黄芪丹参水煎液激活AMPK上调自噬抑制ISO诱导的大鼠心肌重构

目的:探讨黄芪丹参水煎液对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌重构的抑制作用和对p-AMPK/AMPK、Atg5、SQSTM1和LC3Ⅱ表达的影响。方法:皮下注射ISO 2.5 mg/(kg·d)共2 w建立大鼠心肌重构模型,成模动物随机分为模型组及黄芪丹参水煎液低、高剂量组,另设正常对照组。干预4 w后,计算心脏质量指数和左心室质量指数;超声心动图观察心肌结构;HE染色观察心肌组织病理学变化;ELISA检测血清B型脑钠肽(BNP)水平;Western blot检测左心室组织p-AMPK/AMPK、Atg5、SQSTM1及LC3Ⅱ蛋白的表达。结果:与模型组比较,黄芪丹参水煎液各组大鼠心脏指数和左心室指数均显著降低(P<0.05),同时黄芪丹参水煎液能抑制ISO诱导的LVEDD、LVESD及血清BNP含量升高,并能上调模型大鼠心肌组织p-AMPK、AMPK、Atg5、SQSTM1和LC3Ⅱ的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:黄芪丹参水煎液具有抑制ISO致大鼠心肌重构的作用,其机制与上调p-AMPK/AMPK、Atg5、SQSTM1和LC3Ⅱ表达有关。

黄芪-丹参煎液HPLC指纹图谱及多指标定量测定研究

目的建立黄芪丹参煎液的HPLC指纹图谱及多指标成分定量分析方法,为黄芪丹参煎液质量控制提供科学依据。方法采用HPLC-UV法,ODS Hypersil DIM色谱柱(250 mm×4.6 mm,3μm);以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,柱温25℃,体积流量0.8 mL/min,进样量20μL,检测波长254 nm,建立HPLC指纹图谱;采用LC-MS法,建立黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅱ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、丹酚酸B、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸11个成分含量测定方法,并采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)对测定结果进行识别。结果 10批黄芪丹参煎液的指纹图谱中有12个共有峰,通过与化学对照品比对,指认出7个色谱峰,分别为1号峰咖啡酸、3号峰毛蕊异黄酮葡萄糖苷、6号峰迷迭香酸、8号峰紫草酸、9号峰毛蕊异黄酮、10号峰丹酚酸B、11号峰芒柄花苷,10批样品的相似度≥0.995。黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅱ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、丹酚酸B、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸线性关系良好,r2值均大于0.995;回收率为89.3%~110.9%。通过PCA可将10批黄芪丹参煎液分成2类,并可看出不同产地、不同批次药材之间的质量存在差异,进一步采用OPLS-DA筛选出导致质量差异的两个物质丹酚酸B和芒柄花苷。结论根据黄芪丹参煎液指纹图谱的建立,结合质谱进行定量,能够为其质量控制提供更可靠的参考。

黄芪丹参水煎液抑制ISO诱导的大鼠心肌重构及其下调STIM1,TRPC1,CaN和NFATc3表达的机制

探讨黄芪丹参水煎液(HDD)对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌重构抑制作用和对STIM1,TRPC1,Ca M,Ca N,NFATc3表达的影响。皮下注射ISO(2.5 mg·kg^(-1)·d^(-1),14 d)建立大鼠心肌重构模型,随机分为对照组、ISO模型组、HDD5(HDD 5 g·kg^(-1)·d^(-1)+ISO)组、HDD10(HDD 10 mg·kg^(-1)·d^(-1)+ISO)组。干预4周后,计算心脏质量指数(HW/BW)和左心室质量指数(LVW/BW);超声心动图观察心肌结构;HE染色观察心肌组织病理学结构变化;ELISA检测血清中BNP,Ca N和Ca M kinasesⅡ的水平;Western blot检测左心室组织STIM1,TRPC1,p-Ca N,p-NFATc3和NFATc3蛋白的表达。结果显示,ISO组大鼠HW/BW和LVW/BW均大于HDD5组和HDD10组(P<0.05);超声心动图检查结果显示,HDD能够抑制ISO诱导的LVEDD,LVESD增加;ELISA检测显示,HDD能明显抑制ISO致心肌重构大鼠血清中BNP,Ca N和Ca M kinasesⅡ含量的升高(P<0.01)。Western blot检测结果显示,ISO组大鼠心肌组织STIM1,TRPC1,p-Ca N,p-NFATc3和NFATc3表达升高,HDD给药后心肌组织内STIM1,TRPC1,p-Ca N,p-NFATc3和NFATc3的表达均降低(P<0.05)。结果表明,黄芪丹参水煎液具有抑制ISO致大鼠心肌重构的作用,其机制与下调STIM1,TRPC1,Ca M kinasesⅡ,p-Ca N/Ca N和pNFATc3/NFATc3表达有关。