黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型标志基因表达和细胞增殖的影响

为了观察黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型转化和增殖的影响 ,采用体外培养的血管平滑肌细胞 ,以碱性成纤维细胞生长因子诱导其表型转化和增殖 ,在此基础上 ,通过Northern和Western印迹法检测平滑肌细胞表型标志基因表达的变化 ,研究黄芪和当归注射液对碱性成纤维细胞生长因子上述效应的抑制作用。结果发现 ,碱性成纤维细胞生长因子可明显下调分化型标志基因平滑肌α 肌动蛋白的表达 ,上调去分化型标志基因平滑肌胚胎型肌球蛋白重链和骨桥蛋白表达 ,诱导原癌基因c jun表达及促进血管平滑肌细胞DNA合成。黄芪和当归可上调分化型标志基因的表达活性 ,下调去分化型标志基因的表达 ,不同程度地抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞表型转化和DNA合成 ,有效抑制血管平滑肌细胞增殖 ,其作用机制可能与抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的c jun基因表达有关。二者相比 ,当归的作用大于黄芪。结果提示 ,黄芪和当归可从多位点上拮抗碱性成纤维细胞生长因子促血管平滑肌细胞表型转化及细胞增殖。

基于网络药理学与分子对接的当归黄芪超滤物改善冠状动脉微血管疾病作用机制

为了探讨当归黄芪超滤物改善冠状动脉微血管疾病的作用机制,利用网络药理学与分子对接检索TCMSP、UniProt数据库筛选当归黄芪超滤物活性成分和作用靶点;通过DisGeNET等数据库得到疾病靶点;利用Venny2.1.0获取交集靶点;使用STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用(Protein-Protein Interaction, PPI)网络;Metascape平台进行GO功能和KEGG通路富集分析,PyMOL对活性成分和关键靶点做分子对接验证.筛选出1 185个药物作用靶点,2 307个疾病靶点,217个交集靶点;获得β-谷甾醇、槲皮素、黄芪甲苷等22个活性成分,得到NLRP3、IL1β、CASP1等61个关键靶点;KEGG分析获得了272条信号通路,包括NOD样受体通路、NF-kappa B通路等.分子对接的最小结合能均<-5.0 kJ·mol^(-1),表明相互对接良好.初步预测了当归黄芪超滤物改善冠状动脉微血管疾病的核心靶点和信号通路,并进行了分子对接验证,为进一步体内外实验提供了思路.

黄芪抑制血管平滑肌细胞增殖及其作用机制

目的 观察黄芪 (AS)对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的抑制作用 ,了解黄芪是否通过刺激VSMC产生一氧化氮 (nitricoxide,NO) ,使细胞周期停滞于G0 /G1期 ,从而抑制平滑肌细胞增殖。方法 [3 H] 胸腺嘧啶核苷酸 ([3 H] TdR)掺入测定VSMCDNA合成 ,流式细胞仪检测细胞周期情况 ,硝酸还原酶法测定细胞培养上清中NO水平。结果 黄芪以剂量依赖关系抑制血清诱导的VSMC[3 H] 胸腺嘧啶核苷酸掺入 ,使G0 /G1期细胞比例明显增多 ,S期细胞比例显著减少 ,黄芪刺激VSMC后 ,细胞培养上清中NO水平呈剂量依赖上升。结论 黄芪能抑制VSMC增殖 ,使细胞周期停滞于G0 /G1期 。

黄芪、当归对血管平滑肌细胞粘着斑激酶表达和细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪、当归对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)粘着斑激酶(FAK)表达和细胞凋亡的影响。方法:应用RT-PCR、Western blot检测黄芪、当归对FAK表达的影响;应用 Greiss试剂检测 VSMC培养液中NO_2^-含量;应用流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2和caspase-3表达活性。结果:黄芪、当归注射液可以显著抑制由碱性成纤维细胞生长因子所诱导的FAK表达,增加细胞培养液中的NO_2^-含量,诱导cas-pase-3表达。下调bcl-2表达,促进体外培养的VSMC凋亡。结论:黄芪、当归诱导VSMC凋亡与其促进NO合成、抑制FAK表达、诱导促凋亡基因caspase-3表达及下调抗凋亡基因bcl-2表达有关。

黄芪和当归配伍对大鼠血管内膜增生血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨黄芪和当归不同配伍对大鼠血管内皮损伤后血管内膜增生中血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化、细胞周期和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号途径的影响。方法:雄性大鼠制备腹主动脉球囊导管损伤血管内皮模型,设计黄芪和当归单用及不同比例配伍,对内皮损伤模型大鼠灌胃给药,干预14 d后取腹主动脉,检测腹主动脉增生内膜中VSMC表型转化、细胞周期相关蛋白表达和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果:球囊导管损伤主动脉内皮后,可引起VSMC表型转化及VSMC增殖从而导致血管内膜增生。当归、黄芪、黄芪-当归1∶1配伍、黄芪-当归5∶1配伍可增强血管增生内膜中平滑肌α肌动蛋白(SMα-actin)表达,抑制增生内膜中增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。当归、黄芪、黄芪-当归1∶1配伍、黄芪-当归5∶1配伍可抑制血管组织中cyclin D1、cyclin E表达的增高,抑制增生内膜中p-PI3K和p-Akt蛋白表达的升高。结论:黄芪当归配伍对血管内皮受损后内膜增生具有抑制作用,其作用可能与其通过抑制血管内皮受损后PI3K/Akt信号通路激活,进而抑制VSMC表型转化和细胞增殖,从而发挥抗VSMC增殖的作用有关。

黄芪注射液体外对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2活性的抑制作用

目的:探讨黄芪对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)分泌的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性的抑制作用及其调节机制。方法:以黄芪注射液刺激体外培养的SD大鼠VSMC,Zymography法检测培养细胞上清液中MMP-2的活性,Western印迹法观察MMP-2蛋白水平变化。结果:黄芪在体外抑制大鼠VSMC分泌MMP-2的活性,且此作用呈浓度依赖性。结论:黄芪在体外抑制大鼠VSMC分泌MMP-2的活性,此作用为转录后调节。

黄芪多糖对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用研究

目的研究黄芪多糖抑制血管平滑肌细胞过度增殖的作用。方法选取雄性SD大鼠,提取血管平滑肌细胞并做传代培养,采用3H-TdR掺入法和MTT法检测黄芪多糖对VSMCs增殖的影响作用。结果 3H-TdR掺入率实验结果表明,黄芪多糖干预组与对照组相比较3H-TdR掺入量明显下降(P<0.01)。MTT法检测结果表明,黄芪多糖干预组(30、60、90 mg/L)吸光度均显著下降,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。结论黄芪多糖具有抑制VSMCs过度增殖的作用,可预防动脉粥样硬化病变的发生。

木犀草素、欧当归内酯A和黄芪皂苷Ⅰ单用及联用对人肝星状细胞株LX-2增殖、活化的影响

目的 探讨木犀草素(Lut)、欧当归内酯A(Lev)和黄芪皂苷Ⅰ(Ast)单用及联用对人肝星状细胞株LX-2增殖、活化的影响。方法 取对数生长期的LX-2细胞,采用噻唑蓝(MTT)法考察Lut、Lev和Ast对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的LX-2细胞增殖的影响、联用比例确定及Lut、Lev和Ast联用对TGF-β1诱导LX-2细胞增殖的影响;应用CalcuSyn软件计算Lut、Lev及Ast联用抑制LX-2细胞增殖的联合指数(CI),分析3者联用类型;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测3者对LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,Lut、Lev和Ast联用摩尔比为1∶1∶10,3者单用及联用对TGF-β1诱导的LX-2细胞增殖均具有抑制作用(P<0.05),并呈浓度依赖性;CalcuSyn软件分析结果显示,3者联用对LX-2细胞的增殖抑制率>15%时CI<1,说明3者联用具有协同增效的作用;Western blot结果显示,Lut、Lev及Ast联用能够显著降低TGF-β1诱导的LX-2细胞中α-SMA蛋白的表达(P<0.01),降低LX-2细胞中TGF-β1蛋白的表达(P<0.05)。结论 Lut、Lev和Ast单用及联用均能抑制LX-2细胞的增殖、活化,3者联用作用更强、具有协同增效的作用,该作用可能与下调肝星状细胞TGF-β1蛋白表达有关。

黄芪-当归6种活性成分配伍对大鼠血管外膜成纤维细胞合成细胞外基质的影响

目的观察黄芪-当归活性成分阿魏酸(ferulic acid,FA)、毛蕊异黄酮苷(calycosinglucoside,CG)、芒柄花素(formononetin,FMN)、黄芪皂苷Ⅰ(astragaloside Ⅰ,ASⅠ)、黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,ASⅣ)、毛蕊异黄酮(calycosin,CAL)配伍对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞(vascular adventitia fibroblasts,VAF)合成细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法以AngⅡ诱导VAF增殖模型,采用目标成分“敲除/敲入”的方法,将细胞分为空白组、模型组、IC10配伍组、某一活性成分敲除组、某一活性成分敲入组,分别检测细胞及培养液中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,COLⅠ)、Ⅲ型胶原(collagen type Ⅲ,COLⅢ)含量,并检测细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶组织抑制剂2(tissue inhibitor of metalloproteinase 2,TIMP2)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达,研究黄芪-当归6种活性成分配伍对VAF合成ECM的影响。结果黄芪-当归6种活性成分配伍抑制VAF合成FN、LN、COLⅠ、COLⅢ(P<0.01)。FA、CG、FMN、ASⅠ敲入后抑制FN、LN合成的作用增强(P<0.05或P<0.01),FA、CAL、FMN、ASⅠ、ASⅣ敲入后抑制COLⅠ、COLⅢ合成的作用增强(P<0.05或P<0.01)。黄芪-当归6种活性成分配伍促进MMP2、TIMP2的表达(P<0.01),FA、CG、FMN、ASⅣ、CAL敲入后促进MMP2表达的作用增强(P<0.05或P<0.01),FMN、ASⅣ、CAL敲入后促进TIMP2表达的作用增强(P<0.05或P<0.01);黄芪-当归6种活性成分配伍抑制TGF-β1表达(P<0.05),FA、CG、FMN敲入后抑制TGF-β1表达的作用增强(P<0.05或P<0.01)。结论黄芪-当归6种活性成分配伍可抑制VAF合成ECM,其作用可能是通过调节TGF-β1、MMP2、TIMP2发挥的。

黄芪、当归及其组方促血管内皮细胞增殖作用的研究

目的 :探讨黄芪、当归及其组方对人脐静脉内皮细胞增殖和细胞周期的影响。方法 :以离体培养的人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcells ,HUVEC)为模型 ,采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪分析其细胞周期、SABC法检测血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的表达 ,对黄芪、当归及其组方的促HUVEC增殖作用进行了观察研究。结果 :黄芪、当归单用或合用均可促进内皮细胞生长 ,增加细胞周期中S期细胞的数目 ,尤以复方作用明显 (P <0 0 5或P <0 0 0 1)。同时 ,各给药组均能上调VEGF的表达 ,而对照组VEGF仅有微弱表达 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 :黄芪、当归有促进血管内皮细胞增殖及DNA合成的作用 ,两药配伍应用时具有协同效应 ,提示在缺血心肌新生血管的发生和发展中可能具有一定作用。

葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 :研究葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并探讨其机制。方法 :分离培养人脐动脉平滑肌细胞 ,不同浓度葛根素、大豆苷元与细胞共孵育 ,使用MTT法检测细胞活性 ,同时用Rt PCR法检测Survivin ,Bcl xl,Bax ,GapdhmRNA的表达。结果 :葛根素与大豆苷元都可降低细胞增殖活性 ,升高Bax/Gapdh/Bcl xl/Gapdh的比值。与葛根素组相比 ,相同浓度的大豆苷元组细胞活性较低 ,Bax/Gapdh/Bcl xl/Gapdh比值较高。结论 :与葛根素相比 ,大豆苷元抑制血管平滑肌细胞增殖的作用更强。

粉防己碱对高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

探讨了粉防己碱 (Tet)抑制培养的大鼠主动脉平滑肌细胞 (AVSMC)增殖的作用 ,MTT法分析细胞增殖 ,[3 H]TdR参入法分析细胞DNA合成 .结果显示 :①肾血管性高血压〔RH ,二肾一夹 (2K1C)术后18周〕大鼠AVSMC超微结构呈典型的合成细胞特征 ;②RH大鼠AVSMC具有更活跃的增殖倾向 ,血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )和去甲肾上腺素 (NE)刺激下指数增长期细胞数和在NE刺激下的AVSMC生长率均明显增高 ;③Tet(50mg·kg- 1·d- 1,po ,2K1C术后 9周始 ,连续 9周 )治疗组的AVSMC对NE和AngⅡ诱导的细胞增殖反应性和生长率较RH组明显降低 ;④对RH组和伪手术组大鼠的AVSMC ,Tet(0 .1～ 10μmol·L- 1)体外给药可浓度依赖性地抑制NE或AngⅡ诱导的增殖和 [3 H]TdR参入 .研究表明 ,RH大鼠AVSMC对NE和AngⅡ促增殖作用敏感性及反应性增高 ;Tet可降低其对NE和AngⅡ的反应性 ,抑制AVSMC增殖和DNA合成 .

肝细胞生长因子对心肌细胞及血管平滑肌细胞、血管内皮细胞生长因子分泌的作用

观察肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的牛冠状动脉血管内皮细胞 (BCAEC)、牛冠状动脉血管平滑肌细胞 (BCASMC)和小鼠心肌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌的影响。BCAEC对照组与HGF组 12hVEGF浓度分别为 10 5 1± 2 90和 9 31± 2 78pg/ml;BCASMC对照组和HGF组 12hVEGF浓度分别为 3h的 3 35倍和 3 93倍 ,HGF组 3h和 12hVEGF浓度分别为对照组的 2 0 6倍和 2 4 2倍 ;心肌细胞对照组和HGF组 12hVEGF浓度分别为 3h的 5 4 3倍和 4 0 9倍 ,HGF组 3h和 12hVEGF浓度分别为对照组的 2 74倍和 2 0 6倍。提示BCAEC、BCASMC及小鼠心肌细胞均具有自分泌VEGF的作用 ,HGF促进BCASMC和心肌细胞VEGF的分泌 。

黄芪甲苷Ⅳ对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用(英文)

目的探讨从黄芪提取物黄芪甲苷Ⅳ对异常血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法离体培养大鼠主动脉平滑肌细胞,分别测定黄芪甲苷Ⅳ作用前后异常血管平滑肌细胞的增殖、凋亡、细胞一氧化氮(NO)和钙离子浓度的变化。用WST法测定细胞的增殖;细胞凋亡通过annexinV标记法用流式细胞仪测定;细胞内NO和钙离子用荧光素DAF-2和Flue-3/AM分别标记,运用激光共聚焦显微镜测定其浓度变化;细胞醛糖还原酶的活性通过测定NADPH在340nm的吸收光谱来表征。结果黄芪甲苷Ⅳ显著抑制了由血清诱导的平滑肌细胞增殖(P<0.01);流式细胞测定表明黄芪甲苷Ⅳ促进平滑肌细胞的凋亡(P<0.01);黄芪甲苷Ⅳ和醛糖还原酶抑制剂依帕斯他显著抑制了醛糖还原酶的活性(P<0.01);在黄芪甲苷Ⅳ作用下,平滑肌细胞NO和钙离子浓度增加。结论黄芪甲苷Ⅳ可能通过抑制醛糖还原酶的活性,促进细胞凋亡,增加NO的产生和钙离子浓度的途径来抑制异常血管平滑肌细胞的增殖。

补阳还五汤黄芪不同配比组方调控平滑肌细胞增殖及迁移抑制动脉粥样硬化的分子机制

目的观察补阳还五汤(BYHWD)黄芪不同配比组方通过调控Rho/ROCK信号通路对氧化型低密度脂蛋白(oxidized-low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移的影响,以明确黄芪最佳配比剂量。方法将大鼠主动脉血管平滑肌(A10)细胞分为空白对照组、模型对照组、BYHWD黄芪低剂量组(黄芪30 g)、BYHWD黄芪中剂量组(黄芪60 g)、BYHWD黄芪高剂量组(黄芪90 g)、BYHWD黄芪超高剂量组(黄芪120 g)、辛伐他汀组。除空白对照组外,其他治疗组均在ox-LDL刺激后予以BYHWD黄芪低、中、高、超高剂量含药血清和辛伐他汀血清干预。通过CCK-8法检测补阳还五汤黄芪不同组方和辛伐他汀对ox-LDL诱导的平滑肌细胞增殖的影响;细胞划痕愈合实验检测各组细胞增殖和迁移的情况;同时采用免疫荧光染色法检测增殖蛋白Ki67的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM-1)、细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecules,ICAM-1)、Rho激酶1(ROCK1)、Rho激酶2(ROCK2)、p-肌球蛋白轻链(P-MLC)蛋白相对表达水平。结果CCK-8和细胞划痕愈合实验结果显示,与模型对照组相比补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组和辛伐他汀含药血清干预后,细胞的增殖和迁移明显受到抑制(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示黄芪低、中、高、超高剂量组Ki67阳性细胞数量明显减少(P<0.05),其中黄芪120 g的治疗效果明显优于其他治疗组(P<0.05);Western Blot结果显示,与正常对照组相比,ox-LDL诱导后模型组细胞VCAM-1、ICAM-1、ROCK1、ROCK2、P-MLC蛋白的表达量明显增多,经过补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量和辛伐他汀含药血清干预后,各组细胞VCAM-1、ICAM-1、ROCK1、ROCK2、P-MLC蛋白的表达量明显降低(P<0.05),补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组各组间比较,黄芪超高剂量组(黄芪120 g)的蛋白表达水平明显少于其他黄芪不同配比组方各组(P<0.05)。结论补阳还五汤黄芪低、中、高、超高剂量组可能抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌(A10)细胞的增殖和迁移,下调VCAM-1、ICAM-1蛋白表达量,抑制ROCK信号通路,从而发挥预防和治疗动脉粥样硬化的作用,其中补阳还五汤黄芪超高剂量组(黄芪120 g)的治疗效果最优。

Caveolin-1表达对血管平滑肌细胞胆固醇逆转运的调节作用

通过观察天然和氧化型低密度脂蛋白对细胞内胆固醇转运蛋白caveolin 1表达的影响 ,探索动脉粥样硬化发生过程中血管平滑肌细胞胆固醇逆转运的分子机制。运用Western印迹、逆转录—聚合酶链反应等方法观察天然和氧化修饰的低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞caveolin 1表达的影响及其差异 ;运用反义寡核苷酸技术和高效液相色谱、放射性胆固醇标记法等方法初步判断下调caveolin 1表达对血管平滑肌细胞胆固醇流出的影响 ;运用外源基因导入技术观察caveolin 1过度表达对氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞内胆固醇聚集的调节作用。结果发现 :①以正常的未修饰低密度脂蛋白 (5 0mg L)与血管平滑肌细胞孵育 96h ,caveolin 1表达增加 6 0 .2 %± 3.9% ,胆固醇流出率为 81.7%± 4 .3% ;而在相同量的氧化型低密度脂蛋白刺激下 ,caveolin 1表达减少了 5 4 .7%± 5 .8% ,胆固醇流出率下降至 2 6 .8%± 5 .1%。②caveolin 1反义寡核苷酸预处理血管平滑肌细胞 ,再予 5 0mg L的正常低密度脂蛋白处理 ,细胞胆固醇流出率下降至 4 5 .3%± 7.3%。③抗氧化剂普罗布考显著对抗氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞caveolin 1表达的抑制作用。④外源导入caveolin 1表达质粒显著促进氧化型低密度脂蛋白损伤后的细胞胆固醇转运 ,?

黄芪多糖对高糖所致血管平滑肌细胞增殖变化的影响

目的:旨在观察体外高糖环境对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)所致的增殖变化以及黄芪对其的影响。方法:原代培养VSMC,分为正常对照组、25mmol/L高糖剌激组、高糖剌激加低、中、高浓度黄芪多糖组(终浓度分别为100、200和400mg/L)。MTT方法分析细胞增殖率,RT-PCR检测分析MKP-1 mRNA转录及用ELISA法检测炎症因子MCP-1水平。结果:与对照组相比高糖可以诱导VSMCs增殖(P<0.05),而中、高浓度黄芪多糖可以显著抑制该作用(P<0.05);高糖环境明显下调MKP-1 mRNA表达(P<0.05),但低浓度黄芪多糖可使MKP-1 mRNA上调,恢复到正常水平,在中、高浓度黄芪多糖时可使MKP-1 mRNA上调,显著高于对照组;高糖刺激组可促使VSMCsMCP-1分泌明显升高,低浓度黄芪即可降低高糖诱导MCP-1的水平(P<0.05),在高浓度组最明显。结论:黄芪多糖防治糖尿病心血管并发症的作用可能与上调MKP-1 mRNA表达、抑制VSMCs增殖和MCP-1分泌相关。

血管紧张素-(1-7)对大鼠血管平滑肌细胞PKC和ERK1/2的抑制作用

采用Westernblot、氚 胸腺嘧啶 ( 3H TdR)和氚 亮氨酸 ( 3H Leu )掺入等技术和方法 ,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ )和血管紧张素 ( 1 7) [Ang ( 1 7) ]刺激大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,观察和分析Ang ( 1 7)对VSMCs增殖及蛋白激酶C (PKC)和胞外调节蛋白激酶 (ERK)表达的影响。Ang ( 1 7)能明显抑制基础和AngⅡ刺激下的VSMCsPKC ζ和ERK1/ 2蛋白表达 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,减少3H TdR和3H Leu掺入量 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结果提示 ,Ang ( 1 7)对VSMCs增殖有抑制作用 ,这可能与影响PKC ζ和ERK1/ 2蛋白表达有关。

一氧化氮在17-β雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖和原癌基因c-fos表达中的作用

实验利用大鼠血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells ,VSMC)作为模型 ,观察 17 β雌二醇 (E2 )对VSMC增殖和原癌基因c fos表达的影响 ,并探讨VSMC源性一氧化氮 (NO)在其中的作用。检测指标包括NO释放的测定、细胞计数、3 H Tdr掺入、噻唑蓝 (MTT)测定和c fosmRNA表达。结果显示 ,E2 ( 10 12 ～ 10 -8mol/L)呈浓度依赖性地促进VSMC中NO的释放 ;10 -8mol/LE2 能明显抑制 10 %小牛血清 (FCS)和 10 -7mol/L内皮素 1(ET 1)诱导的细胞增殖和DNA合成 ,E2 的抑制作用均可被雌激素受体 (ER)拮抗剂tamoxifen ( 10 -7mol/L)和一氧化氮合酶抑制剂L NAME( 10 -6 mol/L)明显减轻 ;E2 ( 10 -8mol/L)可明显抑制 10 -7mol/LET 1诱导的VSMCc fos表达 ,这种抑制作用可被L NAME ( 10 -6 mol/L)明显减轻。这些结果提示E2 能抑制VSMC增殖和原癌基因c fos表达 ,这和促进VSMC的NO释放密切相关 。

基质相互作用分子1基因敲除抑制血管平滑肌细胞增殖

目的探讨基质相互作用分子1（STIM1）基因敲除对血管平滑肌细胞内钙浓度和细胞增殖的调控作用。方法原代培养血管平滑肌细胞，用构建好的大鼠STIM1干扰腺病毒载体（Ad—si／rSTIMl）和人重组STIM1腺病毒载体（Ad-hSTIM1）进行转染，Western blot检测细胞STIM1表达，^3H胸腺嘧啶核苷（^3H—TdR）掺入法和细胞计数测定细胞增殖，激光共聚焦检测细胞内钙变化。结果Ad—si／rSTIM1转染后48h后细胞STIM1表达与转染对照腺病毒载体比较明显降低（P〈0．05），细胞内钙浓度也明显下降（P〈0．05），细胞增殖被显著抑制（P〈0．05）；Ad—hSTIM1共转染后48h细胞STIM1表达恢复到正常水平；细胞内钙浓度和细胞增殖恢复到正常水平。结论STIM1调节血管平滑肌细胞内钙浓度，并进而参与对血管平滑肌细胞增殖的调控。