中药药对的系统研究(Ⅵ)--黄芪当归药对研究

黄芪当归是经典的补气生血药对,具有独特的配伍意义,故历久不衰,沿用至今。传统中医认为黄芪当归药对具有益气生血的功效,可用于治疗劳倦内伤、气血两虚、阳浮于外的热证等症状。现代研究发现,该药对具有调节免疫系统、保护心脑血管、促进造血以及抑制肿瘤增殖等药理作用。临床上常用于治疗肿瘤患者因放化疗引起的免疫力低下或白细胞减少症,以及因雌激素水平波动而引起的更年期综合症。本文通过查阅国内外关于黄芪当归药对化学成分、药理作用和应用研究等最新研究成果,对黄芪当归药对的研究概况进行全面综述,为进一步开发应用提供指导。

基于化学成分与药理作用评价当归-黄芪药对配方颗粒汤剂与传统汤剂的差异

目的评价当归-黄芪药对配方颗粒汤剂(DGD)与传统汤剂在化学成分和药理效应方面的差异,为合理应用该配方颗粒提供参考。方法以原料来源批次统一和不统一2种对比方式,设不同样品组,采用高效液相色谱(HPLC)法建立特征图谱,从特征图谱相似度、成分种类、指标成分含量、共有峰面积等角度对化学成分进行评价;采用失血性血虚模型小鼠评价药效。结果①DGD特征图谱与传统汤剂相似度较高(相似度>0.87);②共有色谱峰数目不一致,传统汤剂-自购饮片和传统汤剂-A厂饮片共有色谱峰各12个,A厂DGD共有色谱峰15个,B厂DGD共有色谱峰10个;③A厂DGD中阿魏酸、毛蕊异黄酮苷含量高于传统汤剂(P<0.05);B厂DGD与传统汤剂阿魏酸含量差异无统计学意义,但毛蕊异黄酮苷含量较传统汤剂低(P<0.05);④DGD共有峰面积总和与传统汤剂相比,自购传统汤剂、A厂传统汤剂及A厂配方颗粒、B厂配方颗粒中各成分含量相对比值分别为1.00、0.96、2.14、0.60;⑤DGD及传统汤剂均能明显促进失血性贫血模型小鼠血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)恢复(P<0.01);与模型对照组比较,除B厂DGD组外均差异有统计学意义(P<0.05);A厂DGD与传统汤剂差异无统计学意义,B厂DGD与传统汤剂差异有统计学意义(P<0.01)。结论无论原料来源批次是否一致,DGD与传统汤剂在化学成分上均存在一定差异;在药理作用上,来源于同一批次饮片制备的DGD与传统汤剂对改善失血性贫血药效相当,来源于不同批次饮片制备的DGD与传统汤剂在药效上存在一定差异;不同来源批次的饮片和不同制备工艺造成不同厂家配方颗粒存在质量差异,说明国家统一配方颗粒质量标准及制定相关过程规范具有必要性与紧迫性。

黄芪-当归通过调控巨自噬和分子伴侣介导的自噬缓解大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的:探究黄芪-当归复方药(HQDG)通过调控巨自噬与和分子伴侣介导的自噬(CMA)对脑缺血/再灌注(I/R)损伤7 d时大鼠脑组织的作用及机制。方法:将雄性SD大鼠随机分成假手术(sham)组、模型(model)组、HQDG组和血塞通(XST)组。液质联用技术检测HQDG的主要化学成分。左侧改良线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞/再灌注模型,激光散斑血流成像仪观察脑血流变化;Zea Longa评分观察神经功能缺损情况;HE染色观察神经细胞损伤程度;透射电子显微镜观察脑组织神经血管单元和自噬小体数量的变化;免疫组织化学法检测LC3、P62、溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP-2A)、热休克蛋白70(HSP70)和肌细胞增强因子2D(MEF2D)的表达;Western blot法检测P62和LC3的表达。结果:与sham组相比,model组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P<0.01),神经细胞大量坏死,细胞核溶解,细胞排列紊乱,自噬小体数量增多,脑组织中LC3、LAMP-2A、HSP70和MEF2D蛋白表达水平升高,P62蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01);与model组相比,HQDG和XST组脑组织神经功能缺损评分显著降低(P<0.01),细胞损伤明显减轻,自噬小体进一步增多,脑组织中LAMP-2A、HSP70、MEF2D和P62蛋白表达水平降低,LC3-II/LC3-I比值升高(P<0.05或P<0.01)。结论:HQDG可通过激活巨自噬、下调CMA减轻大鼠脑I/R损伤,从而发挥神经保护作用。

HPLC-DAD/ELSD法测定当归-黄芪药对不同配比下主要有效成分的含量

本文旨在建立高效、快速和精度高的方法测定当归-黄芪药对中主要有效成分阿魏酸、黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量,并探讨当归与黄芪按不同比例配伍时二者中主要有效成分的变化趋势。采用加热回流提取法制备当归、黄芪按5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5比例配伍下的供试品溶液。选用SinoChromODS-AP(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈和0.2%冰醋酸溶液为流动相梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,柱温25℃,选择DAD检测器测定阿魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷,检测波长为260 nm和310 nm,黄芪甲苷的测定选择ELSD检测器。结果表明:所建立的检测方法线性关系良好,三种指标性成分加样回收率RSD%<3.0%,含量测定发现,黄芪甲苷、阿魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量随着当归、黄芪配比不同而发生变化。故HPLC-DAD/ELSD法检测操作快速、准确、简便、精密度高且重复性好,本研究初步揭示了当归-黄芪药对不同配比时的主要活性成分变化,为进一步探讨当归-黄芪配伍协同增效的药理学作用提供参考。

黄芪-当归药对研究进展

黄芪-当归是著名的益气补血药对,配伍后达到同类相须、相辅相成、相互促进等功效,能够增强人体免疫力、改善血液循环、保护心脑血管、保护肾脏、辅助治疗糖尿病、小儿咳嗽、抗纤维化、改善癌症等作用。本文从其功效及物质基础、药理研究、临床应用方面对黄芪-当归药对进行了系统的阐述,并对其进一步研究进行了展望,为黄芪-当归药对的开发提供依据。

龙生蛭胶囊中“黄芪-当归-刺五加”药组治疗PSCI的动物实验研究及其作用机制的整合药理学发掘与预测

目的通过动物实验和网络预测的形式来揭示龙生蛭胶囊中“黄芪-当归-刺五加”药组治疗脑卒中后PSCI(PSCI)的作用机制,为龙生蛭胶囊的开发研究及临床应用提供参考。方法采用Morris水迷宫实验评价“黄芪-当归-刺五加”药组对PSCI大鼠行为学的影响,同时对血清生化学相关指标进行测定和比较;采用整合药理学平台(TCMIP V2.0)对“黄芪-当归-刺五加”药组治疗PSCI的作用机制进行挖掘与预测。结果“黄芪-当归-刺五加”药组对PSCI大鼠的空间记忆能力和学习能力具有良好的改善作用;同时药组还能显著降低模型脑卒中大鼠血清中丙二醛(MDA)的含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性。共预测得到27个活性成分,11个药物与疾病的共有靶标。结论证实了“黄芪-当归-刺五加”对PSCI大鼠的行为学及血清生化指标具有一定的影响及改善作用,同时也初步预测了“黄芪-当归-刺五加”药组治疗PSCI的药效物质基础及作用机制,可为龙生蛭胶囊的进一步开发利用提供参考。

基于网络药理学探讨黄芪-当归药对治疗膝骨关节炎的作用机制研究

目的利用网络药理学的方法,建立黄芪-当归药对的"活性成分-作用靶点-通路"的网络图,对作用靶点的基因功能和通路进行富集分析,探讨黄芪-当归药对治疗膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法通过检索中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)、台湾中医药资料库获得黄芪-当归药对的主要活性成分,采用SwissTargetPrediction预测活性成分的潜在靶点,同时利用OMIM、TTD、DiGSeE 3个疾病靶点数据进行比对,获得膝骨关节炎的核心作用靶点。借助STRING在线数据库进行蛋白质与蛋白质相互作用(PPI)网络的构建与分析。借助David数据库对作用靶点的GO(Gene ontology)注释和KEGG通路进行富集分析。最后通过Cytoscape 3.7.1构建黄芪-当归药对的"活性成分-作用靶点-通路"网络图,探究黄芪-当归药对治疗膝骨关节炎可能的靶点及作用机制。结果黄芪-当归共14个核心活性成分、61个重要作用靶点与其治疗膝骨关节炎密切相关。主要涉及黄芪-当归的核心化合物有槲皮素(quercetin)、刺芒柄花素(formononetin)、华良姜素(Jaranol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、山柰酚(kaempferol)、7-O-甲基异丙醇胺(7-O-methylisomucronulatol)、Inermine、异鼠李素(isorhamnetin)等;PPI网络图显示靠前的核心靶标有肿瘤蛋白p53(TP53),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),血管内皮生长因子A(VEGFA)、前列腺素内过氧化物合酶(PTGS),CJun氨基端激酶(JUN)、表皮细胞生长因子(EGF)、CC趋化因子配体2(CCL2)等;GO注释分析结果表明黄芪-当归活性成分具有促进细胞增殖,提高蛋白质结合活性、酶激活反应的作用;KEGG结果表明黄芪-当归药对发挥主要作用可能与PI3K-Akt信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)、肿瘤坏死因子(TNF signaling pathway)、MAPK信号通路(MAPK signaling pathway)、血管内皮生长因子(VEGF signaling pathway)等信号通路有关。结论黄芪-当归药对可以通过多种途径,多种信号通路作用于多种靶点发挥其药物功效,有效治疗和延缓膝骨关节炎的病变进程,后期可以充分利用网络药理学的研究思路,有效预测与分析药物的潜在作用机制,为疾病的治疗提供新思路。

黄芪-当归药对治疗动脉粥样硬化理论探讨

近年来,随着生活方式的改变,动脉粥样硬化的发病率逐年升高,引起若干严重的不良血管事件。黄芪、当归作为补气养血活血的经典药对,能够通过抑制炎症反应、改善氧化应激、调节糖脂代谢、保护血管内皮等发挥抗动脉粥样硬化的作用。文章通过从动脉粥样硬化的病因病机、治疗原则以及黄芪-当归药对的相关药理学研究等方面探讨黄芪-当归药对治疗动脉粥样硬化的理论,以期为今后相关研究提供参考。

基于中医传承辅助平台分析含黄芪-当归药对的中成药组方规律

目的:分析《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》(以下简称《中药成方制剂》)中含黄芪-当归药对成方制剂的组方规律,以期为临床应用及新药研发提供参考。方法:收集《中药成方制剂》中含黄芪-当归药对的所有成方制剂,录入中医传承辅助平台(V2.5)建立数据库,采用该软件的频次统计、关联规则等数据挖掘方法,对主治证候和疾病进行频次分析,并对高频证候和疾病的组方规律进行分析。结果:含黄芪-当归药对成方制剂共262首,主治证候共74种,主治疾病共95种。高频证候为气血两虚证、风寒湿凝滞筋骨证,治疗气血两虚证高频药物组合以八珍汤将人参换为黄芪为基本方,还可视为人参养荣汤、十全大补汤加减;治疗风寒湿凝滞筋骨证的药物为三痹汤加减变化的新方。高频主治疾病为眩晕、虚劳。治疗眩晕的药物组合为八珍汤加味的新方;治疗虚劳的药物组合为人参养荣汤、十全大补汤加味。结论:该研究通过大数据客观地呈现了含黄芪-当归药对成方制剂的主治病证和组方规律,对黄芪-当归药对的临床运用有重要指导价值,也可为相关的药物研发提供客观依据。

唐东昕教授运用黄芪-当归药对治疗癌性疲乏经验举隅

中医黄芪-当归药对为经典配伍之一,由于其可调气、调血,发挥益气、活血的功效,不仅构成一"法",亦构成一"方",唐东昕教授在临床中常运用该药对改善癌因性疲乏。从癌因性疲乏的病因病机、治疗原则、黄芪-当归药对的配伍功效,以及唐教授临床运用该药对治疗癌性疲乏的经验进行阐述,以期为后续研究提供理论参考。

芪归药对基于VEGF/PI3K/Akt信号通路干预糖尿病肾病大鼠肾小管间质纤维化的分子机制

目的探讨黄芪配伍当归药对通过VEGF/PI3K/Akt通路干预糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)对大鼠肾小管间质纤维化水平的影响,探究黄芪当归药对对于DN的作用分子机制及疗效的影响。方法采用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)30 mg/kg腹腔注射进行DN大鼠模型的构建,分为模型组、芪归药对组(黄芪∶当归=1∶1、5.40 g·kg^(-1)·d^(-1))、达格列净组(0.45 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组各5只,以同周龄SD大鼠5只作为正常对照组。此外,给药期间分别测定各组大鼠体质量、尿量、尿糖、尿酮、空腹血糖INS,给药前和最后一次给药后进行HbA1c检查。8周后处死,各组均选择3只分离肾脏,按病理组织学资料制作肾组织石蜡切片,用于进行肾组织病理学、超微结构形态学的观察,RT-PCR法检测DN大鼠肾脏组织VEGF、PI3K及Akt的miRNA表达量,免疫组化法检测VEGF、PI3K及Akt的蛋白表达情况,以探究芪归药干预VEGF/PI3K/Akt通路对DN大鼠肾小管间质纤维化进程的影响。结果模型组的肌酐、肾脏纤维化的比例、24 h尿蛋白定量、VEGF/PI3K/Akt通路的miRNA蛋白的相对表达水平比对照组高(P<0.05)。芪归药对组的肌酐、空腹血糖、糖化血红蛋白数值、肾组织纤维化面积比例、尿素氮、24 h尿蛋白定量低于DN组(P<0.05),且芪归药对组糖化血红蛋白数值、空腹血糖、肌酐、尿素氮及VEGF/PI3K/Akt通路蛋白表达量与达格列净组基本相同。结论芪归药对通过调节VEGF/PI3K/Akt通路相关靶点miRNA蛋白的表达量起到抗肾脏组织纤维化及抗炎症的作用,以达到延缓DN病程进展的目的。

黄芪-当归对新鲜同种异体骨软骨移植术后兔软骨细胞凋亡及Bax、caspase-3/9表达的影响

目的 通过观察黄芪-当归对软骨细胞凋亡的干预作用,探讨黄芪-当归对新鲜同种异体骨软骨移植成活的影响。方法 4月龄新西兰白兔48只,雌雄各半,随机分为假手术组、模型组、阳性组、黄芪当归5:1组。除假手术组外,其余组雌雄互为供体与受体,进行膝关节骨软骨交叉移植造模。药物干预8周后取材,进行大体观察、HE染色、番红-O染色、免疫组化染色、qPCR及Western blot检测。结果 与模型组相比,黄芪当归5:1组、阳性组移植修复部位愈合较好,软骨细胞形态趋于正常,分裂增殖明显;蛋白多糖沉积增多,Ⅱ型胶原含量较高,差异均有统计学意义(P<0.05);qPCR及Western blot结果显示,与模型组相比,其余组Bax、caspase-3、caspase-9 mRNA及蛋白表达量均明显降低(P <0.05)。结论 黄芪-当归可促进新鲜同种异体骨软骨移植成活,其机制可能与促进胶原蛋白的产生、促进软骨细胞增殖与抑制软骨细胞凋亡有关。

基于Nrf2/HO-1通路探讨黄芪-当归药对改善糖尿病小鼠肾脏氧化损伤的机制

目的:探讨不同配比的黄芪-当归(芪归)药对对糖尿病(DM)小鼠肾脏的保护作用及分子机制。方法:选取雄性C57BL/6小鼠80只,采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法制备2型糖尿病小鼠模型,成模后随机分为模型组、不同配比芪归(芪归5∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶5)组、缬沙坦组;同周龄C57BL/6小鼠10只作为对照组。治疗组予相应浓度的药物灌胃,模型组、对照组予等体积0.9%氯化钠溶液。12周后处死小鼠,检测各组小鼠肾功能、尿ACR及MDA、T-AOC、T-SOD、CAT、GSH-PX水平,RT-PCR、Western Blot法分别检测小鼠肾脏Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平,同时应用免疫组化法检测Nrf2水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠血清Cys-C、β2-MG,尿ACR,肾脏MDA,Nrf2、HO-1 mRNA表达水平显著升高(P<0.01),T-AOC及T-SOD、CAT、GSH-PX表达显著降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,不同配比芪归药对能够不同程度减少小鼠尿ACR、改善Cys-C、β2-MG、减轻肾脏组织MDA、T-AOC水平,增加小鼠肾组织Nrf2、HO-1mRNA的表达(P<0.01,P<0.05)。结论:芪归药对能够改善DM小鼠肾脏损伤,可能与激活Nrf2/HO-1通路,增强抗氧化反应有关。

“当归黄芪药对”调控TGF-β_1/CTGFmRNA表达抗大鼠肾纤维化的实验研究

目的探讨"当归黄芪药对"抗肾纤维化的机制,并探讨不同提取方法的药效物质基础,为中药复方防治肾纤维化寻找客观依据。方法采用"当归黄芪药对"醇提取物和水提取物,分别干预腺嘌呤导致的肾间质纤维模型Wistar大鼠,分五组:正常组、A药组(醇提取物组)、B药组(水提取物组)、福辛普利组、模型组,用全自动生化分析仪检测血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、24h蛋白尿(24h Pro),RT-PCR法检测TGF-β1、CTGF及其mRNA表达。结果腺嘌呤导致肾间质纤维化,"当归、黄芪药对"不同提取物组均能明显改善肾功能指标,同时抑制肾组织TGF-β1mRNA、CTGFmRNA表达(P<0.05或P<0.01),其中醇提取物作用最强(P<0.01)。结论 "当归黄芪药对"通过抑制TGF-β1/CTGFmRNA的表达抗肾纤维化,而且醇提取物作用好于水提取物。

黄芪-当归药对治疗糖尿病心肌病的分子机制

目的:通过网络药理学结合体内动物实验研究的方法,探讨黄芪-当归药对(芪归药对)干预糖尿病心肌病(DCM)的作用机制。方法:从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和中药分子机制生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)数据库中筛选黄芪、当归二味药物的活性成分及基因靶点,通过疾病数据库检索DCM的有关靶点,经过比对得到芪归药对和DCM的共同特异性靶点,建立芪归药对"主要活性成分-DCM-靶点"作用网络,进行化合物-DCM共同靶点蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析,通过复合分子检测法(MCODE)进行重要模块分析,利用DAVID数据库进行基因本体(GO)以及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,探究其可能的分子机制并进行实验验证。结果:通过网络药理学方法筛选确定了126个芪归药对治疗DCM的核心靶点;经KEGG通路富集分析提示上述关键靶点与炎症反应及氧化应激、胰岛素抵抗、细胞凋亡等通路有关;体内实验发现芪归药对可延缓高糖对DCM大鼠的心肌细胞损伤,提示芪归药对对以上病理进程具有一定的干预作用。结论:芪归药对可能通过作用于白细胞介素-6,血管内皮生长因子A,肿瘤坏死因子,TP53基因,核转录因子等多个靶点治疗DCM,其主要途径为调节细胞凋亡、改善氧化应激及炎症反应,调节糖脂代谢,基于网络药理学及实验验证的研究方法为DCM的发病机制及临床治疗提供了新思路。

芪归多糖的分离纯化及体外抑制肿瘤细胞增殖研究

黄芪-当归配伍为经典补气养血药对,多糖是其重要药效物质。本研究从芪归药对中分离纯化获得6种芪归多糖,CCK-8实验筛选发现其中两种AAPS-1a和AAPS-3a对人结肠癌细胞HCT116和肺癌细胞A549抑制作用显著,对HCT116增殖抑制作用最强,IC_(50)值分别为(47.59±1.3)μg/mL和(18.33±2.5)μg/mL;对A549增值抑制作用次之,IC_(50)值分别为(52.12±1.1)μg/mL和(170.21±2.3)μg/mL。同时,AAPS-1a和AAPS-3a显著诱导HCT116和A549细胞发生凋亡,HCT116细胞凋亡率分别为31.4%和46.5%;A549细胞凋亡率分别为19.3%和33.0%。结构特征分析表明,AAPS-1a和AAPS-3a为分子量分别为7.3×10^(5)、8.5×10^(4)Da的均一多糖。本研究从芪归药对中筛选获得具有肿瘤细胞增殖抑制活性的芪归均一多糖,为阐明芪归多糖抗肿瘤结构基础研究提供重要实验依据。