黄芪皂苷I对Th1免疫反应的调节效应及机制研究

目的研究黄芪皂苷Ⅰ的免疫调节作用以及作用的分子机理。方法构建丝裂原诱导脾淋巴细胞增殖细胞模型,测定黄芪皂苷Ⅰ对Con A诱导T淋巴细胞增殖和LPS诱导B淋巴细胞增殖反应,构建anti-CD3 m Ab抗体诱导T淋巴细胞增殖,RT-PCR检测黄芪皂苷Ⅰ对IL-2、IFN-γ和T-bet mRNA基因表达。结果黄芪皂苷Ⅰ在30n M显著促进Con A刺激T淋巴细胞增殖,差异有显著性意义(P<0.05);黄芪皂苷Ⅰ体外用药能够显著上调IFN-γ,T-bet的mRNA表达,而对IL-2表达水平无明显影响。结论黄芪皂苷Ⅰ可能特异性激活转录因子T-bet的转录,促进T淋巴细胞增殖和细胞因子的产生。

黄芪皂苷Ⅱ对肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用及其机制

目的 探讨黄芪皂苷Ⅱ(ASⅡ)对肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭的抑制作用,并分析该作用与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 取人肾透明细胞癌细胞786-O,随机分为对照组、ASⅡ组和LiCl干预组。对照组仅更换新鲜血清培养基,不进行其他处理;ASⅡ组加入100μmol/L ASⅡ溶液;LiCl干预组先加入10 mmol/L LiCl(Wnt/β-catenin信号通路激活剂)溶液,24 h后加入100μmol/L ASⅡ溶液。采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,Western blotting法检测细胞上皮间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)。结果 与对照组比较,ASⅡ组细胞迁移率降低;与ASⅡ组比较,LiCl干预组细胞迁移率升高(P均<0.01)。与对照组比较,ASⅡ组穿膜细胞数减少;与ASⅡ组比较,LiCl干预组穿膜细胞数增加(P均<0.01)。与对照组比较,ASⅡ组E-cadherin蛋白表达水平升高,N-cadherin、Vimentin及β-catenin蛋白表达水平降低;与ASⅡ组比较,LiCl干预组E-cadherin蛋白表达水平降低,N-cadherin、Vimentin及β-catenin蛋白表达水平升高(P均<0.01)。结论 ASⅡ能够抑制肾透明细胞癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能是通过调控Wnt/β-catenin信号通路来抑制细胞EMT实现的。

黄芪多糖、皂苷及益生菌复合物对感染大肠杆菌肉鸡肠道的保护作用

旨在评价黄芪多糖(APS)、皂苷(AS)与益生菌的复合物对肉鸡抗大肠杆菌感染能力的影响。选取1日龄的白羽肉鸡200只,随机分为空白组、受试物组、阳性组和模型组,每组50只鸡,试验期42 d。1~21 d,空白组和模型组雏鸡每日饲喂基础日粮并灌服生理盐水0.2 mL·只^(-1),受试物组饲喂含APS(1 g·kg^(-1))与AS(10 mg·kg^(-1))的试验日粮,并灌服益生菌复合菌液0.2 mL·只^(-1)(非解乳糖链球菌∶植物乳杆菌∶枯草芽孢杆菌=1∶1∶1,菌液浓度均为1×10^(9) CFU·mL^(-1)),阳性组雏鸡每天饲喂基础日粮中添加了50 mg·kg^(-1)盐酸多西环素可溶性粉的试验日粮。21 d时,受试物组、阳性组和模型组试验鸡均灌服0.2 mL·只^(-1)大肠杆菌O_(78)菌液(6×10^(8) CFU·mL^(-1))。在感染第0、1、7、14和21天(即试验期第21、22、28、35和42天)检测十二指肠和空肠组织结构、sIgA、炎性因子和氧化指标,同时检测盲肠内容物细菌数量。结果显示:1)除感染第0天外,模型组盲肠大肠杆菌数量均显著高于空白组、受试物组和阳性组(P<0.05),感染后第0、1、7、14和21天,受试物组鸡乳酸菌数量显著高于空白组、阳性组和模型组(P<0.05)。2)感染1和7 d时,受试物组和阳性组鸡十二指肠和空肠组织sIgA含量显著高于空白组和模型组(P<0.05);感染14 d时,受试物组鸡空肠组织sIgA含量显著高于空白组和模型组(P<0.05)。3)感染1和7 d时,受试物组和阳性组十二指肠、空肠的TNF-α含量显著低于模型组(P<0.05);感染7 d时,受试物组和阳性组十二指肠和空肠IL-10含量显著高于模型组(P<0.05);感染14和21 d时,受试物组和阳性组空肠组织IL-10含量显著高于模型组(P<0.05)。4)感染1、7、14、21 d时,受试物组、阳性组的十二指肠、空肠组织MPO活力显著高于空白组(P<0.05);感染1 d时,受试物组和阳性组空肠组织SOD显著高于模型组(P<0.05);感染7、21 d时,受试物组和阳性组十二指肠和空肠组织T-AOC显著高于模型组(P<0.05)。综上,在本试验条件下,APS、AS与益生菌复合物联合使用能增强雏鸡抗大肠杆菌感染能力,有替代抗生素的作用。

木犀草素、欧当归内酯A和黄芪皂苷Ⅰ单用及联用对人肝星状细胞株LX-2增殖、活化的影响

目的 探讨木犀草素(Lut)、欧当归内酯A(Lev)和黄芪皂苷Ⅰ(Ast)单用及联用对人肝星状细胞株LX-2增殖、活化的影响。方法 取对数生长期的LX-2细胞,采用噻唑蓝(MTT)法考察Lut、Lev和Ast对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的LX-2细胞增殖的影响、联用比例确定及Lut、Lev和Ast联用对TGF-β1诱导LX-2细胞增殖的影响;应用CalcuSyn软件计算Lut、Lev及Ast联用抑制LX-2细胞增殖的联合指数(CI),分析3者联用类型;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测3者对LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,Lut、Lev和Ast联用摩尔比为1∶1∶10,3者单用及联用对TGF-β1诱导的LX-2细胞增殖均具有抑制作用(P<0.05),并呈浓度依赖性;CalcuSyn软件分析结果显示,3者联用对LX-2细胞的增殖抑制率>15%时CI<1,说明3者联用具有协同增效的作用;Western blot结果显示,Lut、Lev及Ast联用能够显著降低TGF-β1诱导的LX-2细胞中α-SMA蛋白的表达(P<0.01),降低LX-2细胞中TGF-β1蛋白的表达(P<0.05)。结论 Lut、Lev和Ast单用及联用均能抑制LX-2细胞的增殖、活化,3者联用作用更强、具有协同增效的作用,该作用可能与下调肝星状细胞TGF-β1蛋白表达有关。

黄芪总皂苷调控LKB1/AMPK信号通路对人乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期的影响及机制

目的 基于肝激酶(LK)B1/磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路探讨黄芪总皂苷对人类乳腺癌细胞增殖、凋亡及周期的影响及作用机制。方法 以人乳腺癌细胞ZR-75-1为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法观察人乳腺癌细胞ZR-75-1增殖活力变化;苏木素-伊红(HE)染色观察人乳腺癌细胞ZR-75-1形态变化;流式术检测人乳腺癌细胞ZR-75-1凋亡率及细胞周期变化;RT-聚合酶链反应(PCR)检测人乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK mRNA水平;Western印迹检测人乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK蛋白表达。结果 乳腺癌细胞ZR-75-1的增殖受到黄芪总皂苷的影响,随黄芪总皂苷剂量(0、50、100、150 mg/μl)攀升,癌细胞增殖抑制率逐渐强,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌细胞ZR-75-1的凋亡受到黄芪总皂苷影响,黄芪总皂苷剂量越大,乳腺癌细胞ZR-75-1的凋亡率越高,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌细胞ZR-75-1的细胞周期,随黄芪总皂苷剂量攀升,G0/G1期细胞比例明显增加,S期、G2期明显降低。受黄芪总皂苷影响,乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK mRNA及蛋白表达上升,黄芪总皂苷剂量越高,LKB1、AMPK mRNA表达上升越明显,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 黄芪总皂苷能够抑制人乳腺癌细胞ZR-75-1的增殖活力,诱导人乳腺癌细胞ZR-75-1凋亡并在细胞增殖周期G0/G1期中阻滞,其中的作用机制与LKB1、AMPK信号通路密切相关。

黄芪总皂苷抑制胆管反应抗胆汁性肝纤维化的作用机制研究

目的研究黄芪总皂苷(ASTs)抑制胆管反应改善胆汁性肝纤维化的部分作用机制。方法将24只SD大鼠随机分为假手术组,胆管结扎组和ASTs干预组,每组8只。胆管结扎造模后第2周首日,ASTs组给予ASTs 160 mg·kg^(-1)·d^(-1)体重灌胃,每天1次,连续给药3周。假手术组和模型组大鼠予以同体积的双蒸水灌胃。第4周末处死取材。HE染色和天狼猩红染色观察各组大鼠肝组织病理及胶原沉积情况,天狼猩红染色阳性面积半定量分析和羟脯氨酸含量评估肝组织纤维化程度;免疫组化、Western blot、实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白(Desmin)、细胞角蛋白(CK)19、CK7、上皮细胞黏附分子(Epcam)、OV6及赖氨酰氧化酶(LOX)家族蛋白表达变化。体外采用丁酸钠诱导肝祖细胞株WB-F344细胞向胆管上皮细胞表型分化,给予ASTs干预,4天后收集细胞。qRT-PCR法检测细胞CK19、LOXL1和LOXL2表达变化。结果与BDL模型组比较,ASTs组血清ALT和AST活性显著降低(P<0.01);肝组织病理损伤和胆管增生明显减轻,Hyp含量和天狼猩红阳性面积比均显著降低(P<0.01);免疫组化染色显示,ASTs组肝组织α-SMA、Desmin、CK19、CK7、Epcam和OV6阳性表达显著减少;且α-SMA、CK7、LOX和LOXL1的mRNA表达显著降低;Epcam和LOXL1的蛋白表达显著减少。体外结果显示,丁酸钠诱导后细胞CK19、LOXL1和LOXL2的mRNA表达显著升高(P<0.01);而与丁酸钠组比较,ASTs组细胞CK19、LOXL1和LOXL2的mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论ASTs通过抑制胆管反应改善胆汁性肝纤维化,其作用机制可能与下调LOXL1的表达有关。

蒙古黄芪皂苷对铅暴露致发育期大鼠神经炎症与肠道菌群紊乱的影响

目的探讨蒙古黄芪皂苷对铅暴露致发育期SD大鼠神经炎症及肠道菌群紊乱的干预效果。方法40只4周龄SD大鼠随机分为对照(CG)组,铅染毒(LE)组,皂苷低、中、高剂量干预(SL、SM、SH)组,相应干预4周后,氢化物原子荧光光谱法检测大鼠血铅水平,酶联免疫吸附试验检测大鼠海马中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平,16S rDNA高通量测序检测盲肠内容物中肠道菌群的组成。结果与CG组比较,其余各组血铅水平均升高,LE组海马中TNF-α、IL-6和IL-1β水平升高,肠道菌群α、β多样性显著改变,Shannon指数和Simpson指数降低,罗姆布茨菌属、布劳特氏菌属、毛罗菌科_UCG-001菌属相对丰度减少,而瘤胃球菌属、普雷沃菌科_UCG-001菌属相对丰度增加(P<0.05)。与LE组比较,SL、SM组血铅水平降低(P<0.05),SL组海马IL-6水平、SM组IL-1β及SM、SH组海马TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),SL、SM组β多样性及SM组α多样性显著改善,SM组Simpson指数升高(P<0.05),SH组、SM组瘤胃球菌属、普雷沃菌科_UCG-001菌属相对丰度减少(P<0.05),SM组罗姆布茨菌属、毛罗菌科_UCG-001菌属、布劳特氏菌属及SL组布劳特氏菌属相对丰度均增加(P<0.05)。SM组比SH组增加罗姆布茨菌丰度作用更明显(P<0.05)。结论蒙古黄芪皂苷可有效抑制铅致发育期大鼠海马中的神经炎症反应和肠道菌群的紊乱,且中剂量干预效果明显。

黄芪皂苷对不同类型乳腺癌细胞的作用效应及机制研究

目的:研究中药黄芪皂苷对不同类型乳腺癌细胞的作用效应及对胞内miRNA-155表达的影响,探讨其发挥效应可能的途径,为阐明中药的抗肿瘤作用机制和其临床应用的推广提供理论依据。方法:选择代表不同类型的乳腺癌细胞系MCF-7,MDA-MB-231和T-47D,选取对数生长期的细胞随机分为对照组和加药组,在加药组中加入不同浓度的黄芪皂苷溶液(终浓度0μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL),绘制细胞生长曲线并检测细胞克隆形成情况,并用流式细胞仪检测细胞凋亡,使用qRT-PCR测定FOX3a、SOCS1的mRNA表达水平。结果:黄芪皂苷在体外能抑制3种乳腺癌细胞系的生长和增殖,并且诱导乳腺癌细胞凋亡,但作用效应不尽相同。对T-47D的作用最强并且呈剂量依赖型,对MDA-MB-231和MCF-7的作用稍弱并呈时间-剂量依赖型。黄芪皂苷能使MCF-7和T-47D中的FOX3a、SOCS1表达降低,而MDA-MB-231中FOX3a,SOCS1升高。结论:黄芪皂苷对乳腺癌有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并且对不同的细胞类型作用效应不同。在MCF-7和T-47D中,黄芪皂苷通过活化JAK-STAT-SOCS和INS/IGF-1信号通路中的分子FOX3a,SOCS1来发挥效应,而在MDA-MB-231中则不然,其作用的准确途径和机制尚需进一步地深入研究。

黄芪总皂苷对肺腺癌细胞增殖、迁移、凋亡能力及HIF-1α/VEGF信号通路蛋白表达的影响

目的探讨黄芪总皂苷对肺腺癌细胞增殖、迁移、凋亡能力的影响及其机制是否与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路有关。方法将肺腺癌A549细胞分为黄芪总皂苷高、中、低剂量组和对照组,分别加入浓度为200、100、50μmol/L的黄芪总皂苷和等体积的二甲基亚砜(DMSO),培养24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测HIF-1α、VEGF及表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达。结果黄芪总皂苷高、中、低剂量组和对照组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率依次降低,细胞迁移距离依次升高,组间两两比较P均<0.05。黄芪总皂苷高、中、低剂量组和对照组细胞HIF-1α、VEGF及EGFR蛋白相对表达量均依次升高,组间两两比较P均<0.05。结论黄芪总皂苷可降低肺腺癌细胞的增殖、迁移能力,并诱导其凋亡,且随浓度升高而更明显,其机制可能与抑制HIF-1α/VEGF信号通路有关。

黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱对高脂血症大鼠肝脏AMPK/SREBP-1c/ACC通路的影响

目的 探讨黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱对高脂血症大鼠的防治作用及机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药(辛伐他汀,2.1 mg·kg^(-1))组和黄芪总皂苷+荷叶总生物碱低(17+40 mg·kg^(-1))、中(34+80 mg·kg^(-1))、高(68+160 mg·kg^(-1))剂量组;采用高脂饲料喂养复制高脂血症大鼠模型,同时给予药物灌胃治疗,每日1次,连续4周。检测大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;采用HE染色法观察肝脏组织病理形态学变化;qRT-PCR法检测肝组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)m RNA表达情况;免疫荧光法检测肝组织中p-AMPK、SREBP-1c、ACC、CPT-1蛋白表达情况;Western Blot法检测肝组织中AMPK、p-AMPK、SREBP-1c、ACC、p-ACC、CPT-1蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清TG、TC、FFA、LDL-C、AST、ALT水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著下降(P<0.01);大鼠肝细胞内有大量的脂滴聚集,胞浆疏松,出现了大量脂滴空泡和气球样变,细胞核偏移;大鼠肝组织AMPK、CPT-1 mRNA表达显著下调(P<0.01),ACC、SREBP-1c mRNA表达显著上调(P<0.01);大鼠肝脏中p-AMPK、CPT-1蛋白阳性表达明显减少(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白阳性表达显著增加(P<0.01);大鼠肝组织中AMPK蛋白表达未见明显变化(P>0.05),p-AMPK、p-ACC、CPT-1蛋白表达水平明显下降(P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠血清TG、TC、FFA、LDL-C、AST、ALT水平明显下降(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平明显升高(P<0.01);大鼠肝细胞内的脂肪沉积均有明显减轻,仅见少量的脂滴空泡;大鼠肝组织AMPK、CPT-1mRNA的表达明显上调(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC mRNA表达明显下调(P<0.05,P<0.01);大鼠肝脏中p-AMPK、CPT-1蛋白阳性表达明显增加(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白阳性表达显著减少(P<0.01);大鼠肝组织中AMPK蛋白表达未见明显变化(P>0.05),p-AMPK、p-ACC、CPT-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),SREBP-1c、ACC蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论 黄芪总皂苷配伍荷叶总生物碱可能通过调节AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路,抑制脂肪合成,促进脂肪酸氧化分解来防治高脂血症。

黄芪总皂苷对三氧化二砷诱导H9c2细胞损伤的保护作用

为探讨黄芪总皂苷(ASTs)对三氧化二砷(ATO)诱导H9c2细胞损伤的保护作用及其机制,采用6μg·mL^(-1) ATO孵育12 h建立H9c2细胞损伤模型.实验设空白组、模型组、ASTs低/中/高浓度组,ASTs组预孵育12 h,弃去含药培养基,继续用6μg·mL^(-1) ATO孵育12 h,终止实验.通过CCK-8法检测细胞存活率,Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡程度,流式细胞术定量测定细胞凋亡率,RT-qPCR测定Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9表达水平,Western Blot测其蛋白.结果表明:ATO能够显著降低心肌细胞存活率、增加凋亡率(P<0.05);与ATO模型组比较,ASTs各组能显著提高细胞存活率,降低细胞凋亡率(P<0.05),降低Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA表达水平,增加Bcl-2 mRNA表达水平(P<0.05),显著降低细胞中Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平(P<0.05),升高Bcl-2/Bax比值(P<0.05).故ASTs对ATO诱导H9c2细胞凋亡具有保护作用,其机理可能与抑制细胞凋亡有关.

黄芪总皂苷调节Adora2b/IL-10信号通路抑制肝纤维化的实验研究

目的探究黄芪总皂苷调节腺苷A2b受体/白介素-10(Adora2b/IL-10)信号通路阻止肝纤维化进展的作用和机制。方法通过CCl4低剂量反复染毒的方法制备肝纤维化小鼠模型,给予黄芪总皂苷干预,并设立索拉菲尼阳性对照组,检测血清肝功能,HE染色观察肝组织炎症情况,Masson染色观察肝纤维化进展情况,免疫组化观察Col1蛋白表达情况,Western blot检测Adora2b、IL-10蛋白表达情况。结果模型组血清谷丙转氨酶(ALT)活性、总胆红素(TBiL)水平较正常组显著上升(P<0.01),黄芪总皂苷干预后能显著降低模型组ALT、TBiL水平(P<0.01)。HE染色和Masson染色显示,正常组小鼠肝组织无炎症和纤维化改变;模型组肝组织炎症细胞浸润明显,同时肝组织出现明显的纤维间隔;黄芪总皂苷干预后能显著改善组织炎症和肝纤维化进展。免疫组化结果显示,模型组小鼠肝组织的Col1蛋白表达较正常组显著增加(P<0.01),黄芪总皂苷干预后均能显著逆转这一变化。Western Blot结果显示,模型组小鼠肝组织Adora2b、IL-10蛋白表达较正常组显著降低(P<0.01);黄芪总皂苷干预后能显著逆转这一变化(P<0.01)。结论黄芪总皂苷显著阻止肝纤维化模型的肝纤维化进展,其机制可能与调节Adora2b/IL-10信号通路有关。

富硒黄芪皂苷抑制Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病细胞模型细胞凋亡的作用机制

目的:观察富硒黄芪皂苷对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病细胞模型细胞增殖、β-微管蛋白III(β-tubulin III)蛋白表达及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:利用40μmol·L^(-1)Aβ25-35处理大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12建立AD细胞模型。实验分为AD模型组、富硒黄芪皂苷干预组和对照组,富硒黄芪皂苷干预组加入1、2.5、5、10、20、50、100、200μmol·L^(-1)富硒黄芪皂苷干预,MTT法检测各组细胞的增殖活性,倒置显微镜观察富硒黄芪皂苷对细胞形态学的影响。免疫荧光法检测对照组、AD模型组和100μmol·L^(-1)富硒黄芪皂苷干预组β-tubulin III的表达,Western-blot法检测对照组、AD模型组和100μmol·L^(-1)富硒黄芪皂苷干预组PI3K、p-Akt、Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达。结果:富硒黄芪皂苷50、100、200μmol·L^(-1)组贴壁细胞数目均明显多,细胞分布密度明显增加,以100μmol·L^(-1)组差异最显著。富硒黄芪皂苷100μmol·L^(-1)组干预24 h后能显著减轻Aβ25-35的毒性损伤,能明显提升AD细胞的β-tubulin III、PI3K、p-Akt和Bcl-2的蛋白水平(P<0.05),能明显降低Bax和Caspase-3的蛋白水平(P<0.05)。结论:富硒黄芪皂苷能显著改善AD细胞模型细胞形态以及提高细胞活力,其机制可能是通过激活PI3K/Akt信号通路抑制其细胞凋亡实现的。

黄芪皂苷IV对LPS诱导大鼠心肌损伤的保护作用及机制

目的:研究黄芪皂苷IV对LPS诱导的大鼠心肌损伤的保护作用及机制。方法:心肌细胞的活力,乳酸脱氢酶(LDH)的释放,肌酸激酶(CK)的含量被测量来判断心肌细胞损伤的程度。对超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放以及Sirt1的蛋白表达进行评估。结果:1,3和10μM黄芪皂苷IV可显著降低LPS诱导的心肌细胞LDH,CK和MDA的生成;黄芪皂苷IV可剂量依赖性地增加SOD的活性,减少TNF-α的释放。黄芪皂苷IV的干预可剂量依赖性的增加由LPS刺激而引起的乳鼠心肌细胞Sirt1蛋白的表达。结论:结果表明,黄芪皂苷IV可通过调控氧化应激和Sirt1-TNF-α途径有效发挥对LPS诱导大鼠心肌损伤的保护作用。

黄芪总皂苷对薄型子宫内膜的修复作用及机制探究

目的探讨黄芪总皂苷(total saponins of astragalus,TSA)对薄型子宫内膜的修复作用及相关机制。方法2022年1—4月,将36只雌性小鼠分为三组(n=12):假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、治疗组(Model+TSA组)。宫腔灌注无水乙醇进行造模,治疗组小鼠腹腔注射TSA溶液(45 mg·kg^(-1)·d^(-1)),共3周。苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠子宫内膜厚度及形态;扫描电子显微镜观察子宫内膜胞饮突;蛋白质印迹法检测各组小鼠子宫内膜容受性因子血管性血友病因子(vWF)、血管内皮生长因子(vEGF)、同源异型盒A10(HoxA10)、白血病抑制因子(LIF);观察小鼠妊娠胚胎数以评估生育力。结果与Sham组[(410.56±21.47)μm、(7.58±4.87)个、100.00±13.32、100.00±8.43、100.00±5.91、100.00±11.97、(10.98±1.24)个]相比,Model组小鼠子宫内膜厚度[(169.10±34.33)μm]、腺体数量[(1.00±0.86)个]、内膜容受性相关因子vWF(31.29±10.17)、vEGF(22.17±3.92)、HoxA10(30.26±6.37)、LIF(51.83±6.01),以及妊娠胚胎数[(2.42±1.37)个]明显降低(P<0.05);与Model组[(169.10±34.33)μm、1.00±0.86、31.29±10.17、22.17±3.92、30.26±6.37、51.83±6.01、(2.42±1.37)个]相比,Model+TSA组小鼠子宫内膜厚度[(337.89±32.18)μm)、腺体数量[(5.47±1.02)个]、vWF(69.18±5.88)、vEGF(49.40±11.37)、HoxA10(61.28±6.22)、LIF(90.29±12.77),以及妊娠胚胎数[(7.23±1.57)个]明显增加(P<0.05);Sham组小鼠子宫内膜可见成熟胞饮突表达;Model组小鼠子宫内膜未见明显成熟胞饮突,仅见少量小胞饮突表达;而Model+TSA组小鼠子宫内膜可见发育成熟的胞饮突。结论TSA可通过提高内膜容受性发挥对薄型子宫内膜的修复作用。

黄芪皂苷Ⅱ联合5-氟尿嘧啶处理抑制肝癌细胞增殖的实验研究

目的:研究黄芪皂苷Ⅱ联合5-氟尿嘧啶处理对肝癌细胞增殖的影响并分析具体的分子机制。方法:培养肝癌细胞株HepG2,取对数期生长的细胞并用不同条件进行处理,空白对照组用不含血清的DMEM进行处理,5-Fu处理组用0.5、1、5、10μmol/L 5-Fu处理,5-Fu联合黄芪皂苷II处理组用10μmol/L 5-Fu联合20、40、80μmol/L黄芪皂苷II处理。处理后24、48、72h时,采用MTS试剂盒测定细胞活力;处理后24h时,采用Elisa试剂盒测定细胞内凋亡蛋白的含量。结果:与空白对照组比较,5-Fu处理能够以时间依赖性和剂量依赖性的方式降低肝癌细胞存活率;与10μmol/L 5-Fu单药处理组比较,10μmol/L 5-Fu联合黄芪皂苷II处理能够以时间依赖性和剂量依赖性的方式降低肝癌细胞存活率;10μmol/L 5-Fu处理后的Fas、FasL、Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达量显著高于空白对照组,10μmol/L 5-Fu联合40μmol/L黄芪皂苷II处理后的Fas、FasL、Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达量显著高于10μmol/L 5-Fu处理组。结论:黄芪皂苷II联合5-氟尿嘧啶处理能够增强5-氟尿嘧啶对肝癌细胞增殖的抑制效果,介导该作用的凋亡蛋白是Fas/FasL及Bax。

高效液相色谱串联电喷雾检测器一测多评法同时测定当归丸中5种皂苷类成分

目的:建立高效液相色谱串联电喷雾检测器一测多评法(HPLC-CAD-QAMS),同时测定当归丸中5种成分黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷IV、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ的含量。方法:采用电雾式检测器(CAD),将漂移管的温度调节至50℃,并将气体的流速调节至50 psi;Agilent SB-C18(150 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱,将A相和B相分别设置为0.1%的甲酸和乙腈,并将流速调节至1.5 ml/min,同时将进样量调节至20μl,最后将柱温调节至40℃。建立黄芪皂苷Ⅱ与黄芪皂苷IV、异黄芪皂苷Ⅱ等4个皂苷成分的相对校正因子(RCF),用RCF计算各指标成分含量,并验证一测多评法(QAMS)的准确度和重复性。结果:色谱峰分离度良好,黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷IV、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ的线性范围分别为7.5~150μg/ml、8.2~164μg/ml、8.3~16.6μg/ml、7.8~156μg/ml、9.8~245μg/ml,平均加样回收率分别为98.1%、98.7%、99.3%、98.6%、99.2%,RSD分别为1.13%、1.66%、0.97%、1.03%、1.01%。黄芪皂苷Ⅱ设定为内参物,对黄芪皂苷IV、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ的相对校正因子分别为0.822、0.549、0.287、0.786,建立的一测多评法检测方法、结果可靠。结论:建立的HPLC-CAD-QAMS法简便、准确,同时测定当归丸中5个指标成分,可用于当归丸的多指标成分质量控制,为当归丸的质量标准研究提供参考。

黄芪皂苷抗实验性肝损伤作用

两种黄芪苷ASI和SK能对抗D-半乳糖胺,醋氨酚引起的肝损伤。表现为减轻肝毒引起的病变,SGPT降低,肝MDA下降,GSH升高;且三项指标变化呈明显相关。从离体大鼠肝细胞制备法也证明ASI和SK在0.75μmol/L～0.18 nmol/L浓度范围内,可对抗CCl_4引起的GPT升高。给小鼠连续灌服ASI 12,50 mg/kg或SK 6,20 mg/kg能提高肝微粒体细胞色素P—450活性。此结果表明,黄芪苷是黄芪抗肝毒损伤的有效成分。其机理除抗生物氧化外,尚与代谢调节作用有关。

黄芪根、茎叶黄芪皂苷含量的测定

利用比色法对黄芪根、茎叶黄芪皂苷的含量进行了测定。结果表明:黄芪根中总皂苷含量为0.2616％。黄芪甲苷含量为0.085％;黄芪茎叶总皂苷含量为0.2162％。黄芪甲苷含量为0.052％。黄芪茎叶皂苷可替代根入药。

HPLC-ELSD同时测定当归补血总苷中黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ

目的建立HPLC-ELSD测定当归补血总苷(黄芪、当归)中的黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ的方法。方法色谱柱Kro-mail C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水(37.5∶62.5);体积流量0.8 mL/min;ELSD参数:漂移管温度100℃;N2气流体积流量2.60 L/min。结果黄芪甲苷在0.85～6.76μg之间呈良好的线性关系(r=0.999 2),平均回收率为98.8%,RSD为1.50%。黄芪皂苷Ⅱ在1.05～8.4μg之间呈良好的线性关系(r=0.999 4),平均回收率为95.7%,RSD为2.70%。结论该法精密度、重复性良好,简便、快速、准确,适用于当归补血总苷中黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ的测定。