羟基红花黄色素A联合黄芪甲苷-Ⅳ对TNF-α诱导内皮细胞凋亡的影响

目的：观察羟基红花黄色素A（hydroxysafflower yellow A,HSYA）联合黄芪甲苷-Ⅳ（astragaloside-Ⅳ,As-Ⅳ）对人重组肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响。方法：噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度TNF-α（0,10,20,50μg·L^（-1））,HSYA（0,1×10^（-6）,5×10^（-6）,1×10^（-5）,1×10^（-4）mol·L^（-1））,As-Ⅳ（0,1×10-6,5×10^（-6）,1×10^（-5）,1×10^（-4）mol·L^（-1））对细胞活力的影响以及HSYA联合As-Ⅳ（1×10-5mol·L^（-1））对TNF-α（20μg·L^（-1））损伤细胞活力的影响。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同浓度TNF-α对B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）,活化的天冬氨酸蛋白水解酶-9（cleaved Caspase-9）蛋白表达的影响,以及HSYA联合As-Ⅳ对上述蛋白表达是否具有改善作用。实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测HSYA联合As-Ⅳ对TNF-α诱导Bcl-2基因表达的影响,免疫荧光技术分析HSYA联合As-Ⅳ对TNF-α诱导Bcl-2,Bax蛋白表达的影响。结果：与空白组比较,TNF-α在20μg·L^（-1）时可诱导EA.hy926细胞活力下降,上调Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达;与TNF-α组比较,HSYA联合As-Ⅳ预处理组可减少TNF-α诱导的细胞活力下降,抑制Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,且HSYA联合As-Ⅳ预处理组对上述指标的改善效果优于HSYA或As-Ⅳ单独预处理组。结论：HSYA联合As-Ⅳ对TNF-α诱导的EA.hy926细胞凋亡具有抑制作用,且效果优于单药,其机制可能与其下调Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9和上调Bcl-2的表达有关。

黄芪甲苷通过抑制内质网应激减轻老年大鼠急性心肌梗死后非梗死区心肌细胞凋亡

目的:探讨黄芪甲苷减少老年大鼠急性心肌梗死后非梗死区细胞凋亡与内质网应激反应的关系。方法:建立大鼠心肌梗死模型,将24h内存活大鼠随机分为急性心肌梗死组、黄芪甲苷2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg组及阳性对照牛磺酸300mg/kg组,另设假手术组作为阴性空白对照。采用TUNEL法和透射电镜观察法检测心肌细胞凋亡;激光扫描共聚焦显微镜测定心肌细胞内钙离子浓度;蛋白免疫印迹法检测内质网应激相关蛋白糖调节蛋白78和Caspase-12的表达水平。结果:与假手术组相比,急性心肌梗死组细胞凋亡率由0.9±0.04%明显升高至23.8±1.19%、胞浆内钙离子浓度由102.37±8.91μmol/L明显升高至467.15±17.43μmol/L,细胞超微结构明显改变、内质网应激相关蛋白糖调节蛋白78和Caspase-12表达由0.11±0.02和0.013±0.009明显增加至0.89±0.13和0.106±0.011;而5mg/kg黄芪甲苷明显缓解了上述指标的变化(凋亡率降为11.0±0.53%、胞浆内钙离子浓度平均值为降为364.92±9.39μmol/L,细胞超微结构改善,GRP-78、Caspase-12蛋白表达量降为0.34±0.17和0.047±0.018);且与阳性对照牛磺酸组相比差别无统计学差异。结论:黄芪甲苷可减少老年大鼠急性心肌梗死后非梗死区心肌细胞凋亡率而保护心肌,其机制可能与抑制内质网应激相关凋亡途径有关。

黄芪甲苷通过CaMKⅡ信号通路对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用

目的:从钙调素蛋白依赖激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)信号通路的角度探讨黄芪甲苷(AsⅣ)对异丙肾上腺素(Iso)诱导乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及其可能机制。方法:原代培养新生乳鼠心肌细胞,10 mol/L异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,观察KN93(Ca MKⅡ抑制剂)、黄芪甲苷3,10,30 mol/L剂量组对肥大细胞的影响。采用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;考马斯亮蓝试剂盒检测心肌细胞中总蛋白含量;罗丹明-鬼笔环肽染色观察细胞骨架;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心房利钠肽(ANP)mRNA表达;Wertern blot检测心肌细胞Ca MKⅡ表达。结果:与正常对照组细胞比较,异丙肾上腺素模型组细胞体积、总蛋白含量、ANPmRNA和Ca MKⅡ表达分别增加98.14%、52.63%、87.37%和55.22%。黄芪甲苷可有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,黄芪甲苷30 mol/L组可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大,使模型组细胞体积减小49.67%、总蛋白含量降低33.87%、ANPmRNA表达降低40.00%,Ca MKⅡ的表达降低31.73%。结论:黄芪甲苷可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制Ca MKⅡ信号通路有关。

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导大鼠主动脉氧化应激和炎症的影响

目的:研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,As IV)对异丙肾上腺素(Isoprenaline,ISO)诱导的大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响并从氧化应激和抗炎症方面探讨其可能的机制。方法:以异丙肾上腺素15mg/kg腹腔注射7天制备大鼠主动脉内皮损伤模型。60只SD大鼠随机分为6组,在异丙肾上腺素造模前一天给予不同剂量的黄芪甲苷(25、50、100mg/kg)和普萘洛尔40mg/kg或羧甲基纤维素钠(1%)灌胃,第二天同时腹腔注射15mg/kg异丙肾上腺素连续7天。通过循环内皮细胞计数确定内皮细胞损伤程度;通过二氢乙锭(hydroethidine)荧光染色的方法原位定性超氧阴离子;Western-blot测定cu/zn SOD、NF-k B p65、Ik B-α蛋白表达;RT-PCR测定IL-1β,TNF-αmRNA的表达。结果:异丙肾上腺素作用后,外周血液中循环内皮细胞比空白增多了253.59%;血管中超氧阴离子增加了115.12%;cu/zn SOD表达下降了22.80%;p65表达升高了34.40%,IkB-α蛋白表达降低了33.30%;同时主动脉血管组织中炎症因子IL-1β、TNF-α的mRNA表达量分别上升了162.41%、108.20%。与异丙肾上腺素组相比,黄芪甲苷不同剂量组均有所改善,且在黄芪甲苷(50mg/kg)效果最明显,表现为外周血循环内皮细胞数目减少了49.34%,血管组织中超氧因子减少了42.42%,p65蛋白表达降低了16.47%,cu/zn SOD、IkB-α的蛋白表达分别升高了18.37%、29.10%,主动脉血管组织中IL-1β、TNF-α的mRNA表达分别降低了35.02%、43.25%。结论:黄芪甲苷能改善异丙肾上腺素诱导的大鼠主动脉血管内皮细胞的损伤,其机制可能是从抗氧化和抗炎症方面来保护血管内皮细胞,进而改善血管舒缩功能。

黄芪甲苷对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的:探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,As-Ⅳ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的作用及机制。方法:以原代培养乳鼠心肌细胞为模型,血管紧张素Ⅱ0.1μmol/L诱导心肌细胞肥大。观察黄芪甲苷3μmol/L、10μmol/L、30μmol/L浓度对心肌肥厚的抑制作用,并进一步探索在钙调素激酶Ⅱ(CaMKⅡ)特异性抑制剂KN93及血管紧张素Ⅱ拮抗剂Losartan存在的情况下,对心肌肥厚的作用。用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;以Fura-2/AM为荧光探针,采用Till阳离子测定系统,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化;Western blot法测心肌细胞内CaMKⅡδB表达。结果:与正常组比,血管紧张素Ⅱ0.1μmol/L组心肌细胞总蛋白含量增加了61.4%,体积增大了88.6%,心肌细胞内[Ca2+]i静息水平提高,CaMKⅡδB的表达明显增加;洛沙坦1μmol/L及钙调素激酶Ⅱ特异性抑制剂0.2μmol/L明显抑制了血管紧张素Ⅱ诱导的上述改变。结论:黄芪甲苷对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞肥大有抑制作用,其机制可能与降低[Ca2+]i及CaMKⅡδB表达有关。