UV和HPLC法测定黄芩黄酮总苷元提取物中总黄酮和3种主要成分的含量

本文建立了黄芩黄酮总苷元提取物中总黄酮和3种主要成分的含量测定方法。采用HPLC法测定黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A的含量。使用Agilent 1200型高效液相色谱仪，Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇-0.2%磷酸水（50：50），流速1 mL / min，柱温35 ℃，检测波长275 nm的方法。黄芩素、汉黄芩素和千层纸素 A线性范围分别为3.501-70.016 μg/mL（r=0.9999），0.832-16.640 μg/mL（r=0.9998），0.418-8.352 μg/mL（r=0.9999）；平均加样回收率（n=6）分别为99.55%、98.86%、9.997%，RSD分别为1.74%、1.74%、1.70%。采用UV法测定总黄酮含量，黄芩素线性范围为1.71-8.54 μg/mL（r=0.9991）；平均加样回收率（n=6）为100.93%，RSD为2.63%。黄芩素、汉黄芩素、千层纸素 A和总黄酮的含量分别为48.22%-60.36%、12.09%-14.46%、5.05%-8.81%、78.11%-90.12%；研究结果表明该方法准确、可靠，适用于黄芩黄酮总苷元提取物的含量测定。

高效液相色谱-质谱联用鉴定黄芩总苷元提取物中黄酮类成分

目的:使用高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF/MS)技术,分离鉴定黄芩总苷元提取物中的黄酮类成分,并总结其裂解规律。方法:采用岛津LX-20210330-01 C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.1%甲酸为流动相A,甲醇-乙腈(50∶50)为流动相B进行梯度洗脱,对黄芩总苷元提取物中的黄酮类成分进行分离,利用电喷雾离子化-四极杆-飞行时间串联质谱高分辨测定各成分母离子及其子离子的准确质量,结合电喷雾离子源正、负离子模式下的质谱信息和色谱保留时间进行结构鉴定。结果及结论:除了黄芩素和汉黄芩素两个已知成分外,从黄芩总苷元提取物中共鉴定出31种黄酮类成分,包括12种苷类与19种苷元,其中有3个化合物为本研究首次鉴定,并分析归纳了黄酮类成分在电喷雾离子源正、负离子模式下的质谱碎片裂解规律。

基于UHPLC-Q-TOF/MS技术分析肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分

目的筛选肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。方法(1)以人巨核细胞白血病细胞(Dami)与人骨髓基质细胞(HS-5)共培养的方式建立巨核细胞分化障碍模型作为评价体系,实验分组:Dami组(Dami)、对照组(Dami+HS-5)、PMA组[Dami+HS-5+5 ng·mL-1佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)]、模型组[Dami+HS-5+1%兔抗大鼠血小板血清(APS)+5 ng·mL-1PMA],培养48 h。采用流式细胞术检测巨核细胞分化成熟表面标记分子CD41a、CD61的表达情况。(2)将49只SD雄性大鼠随机分为空白血浆组、15 min组、30 min组、60 min组、90 min组、120 min组、240 min组,每组7只。各给药组大鼠灌胃肿节风总黄酮提取物1.26 g·kg^(-1),在6个设定时间点(15、30、60、90、120、240 min)采血制备肿节风总黄酮提取物经时含药血浆。(3)采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)对肿节风总黄酮提取物经时含药血浆进行分析,以峰面积构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆中的化学成分随时间变化量矩阵(X矩阵)。将所采集的6个不同时间点的肿节风总黄酮经时含药血浆对巨核细胞分化成熟障碍模型进行干预,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD41a、CD61的表达水平,构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆效应矩阵(Y矩阵)。(4)将X矩阵和Y矩阵数据标准化处理后,采用偏最小二乘法(Partial least squares,PLS)计算分析量效关系,以变量重要性投影(Variable importance for projection,VIP)>1为阈值,筛选与细胞表面分子CD41a、CD61变化相关的效应成分,并进行化学成分鉴定,作为肿节风总黄酮提取物中促进巨核细胞分化的潜在效应成分,最后回归评价体系验证其药效。结果(1)与Dami组比较,对照组Dami细胞表面的CD41a表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,PMA组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01)。与PMA组比较,模型组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著降低(P<0.01)。(2)与空白血浆组比较,15、30、60、90、120、240 min各时间点Dami细胞表面分子CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01),且CD41a、CD61均在30 min组表达水平最高。在正、负离子模式下筛选出VIP值>1的潜在效应成分,并选取540.3638@12.25与559.2991@11.53两个成分进行药效学验证。559.2991@11.53被鉴定为胡萝卜苷(Daucosterol,Dau),540.3638@12.25被鉴定为迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖(Rosmarinic acid 4-O-β-Dglucoside,Ros)。Ros、Dau分别干预巨核细胞分化成熟障碍模型后,与模型组比较,Ros及Dau低、中、高剂量组(40、60、80μg·mL-1)的Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论Ros、Dau可能是肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。

黄芩黄酮总苷元提取新方法的研究

研究黄芩黄酮总苷元提取制备新方法。以黄芩苷的酶解率为评价指标,筛选黄芩酶液制备的pH值;以黄芩苷提取率为评价指标,采用正交实验对影响黄芩提取的加水量、煎煮时间和煎煮次数进行优选;确定黄芩黄酮总苷元提取制备方法为:黄芩粗粉以pH3水搅拌提取0.5 h,过滤,得到黄芩酶液;药渣投入12倍量沸水中,调pH6煎煮两次,每次0.5 h,过滤,合并滤液,加入上述黄芩酶液,调pH6,于50℃酶解6 h,过滤,沉淀干燥,即得黄芩黄酮总苷元提取物。该方法简便可行,黄芩素提取率约为80%,提取工艺稳定,为从黄芩中提取黄芩黄酮总苷元提供参考方法。

黄芩总黄酮提取物的HPLC-MS/MS分析

目的:探讨应用液相色谱-质谱联用技术鉴定黄芩总黄酮提取物各组分的方法。方法:选用Discovery C_(18)柱,以甲醇-水-甲酸(40:60:0.025)为流动相,经紫外(波长为335 nm)检测后,在电喷雾串联质谱负离子扫描方式下,对HPLC-UV图谱中各色谱峰进行一级和二级质谱分析。结果:经与对照品相比较,鉴定了提取物中4个已知的黄酮类化合物,推断了3个未知黄酮苷类化合物可能的结构。结论:该方法可用于快速分析鉴别天然产物提取物中已知和未知化合物的结构。

枳实总黄酮提取物中柚皮苷和新橙皮苷的大鼠药代动力学

研究大鼠灌胃给予含相同剂量枳实总黄酮提取物、柚皮苷、新橙皮苷和柚皮苷-新橙皮苷后柚皮苷与新橙皮苷在大鼠体内的药代动力学。将SD大鼠随机分为4组,分别灌胃给予枳实总黄酮提取物(80 mg/kg)、柚皮苷(32 mg/kg)、新橙皮苷(27.2 mg/kg)、柚皮苷-新橙皮苷(柚皮苷32 mg/kg和新橙皮苷27.2 mg/kg),利用葡萄糖醛酸酶对血样进行预处理,采用LC-MS/MS法测定血浆中总苷元柚皮素及橙皮素,间接比较4组中柚皮苷和新橙皮苷的药代动力学。结果表明,枳实总黄酮提取物组中柚皮素和橙皮素的AUC0-t、cmax显著性高于柚皮苷单体组、新橙皮苷单体组,与柚皮苷-新橙皮苷组的主要药代动力学参数无显著性差异;柚皮苷-新橙皮苷组中柚皮素和橙皮素的AUC0-t、cmax较柚皮苷单体组、新橙皮苷单体组均有所增加,但增加程度低于枳实总黄酮提取物组。大鼠灌胃给药后,枳实总黄酮提取物中柚皮苷与新橙皮苷存在相互促进吸收的作用,而枳实总黄酮提取物中其他成分协同促进两者的吸收。

蒲黄总黄酮提取物中香蒲新苷及异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的HPLC测定

建立了HPLC法测定蒲黄总黄酮提取物中香蒲新苷(1)及异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷(2)的含量。采用Eclipse XDBC18柱,乙腈-0.5%乙酸-甲醇梯度洗脱,检测波长248nm。1和2分别在10～400mg/ml和12.6～504mg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率分别为98.9%和102.3%,RSD分别为1.66%和2.05%。

银杏叶提取物制取黄酮苷元的酶解工艺研究

研究了β-葡萄糖苷酶在银杏叶提取物制取黄酮苷元过程的酶解工艺:pH为银杏叶提取物的自然pH值,酶解温度为50℃,酶与底物比(E/S)为1/2000(g/g),底物浓度为5mg/mL,酶解时间6h,还原糖相对提高量达到92·31%。

HPLC法分析桑叶提取物总黄酮苷的水解条件研究

本文建立了测定桑叶提取物中总黄酮苷的HPLC分析方法，并对黄酮苷的水解条件进行优化。采用HPLC法检测总黄酮苷水解成的槲皮素和山奈酚，研究盐酸量与总黄酮苷量比例、水解温度、时间等条件对桑叶黄酮苷水解的影响，并优化水解条件。结果显示：桑叶提取物中加入甲醇-25％（V／V）盐酸混合溶液（4：1，V／V），使盐酸量与总黄酮量的比例为0．72，80℃水浴回流1h水解效果最好。该方法有良好的线性关系、精密度和重现性，加样回收率高，方法稳定可靠，满足测定桑叶提取物总黄酮苷元的要求。

HPLC法测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量

目的：建立测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量测定方法.方法：用HPLC方法对测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷进行含量测定研究.色谱柱采用Diamonsil C18（200×4.6 mm 5μm）,以甲醇-0.4%磷酸溶液（52∶48）为流动相,检测波长为360 nm;流速为1.0 mL/min.结果：槲皮素在0.174-0.870μg线性关系良好（r=0.999 8,n=5）,山柰素在0.117-0.585μg线性关系良好（r=0.999 8,n=5）,异鼠李素在0.040 8-0.204μg线性关系良好（r=0.999 9,n=5）;槲皮素、山柰素、异鼠李素的平均回收率（n=5）分别为99.96%、99.24%、100.46%.结论：本方法操作简便,重现性好,专属性强,可作银杏叶提取物中总黄酮醇苷的质量控制方法.

黄芩总黄酮·黄芩苷提取及纯化工艺研究

[目的]确定黄芩总黄酮与黄芩苷提取及纯化的最佳工艺条件。[方法]以黄芩总黄酮与黄芩苷得率作为评价指标,采用单因素及正交试验进行优选。[结果]最优工艺为:取黄芩粗粉,加10倍量水,煎煮2次,1.0 h/次;离心所得上清液调pH值至1.5,60℃保温30 min,所得沉淀加适量水搅匀,调pH值至中性,加等量乙醇醇沉;上清液再调至pH值为1.5,60℃保温30 min,静置、离心所得沉淀,水洗至中性,60℃真空干燥得黄芩提取物。其中,黄芩总黄酮、黄芩苷含量分别可达94.15%、80.15%。[结论]该工艺合理、可行,适合黄芩总黄酮、黄芩苷的工业化生产。

银杏叶提取物注射液总黄酮苷含量测定方法的研究

目的:研究银杏叶提取物注射液含量测定的方法,评价市售银杏叶提取物注射液的质量。方法:采用高效液相色谱法测定银杏叶提取物注射液中总黄酮苷成分,使用外标法,色谱柱为HiQ sil C18(250mm×4.6mmID,5μm);流动相为甲醇-0.4%磷酸(55:45);检测器波长为360nm;流速为1.0ml·min^(-1);柱温40℃。结果:建立了高效液相色谱测定银杏叶提取物注射液总黄酮苷含量的方法,线性与范围、回收率、精密度和稳定性等方法学实验均可控制在合格范围内。并利用此方法对市售四个厂家的银杏叶提取物注射液进行了质量评价。结论:建立的银杏叶提取物注射液总黄酮苷含量测定方法简便、快速、准确,稳定。

银杏叶提取物中黄酮苷酶法转化苷元的研究

银杏叶提取物中的黄酮类化合物主要以苷形式存在,本文采用酶法水解黄酮苷中的糖基使其转化为苷元,提高抗氧化活性。银杏黄酮苷经过复合酶预处理后,黄酮苷含量仅为0.23%,再用转化酶水解可获得高含量的苷元,产品银杏苷元黄酮含量达59.65%,其中槲皮素占总黄酮苷元的24.87%,山奈酚占30.18%,异鼠李素占4.60%。

不同工艺对黄芩总黄酮提取率及其提取物性能的影响

目的比较低共熔溶剂与乙醇用于制备黄芩总黄酮提取物的差异。方法分别以氯化胆碱-乳酸(摩尔比1∶2)或65%乙醇作为溶剂提取黄芩药材,所得提取液与水混合得混悬液,并进一步经冷冻干燥制得提取物粉末,观察并比较两种提取物的外观形态、粒径、溶解度和体外溶出度。结果低共熔溶剂和乙醇提取液中总黄酮含量分别为(12.64±0.86) mg·g-1和(0.19±0.07) mg·g-1,相应的冻干粉中总黄酮含量分别为(8.97±0.55)mg·g-1和(0.69±0.07)mg·g-1,且混悬液及冻干粉复溶后粒径均小于1μm。两种冻干粉中总黄酮溶解度均高于黄芩苷原料药(P均<0.05),且在水中45 min时累积溶出即达90%以上,而黄芩苷原料药2 h时溶出度不足30%。结论低共熔溶剂对黄芩总黄酮提取效率优于乙醇,且能改善所得提取物溶解和溶出性能,有利于进一步制剂。

黄芩总黄酮苷元对小鼠肝脏的保护作用

目的探讨黄芩总黄酮苷元(SBTF)对肝脏的保护作用。方法将70只小鼠随机均分为7组(空白组、模型组、阴性对照组、联苯双酯阳性对照组及高、中、低剂量黄芩总苷元给药组),每组10只,灌胃给药15天。高、中、低剂量给药组分别给黄芩总苷元400、200、100 mg/kg;阳性组给予联苯双酯200 mg/kg;阴性组给予2.0%泊洛沙姆水溶液;模型组和空白组均给予生理盐水。第15天给药6 h后除空白组外均腹腔注射0.1%四氯化碳油溶液。12 h后称重,取血,分离肝脏,拍照、制匀浆测定丙二醛(MDA)指标;全血离心后取血清测定肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。结果阳性组与高剂量给药组中小鼠肝脏外表光滑红润,无血块和斑点,但光泽差于空白组;中、低剂量给药组红润程度依次下降,并可见瘀斑渐次明显;阴性组和模型组外观苍白,可见成块淤血、瘀斑。模型组、阴性组AST、ALT、MDA指标与空白组相比明显升高;给药组AST、ALT、MDA指标按低、中、高剂量下降,与模型组相比差异有显著性。结论黄芩总黄酮苷元对肝脏有保护作用。

顶空气相色谱法测定鸡骨草总黄酮碳苷提取物中大孔吸附树脂残留物

目的：建立同时测定鸡骨草总黄酮碳苷提取物中8种大孔吸附树脂残留物的顶空气相色谱分析方法。方法：采用Supelco-wax毛细管柱（30m×0．25ram×0．25μm），体积分数为50％的N，N-二甲基甲酰胺（DMF）为溶解介质，高纯氮作为栽气，FID检测器；进样口温度210℃，检测器温度230℃，柱温先在70℃维持8min，再以10℃／min的速度升至220℃，维持7min。结果：在以上色谱条件下，各组分在所考察的浓度范围内均具有良好的线性，r为0．9965～0．9999，RSD为1．839％～9．155％，苯、正己烷、甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、二乙烯苯及苯乙烯的最低检出浓度分别为0．05、0．25、0．1、0．1、0．1、0．1、0．2、0．1μg·mL-1。结论：该法快速、灵敏、准确，适用于鸡骨草总黄酮碳苷提取物中大孔吸附树脂残留物的测定。

黄芩总黄酮的提取工艺研究

目的 通过提取工艺研究 ,寻求黄芩总黄酮的最佳提取方法。方法 采用正交试验 ,以黄芩苷和总黄酮为指标 ,筛选水煎煮并用D10 1吸附树脂纯化与乙醇回流提取工艺比较。结果 两种提取方法的正交试验表明 ,最佳提取工艺为水煎煮法中A3 B1C2 D3 。结论 黄芩药材中黄芩总黄酮的最佳提取方法是水煎煮后通过D10 1吸附树脂柱纯化。

淫羊藿总黄酮提取物的HPLC指纹图谱建立及其中8种成分的含量测定

目的:建立淫羊藿总黄酮提取物的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并建立同时测定其中8种成分含量的方法。方法:采用HPLC法。色谱柱为ZORBAX Eclispse SB-C_(18),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为270nm,进样量为5μL。以淫羊藿苷峰为参照峰,绘制5批样品的HPLC指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)》进行相似度评价,确定共有峰。结果:5批样品的HPLC图谱中有22个共有峰,相似度均大于0.99,并指认淫羊藿属苷A、朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、宝藿苷Ⅰ等8个共有峰。上述8种成分进样量线性范围分别为0.019 5～0.292 5μg(r=0.999 9)、0.028 2～0.423 0μg(r=0.999 6)、0.050 5～0.757 5μg(r=0.999 9)、0.066 9～1.003 5μg(r=0.999 9)、0.089 6～1.344 0μg(r=0.999 9)、0.16～2.40μg(r=0.999 9)、0.026 8～0.402 0μg(r=0.999 8)、0.027 24～0.408 60μg(r=0.999 8);定量限分别为390.00、564.00、506.00、535.20、448.00、426.68、643.20、544.80 ng/mL,检测限分别为97.50、141.00、126.25、133.80、112.00、106.67、160.80、136.20 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3%;加样回收率分别为97.64%～103.79%(RSD=2.00%,n=6)、96.41%～99.10%(RSD=1.12%,n=6)、96.56%～103.56%(RSD=2.67%,n=6)、96.10%～99.57%(RSD=1.20%,n=6)、99.34%～104.18%(RSD=1.70%,n=6)、100.35%～105.37%(RSD=1.93%,n=6)、98.76%～102.83%(RSD=1.60%,n=6)、96.30%～101.10%(RSD=1.80%,n=6)。结论:所建HPLC指纹图谱可为淫羊藿总黄酮提取物的质量控制提供参考;所建含量测定方法简便、准确、重复性好,可用于同时测定淫羊藿总黄酮提取物中8种成分的含量。

CMC-Na负载ε-PL/黄芩黄酮总苷元缓释保鲜涂膜研制

以中草药黄芩中的黄酮苷元类成分、聚赖氨酸、壳聚糖以及羧甲基纤维素钠为原料制备复合缓释保鲜涂膜,以期延长黄瓜的贮藏期。以黄瓜烂果率、失重率、V_(C)含量为主要新鲜度指标,基于单因素实验结果,选取三个影响显著的因素,采用响应面法优化复合缓释保鲜涂膜配方,以黄瓜感官评价为响应值进行保鲜研究,得出缓释保鲜膜的最佳配方为:黄芩黄酮总苷元浓度0.57%,壳聚糖浓度0.92%,CMC-Na浓度1.47%,聚赖氨酸浓度6%;用制备的最佳配方缓释保鲜膜在温度25℃、相对湿度65%条件下保鲜黄瓜达16d,对黄瓜烂果率、失重率的增长速度以及V_(C)含量的减少速度起到一定程度的减缓作用。所研制的复合缓释保鲜膜配方能够作为黄瓜贮藏保鲜的技术参考。

枳实总黄酮苷提取物特征图谱研究

目的:研究并建立枳实总黄酮苷提取物的特征图谱测定方法,更好地控制本产品的质量。方法:采用色谱柱YMC-Pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸溶液(18∶82,V/V)为高效液相色谱进行等度洗脱;流速1.0m L/min;检测波长283nm;柱温30℃。结果:通过对11批枳实总黄酮苷提取物特征图谱研究,确定了5个共有峰,并对5个峰进行了指认,分别为新北美圣草苷、柚皮芸香苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷。各样品特征图谱与对照特征图谱的相似度大于0.90。结论:该方法准确、可靠、耐用性良好,可用于枳实总黄酮苷提取物的质量控制。