基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的巨噬细胞焦亡探讨黄芩黄连药对治疗动脉粥样硬化的作用机制

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路介导的巨噬细胞焦亡探讨黄芩黄连药对(芩连药对)治疗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:体外培养J774A.1细胞,SD大鼠灌胃芩连药对后制备含药血清,MTT法筛选芩连药对含药血清最佳干预浓度。采用不同浓度的含药血清预处理J774A.1细胞后,给予脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)诱导焦亡。光学显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)释放法及Hoechst 33342/碘化丙锭(PI)染色用于检测细胞的损伤情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-18的水平。Western Blot法检测通路及焦亡相关蛋白TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65、NLRP3、ASC、Caspase-1、Cleave-Caspase-1、GSDMD、GSDMD-NT的表达。TLR4基因过表达后,检测通路相关蛋白表达水平及细胞焦亡情况。结果:芩连药对含药血清可改善造模后J774A.1的形态;提高造模后J774A.1细胞的活力、降低LDH释放率及PI细胞阳性率(P<0.05);降低细胞上清液中IL-1β及IL-18的水平(P<0.05);显著下调TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及焦亡相关蛋白的表达(P<0.05);同时过表达TLR4可逆转芩连药对对J774A.1细胞焦亡的保护作用(P<0.05)。结论:芩连药对可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路降低巨噬细胞焦亡水平,从而发挥抗AS的作用。

黄芩黄连药对改善2型糖尿病KK-ay小鼠肝组织炎症作用与TRAF6、IL1α、NF-κB2、RSK1、RSK2蛋白表达下调相关

目的采用蛋白质组学方法探讨黄芩黄连药对改善2型糖尿病KK-Ay小鼠肝组织的炎症作用机制。方法从2型糖尿病模型组和黄芩黄连药对组KK-Ay小鼠肝组织中提取全蛋白,使用nano-LC-LTQ/Orbitrap MS检测差异蛋白,使用Proteome Discoverer软件鉴定蛋白,Sieve软件对肝组织蛋白进行数据分析处理,并通过DAVID数据库KEGG pathway、String等生物信息学方法筛选相关差异蛋白。结果经蛋白质组学研究共发现,模型组与黄芩黄连药对组间存在与肝组织炎症相关的差异蛋白,包括TRAF6(肿瘤坏死因子受体相关因子6)、IL-1α(白细胞介素1α)、NF-κB2(核因子-κB2)、RPS6KA1(核糖体蛋白S6激酶α1)等。经DAVID和KEGG通路分析,这些差异蛋白主要参与炎症相关信号通路。结论黄芩黄连药对改善2型糖尿病KK-ay小鼠肝组织炎症作用与TRAF6、IL-1α、NF-κB2、RSK1、RSK2蛋白表达下调相关。该研究为黄芩黄连药对临床用于防治代谢性疾病提供了实验依据。

黄芩-黄连药对防治D-半乳糖痴呆小鼠的作用机制

目的研究黄芩-黄连药对对D-半乳糖痴呆小鼠学习记忆能力的改善作用,并探讨其可能作用机制。方法皮下注射D-半乳糖100 mg/kg每天1次,连续8周诱导小鼠痴呆模型,与此同时分别灌胃黄芩-黄连药对5、10、20 g生药/kg,吡拉西坦0.75 g/kg,正常组给予等量蒸馏水。在给药后4、8周时用Morris水迷宫检测学习记忆能力,并于试验结束时测定血浆总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,以及脑海马组织乙酰胆碱酯酶(Ach E)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果连续注射D-半乳糖4、8周后,黄芩-黄连药对能显著缩短D-半乳糖痴呆小鼠在定向航行和空间探索的潜伏期(P<0.05或P<0.01)。连续注射D-半乳糖8周,黄芩-黄连药对可非常显著升高血浆SOD活性和降低MDA水平(P<0.01),同时,可降低脑组织Ach E活性,并升高GSH-Px活性(P<0.01)。结论黄芩-黄连药对对老年性痴呆有一定的防治作用,其机理可能与其降低氧化应激水平和增加脑海马组织乙酰胆碱浓度有关。

HPLC法测定“黄芩-黄连”药对提取物中黄芩4种成分含量

目的采用高压液相色谱法(HPLC)测定"黄芩-黄连"药对中黄芩4种有效成分(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素)。方法采用Hypersil ODS2-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.3%磷酸三乙胺,梯度洗脱,流速:1.0 m L·min^(-1),检测波长:280 nm,柱温:30℃。结果黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素分别在0.048~0.288 mg·m L^(-1)、0.056~0.336 mg·m L^(-1)、0.042~0.254 mg·m L^(-1)和0.047~0.280mg·m L^(-1)范围线性关系良好,平均回收率分别为100.01%、99.99%、99.64%、99.79%,RSD分别为1.20%、0.80%、1.04%、0.94%。结论该方法简便,结果准确可靠,可作为"黄芩-黄连"药对提取物的质量控制标准。

基于整合药理学平台预测黄芩-黄连对溃疡性结肠炎的作用靶点

目的:基于网络药理学,预测黄芩-黄连药对治疗溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)的有效活性成分及其潜在的作用机制。方法:以“黄芩-黄连”药对为检索词,在中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)中按条件查找,逐步筛选出相应活性成分及潜在作用靶点;然后在GeneCards数据库中查找出UC的疾病靶基因;通过软件分析,得出活性成分与靶点之间,以及疾病各靶点蛋白之间的相互关系,并通过GO和KEGG富集分析获得黄芩-黄连药对治疗UC的潜在作用靶点和通路。结果:通过查找有效成分,分析出黄芩-黄连药对中有效活性成分共51个,其中与UC密切相关的靶点共136个;通过GO富集分析得到2226条与生物过程相关的条目,采用KEGG通路富集分析得到165条潜在信号通路。结论:磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和AKT蛋白酶b(PI3K-AKT),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)可能是黄芩-黄连药对治疗UC调控的主要通信号通路,涉及的靶点包括肿瘤蛋白53(TP53)、丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、转录因子JUN、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK1)、肿瘤坏死因子(TNF)等,为实验验证该药对治疗UC的作用机制提供了证据。

《伤寒杂病论》黄连黄芩药对应用规律探究

药对是指临床上常用且相对固定的中药配伍形式,是历代医家临证用药经验的升华。黄连、黄芩均为苦寒燥湿的代表药物,皆可清热泻火解毒,前者善清中焦湿热,后者长于清中上二焦湿热。二药常相须为用,为临床常用药对。在《伤寒杂病论》中,含有黄连黄芩药对的方剂共9首,涉及条文12条,共12个症状。

基于网络药理学和分子对接技术研究黄芩-黄连药对防治2型糖尿病作用机制

目的 基于网络药理学及分子对接技术探讨黄芩-黄连药对防治2型糖尿病(T2DM)的作用机制。方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)收集黄芩-黄连药对的有效成分及对应靶点,借助Perl脚本及UniProt数据库对所得成分及靶点进行分析、整理;从Drugbank数据库、在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库、遗传药理学与药物基因组学数据库(PharmGKB)、疗效药靶数据库(TTD)中收集T2DM相关靶点,绘制韦恩图得药物作用于疾病的交集靶点,并利用Cytoscape 3.8.0软件中的CytoNCA插件筛选核心靶点;对交集靶点进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;最后使用Vina软件对关键成分和核心靶点进行分子对接。结果 共筛选出黄芩-黄连药对有效成分50个,其中黄连14个,黄芩36个,相关靶点201个,与T2DM 425个靶点取交集得到交集靶点37个;通过“活性成分-靶点”相互作用网络共筛选出关键成分6个(豆甾醇、β-谷甾醇、汉黄芩素、千层纸素、槲皮素、小檗碱),度值前5位的核心靶点为前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)、白细胞介素1 B(IL1B)、细胞色素P450 1A1(CYP1A1)、趋势因子白细胞介素-8(CXCL8)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG);GO富集分析发现黄芩-黄连药对治疗T2DM的基因功能主要富集在血管径调节、肾上腺素能受体的活动蛋白连接、儿茶酚胺结合等过程;KEGG富集分析得到30条信号通路(P<0.05),主要涉及白细胞介素-17(IL-17)信号通路、环磷酸鸟苷-蛋白激酶G(cGMP-PKG)信号通路、脂肪细胞的脂分解调节等。分子对接结果显示,槲皮素、汉黄芩素、千层纸素、豆甾醇与核心靶点PTGS2、CYP1A1、IL1B、PPARG、CXCL8具有良好的结合活性。结论 黄芩-黄连药对主要通过活性成分豆甾醇、β-谷甾醇、汉黄芩素、千层纸素、槲皮素及小檗碱作用于PTGS2、CYP1A1、IL1B、PPARG、CXCL8等靶点,改善血液循环,调节炎症细胞因子、脂肪细胞内脂肪分解,调控cGMP-PKG信号通路以及作用于胰岛素受体起协同效应,从而发挥防治T2DM的作用。

黄芩-黄连药对不同配比对HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响

目的:研究黄芩-黄连药对不同配比2种主要降糖成分的含量差异及对HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响,优选黄芩-黄连药对改善2型糖尿病的最佳比例并阐述其配伍规律。方法:采用液质联用法分析黄芩-黄连1∶1、黄芩-黄连1∶2与黄芩-黄连2∶1配比中小檗碱和黄芩苷含量变化;观测黄芩-黄连不同配比对HepG2细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗量的影响。结果:与黄芩-黄连1∶1比较,黄芩-黄连1∶2中黄芩苷含量下降,而小檗碱含量增加;黄芩-黄连2∶1中小檗碱和黄芩苷含量差异则较小。与模型组比较,黄芩-黄连1∶2、黄芩-黄连1∶1、黄芩-黄连2∶1高剂量组葡萄糖消耗量显著升高(P<0.01,P<0.05),且黄芩-黄连1∶1高剂量葡萄糖消耗量最多。结论:黄芩-黄连1∶1配比为降糖作用最佳配比,其可能配伍机制为黄芩苷对于小檗碱发挥降糖作用具有双向调节效应。

基于代谢组学研究黄连-黄芩药对治疗脑缺血大鼠的作用机制

运用代谢组学方法研究黄连-黄芩药对对脑缺血模型大鼠代谢的作用机制。采用线栓法致大脑中动脉阻塞复制缺血再灌脑损伤大鼠模型(MCAO)。通过超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)的方法、Markerlynx软件、以及主成分分析法和偏最小二乘判别法分析正常大鼠、脑缺血模型大鼠以及分别给予黄连(HL)、黄芩(HQ)和黄连-黄芩药对(LQ)干预后大鼠尿液样本中的内源性代谢物的差异,结合内源性代谢物的一级及二级碎片离子的精确信息,检索并鉴定可能的生物标志物,进而在MetPA数据库中构建代谢通路。结果在脑缺血模型大鼠的尿液中发现并鉴定出了20种生物标志物,并对其相对含量及代谢途径进行分析。主要涉及神经递质调节、氨基酸代谢、能量代谢、脂质代谢等。这些代谢通路在脑缺血模型大鼠的体内发生紊乱,主成分分析表明,正常与脑缺血模型得到明显区分,而给予HL,HQ,LQ后可以使之向着正常状态转变。此研究对脑缺血大鼠代谢组及黄连-黄芩药对干预的作用机制进行阐释,体现代谢组学可反映生物体的生理及代谢状态,能较好地体现药对是中医遣方用药的特色优势,具有内在的组合变化规律以及中医药的整体观、系统观以及多成分协同或拮抗作用的特点。

黄连-黄芩药对UPLC-MS/MS指纹图谱

目的:建立黄连-黄芩药对的UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,为其整体质量控制与评价、药效物质基础、配伍规律等研究提供科学依据。方法:采用UPLC-MS/MS法进行指纹图谱研究,使用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.2%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱80 min,流速0.3 m L·min^(-1),柱温40℃,获得12批黄连-黄芩药对的色谱图。利用国家药典委员会颁布的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"2004A版对其进行相似度评价。结果:建立了黄连-黄芩药对UPLC-MS/MS指纹图谱的共有模式,确定了16个共有峰,通过比较对照品和参考文献,指认了7个共有峰分别为黄连碱、表小檗碱、盐酸药根碱、黄芩苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、汉黄芩苷,对12批不同产地和品种的黄连-黄芩药对相似度进行了考察,其相似度均>0.9。结论:建立了黄连-黄芩药对UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,其精密度、重复性及稳定性良好(RSD<3%),该分析方法的建立对于黄连-黄芩药对的质量控制与评价、药效物质基础、配伍规律等研究具有一定的参考价值和意义。