组(200 mg/kg)、黄芩茎叶总黄酮低剂量组(100 mg/kg)和醋酸泼尼松组(6 mg/kg),建模后分别行神经功能评分。灌胃给药16 d后,大鼠脊髓组织行HE染色,ELISA法测定大鼠血清中IL-17、TGF-β水平,流式细胞术检测大鼠外周血Th17、Treg细胞数量。结果与模型组大鼠比较,治疗组大鼠平均神经功能评分降低(P<0.05),炎性细胞浸润减少(P<0.05);血清中IL-17水平显著降低(P<0.05),而TGF-β水平显著升高(P<0.05);外周血中Th17细胞比例明显降低(P<0.05),而Treg细胞比例显著升高(P<0.05)。结论黄芩茎叶总黄酮灌胃给药可以调节CD4+T淋巴细胞亚群Th17/Treg细胞平衡,对EAE大鼠有一定的保护作用。

黄芩茎叶总黄酮对高脂血症兔主动脉VCAM-1、ICAM-1表达的影响

目的观察黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对高脂血症兔主动脉血管细胞黏附分子(VCAM)-1、细胞间黏附分子(ICAM)-1表达的影响,探讨SSTF抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法 24只健康雄性家兔随机分为正常对照组(6只),喂养普通饲料,动脉粥样硬化模型组(18只),喂养高脂饲料。8w后,将AS模型组再随机分为模型组,继续喂养高脂饲料,SSTF治疗组,喂养高脂饲料并灌胃给予SSTF(100、200mg·kg-1.d-1),治疗4w后,处死家兔,测定各组家兔TC、TG、LDL-C,取主动脉做病理切片,免疫组化检测主动脉VCAM-1、ICAM-1的表达。结果 SSTF可以降低高脂饮食兔血清TC、TG、LDL-C水平,作用效果呈剂量依赖性。SSTF能够逆转动脉粥样程度、抑制VCAM-1、ICAM-1的表达。结论 SSTF具有抗AS作用,可能与通过下调VCAM-1、ICAM-1表达,从而抑制血管壁炎症反应有关。

黄芩茎叶总黄酮预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马神经元和血脑屏障形态学的影响

目的：研究黄芩茎叶总黄酮（SSTF）预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马神经元和血脑屏障形态学的影响。方法：SD大鼠随机分成5组，即假手术组，缺血再灌注组，SSTF低、中、高预处理组。采用Longa改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，造模成功后24h对大鼠进行神经功能评分，H—E染色法观察海马CA1区组织病理学改变及神经元密度。透射电镜观察海马神经元、血脑屏障超微结构的变化。结果：SSTF预处理可改善术后大鼠的神经行为；与缺血再灌注组相比，SSTF预处理组海马CA1区神经元密度增加，海马神经元和血脑屏障的超微结构有明显改善，且呈一定的剂量依赖效应。结论：SSTF预处理对局灶性脑缺血再灌注海马神经元和血脑屏障形态学损伤具有一定的保护作用。

黄芩茎叶总黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马神经元Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨黄芩茎叶总黄酮（SSTF）对大鼠海马注射淀粉样蛋白Aβ25~35所致神经元Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法 40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、SSTF 50 mg/kg、100 mg/kg组,每组10只。模型组、SSTF组大鼠于灌胃第8天双侧海马注射Aβ10μg,对照组大鼠海马注射生理盐水,大鼠于灌胃20 d后处死。采用TUNEL法观察大鼠海马神经元凋亡;免疫组化、Western印迹检测海马组织中Bax、Bcl-2的表达,采用光密度值（IOD）表示实验结果。结果 模型组大鼠海马细胞凋亡IOD较对照组明显升高（P〈0.01）,50、100 mg/kg给药组IOD较模型组明显降低（P〈0.01）;免疫组化及Western印迹结果显示模型组Bax表达较对照组明显升高（P〈0.01）,SSTF 50、100 mg/kg组Bax表达较模型组明显降低（P〈0.01）;模型组Bcl-2较对照组明显降低（P〈0.01）,SSTF 50、100 mg/kg组Bcl-2表达较模型组明显升高（P〈0.01）。结论 大鼠海马注射Aβ25~35可引起海马神经元凋亡,其机制可能与Aβ上调凋亡基因Bax表达、降低抗凋亡基因Bcl-2表达有关。SSTF可减轻Aβ引起的神经元凋亡,其机制可能与其调控Bax、Bcl-2表达有关。