淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对骨髓基质细胞增殖及成骨能力的影响

目的:探讨补肾药有效成分淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对实验犬骨髓基质细胞(BMSCs)增殖及其成骨能力的影响。方法:抽取犬BMSCs,诱导培养、传至第三代时于培养液中添加淫羊藿苷或黄芪苷Ⅰ使两种药物的终浓度为50 ng/m l。设BMP-2阳性对照和空白对照组,分别于第1至第8天每天测细胞的MTT值,绘制BMSCs生长曲线、观察其增殖情况;于第1、3、6、10、14天检测BMSCs的ALP和OD值,绘制该OD值变化曲线判断ALP的活性。结果:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ预处理后BMSCs的MTT值从第1天至第7天均高于空白对照组;BMSCs分泌ALP的OD值也均高于空白对照组,二者差异有显著性(P<0.05)。结论:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ能促进BMSCs增殖、促进BMSCs合成ALP从而增强其成骨能力。

木犀草素、欧当归内酯A和黄芪皂苷Ⅰ单用及联用对人肝星状细胞株LX-2增殖、活化的影响

目的 探讨木犀草素(Lut)、欧当归内酯A(Lev)和黄芪皂苷Ⅰ(Ast)单用及联用对人肝星状细胞株LX-2增殖、活化的影响。方法 取对数生长期的LX-2细胞,采用噻唑蓝(MTT)法考察Lut、Lev和Ast对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的LX-2细胞增殖的影响、联用比例确定及Lut、Lev和Ast联用对TGF-β1诱导LX-2细胞增殖的影响;应用CalcuSyn软件计算Lut、Lev及Ast联用抑制LX-2细胞增殖的联合指数(CI),分析3者联用类型;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测3者对LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,Lut、Lev和Ast联用摩尔比为1∶1∶10,3者单用及联用对TGF-β1诱导的LX-2细胞增殖均具有抑制作用(P<0.05),并呈浓度依赖性;CalcuSyn软件分析结果显示,3者联用对LX-2细胞的增殖抑制率>15%时CI<1,说明3者联用具有协同增效的作用;Western blot结果显示,Lut、Lev及Ast联用能够显著降低TGF-β1诱导的LX-2细胞中α-SMA蛋白的表达(P<0.01),降低LX-2细胞中TGF-β1蛋白的表达(P<0.05)。结论 Lut、Lev和Ast单用及联用均能抑制LX-2细胞的增殖、活化,3者联用作用更强、具有协同增效的作用,该作用可能与下调肝星状细胞TGF-β1蛋白表达有关。

UPLC/Q-TOF-MS方法测定黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ含量并研究水解对黄芪皂苷类成分的影响

本实验采用UPLC/Q-TOF-MS方法结合多变量统计分析(PCA、OPLS-DA),分析不同批次黄芪饮片碱洗前后黄芪皂苷类成分变化趋势及原因。并对黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ进行含量测定。为以黄芪皂苷类成分作为指标成分进行黄芪饮片及含黄芪中成药质量研究提供了实验依据。本实验采用ACQUITY UPLC C18色谱柱以乙腈-甲酸(1 m L/L)水溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速0.45 m L/min,柱温40℃。使用ESI电离源在正、负离子模式下采集数据,应用Masslynx 4.1质谱工作站软件进行分多变量统计分析(PCA、OPLS-DA)。明确了黄芪饮片供试品制备过程氨水洗涤步骤能够使黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ水解脱乙酰基转化为黄芪皂苷Ⅳ。同时应用UPLC/Q-TOF-MS方法测定了黄芪饮片中黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ含量,该方法简单、快速、重现性较好,可用于黄芪饮片中该三个成分的含量测定。本实验为以黄芪皂苷类成分作为指标成分进行黄芪饮片及含黄芪中成药质量研究提供了实验依据。

黄芪苷抗生物氧化作用的研究

0.02、0.04、0.06mmol ASI和0.008、0.016、0.024mmol SK可对抗远志皂苷的溶血作用,且随剂量的增加而增大。12.5mg/kg ASI及6mg/kg SK,ig每日二次,连续5天,可对抗CCl_4所致死亡。12.5、25mg/kg×d ASI,6、12mg/kg×d SK,ig持续14～16天,可引起昆明种小鼠或C_(57)BL/6小鼠的红细胞内超化歧化酶活性明显增加。12.0mg/kg×d SK、25mg/kg×d ASI持续4天,可使昆明种小鼠或C_(57)小鼠的肝内MDA含量明显下降,GSH含量明显上升。以上结果提示黄芪苷具有抗生物氧化性质,这不仅可能有助于解释黄芪苷对抗CCl_4的毒性作用和远志皂苷的溶血作用,这一基本生化机制,也有助于阐明中医应用黄芪异病同治的原理。

HPLC-CAD分析黄芪甲苷提取过程中黄芪皂苷类成分动态变化

目的采用高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)分析《中华人民共和国药典》黄芪甲苷提取过程中黄芪皂苷类成分的变化情况。方法采用Ecosil C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),以纯水-乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,电喷雾检测器的氮气压力35 psi,高频滤波,量程200 pA,流速1.0 mL/min,进样量10μL,根据黄芪甲苷的主要提取步骤分别制备供试品溶液,测定黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ和黄芪甲苷的含量。结果黄芪中黄芪皂苷Ⅰ和黄芪皂苷Ⅱ的含量较高,黄芪甲苷含量较低。在黄芪甲苷提取过程中,加入氨试液后的供试品溶液中黄芪皂苷Ⅰ和黄芪皂苷Ⅱ含量显著降低,而黄芪甲苷含量显著增加,表明黄芪皂苷Ⅰ和黄芪皂苷Ⅱ转化成黄芪甲苷。结论黄芪甲苷提取过程中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ发生了量变与质变,而黄芪甲苷发生了量变。

黄芪皂苷I对Th1免疫反应的调节效应及机制研究

目的研究黄芪皂苷Ⅰ的免疫调节作用以及作用的分子机理。方法构建丝裂原诱导脾淋巴细胞增殖细胞模型,测定黄芪皂苷Ⅰ对Con A诱导T淋巴细胞增殖和LPS诱导B淋巴细胞增殖反应,构建anti-CD3 m Ab抗体诱导T淋巴细胞增殖,RT-PCR检测黄芪皂苷Ⅰ对IL-2、IFN-γ和T-bet mRNA基因表达。结果黄芪皂苷Ⅰ在30n M显著促进Con A刺激T淋巴细胞增殖,差异有显著性意义(P<0.05);黄芪皂苷Ⅰ体外用药能够显著上调IFN-γ,T-bet的mRNA表达,而对IL-2表达水平无明显影响。结论黄芪皂苷Ⅰ可能特异性激活转录因子T-bet的转录,促进T淋巴细胞增殖和细胞因子的产生。

黄芪皂苷Ⅰ通过抑制足细胞焦亡干预糖尿病肾脏疾病的机制研究

目的探讨黄芪活性成分黄芪皂苷Ⅰ抑制足细胞损伤、改善糖尿病肾脏疾病的作用机制。方法60只雄性db/db小鼠按体质量随机分为模型组、黄芪皂苷Ⅰ低剂量组(10 mg/kg)、黄芪皂苷Ⅰ中剂量组(20 mg/kg)、黄芪皂苷Ⅰ高剂量组(40 mg/kg)及缬沙坦组(10 mg/kg),每组12只;12只db/db同窝对照db/m小鼠作为对照组。灌胃给药8周。透射电子显微镜观察肾脏超微结构;免疫组织化学法、蛋白质印迹法检测肾脏足细胞标志物肾病蛋白(nephrin)的表达情况;酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)含量;蛋白质印迹法检测肾脏组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肾小球出现明显的足细胞丢失、足突融合等现象;肾脏nephrin蛋白表达下降(P<0.05);血清IL-1β、IL-18含量升高(均P<0.05);NLRP3、裂解型Caspase-1(Cleaved-Caspase-1)、GSDMD-N蛋白表达升高(均P<0.05)。与模型组比较,黄芪皂苷Ⅰ给药组肾脏病理损伤得到缓解;Nephein蛋白表达升高(P<0.05);血清IL-1β、IL-18含量下降(均P<0.05);NLRP3、Cleaved-Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达下降(均P<0.05)。结论黄芪皂苷I可能通过抑制细胞焦亡、改善足细胞损伤发挥干预糖尿病肾脏疾病的作用。

高效液相色谱串联电喷雾检测器一测多评法同时测定当归丸中5种皂苷类成分

目的:建立高效液相色谱串联电喷雾检测器一测多评法(HPLC-CAD-QAMS),同时测定当归丸中5种成分黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷IV、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ的含量。方法:采用电雾式检测器(CAD),将漂移管的温度调节至50℃,并将气体的流速调节至50 psi;Agilent SB-C18(150 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱,将A相和B相分别设置为0.1%的甲酸和乙腈,并将流速调节至1.5 ml/min,同时将进样量调节至20μl,最后将柱温调节至40℃。建立黄芪皂苷Ⅱ与黄芪皂苷IV、异黄芪皂苷Ⅱ等4个皂苷成分的相对校正因子(RCF),用RCF计算各指标成分含量,并验证一测多评法(QAMS)的准确度和重复性。结果:色谱峰分离度良好,黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷IV、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ的线性范围分别为7.5~150μg/ml、8.2~164μg/ml、8.3~16.6μg/ml、7.8~156μg/ml、9.8~245μg/ml,平均加样回收率分别为98.1%、98.7%、99.3%、98.6%、99.2%,RSD分别为1.13%、1.66%、0.97%、1.03%、1.01%。黄芪皂苷Ⅱ设定为内参物,对黄芪皂苷IV、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ的相对校正因子分别为0.822、0.549、0.287、0.786,建立的一测多评法检测方法、结果可靠。结论:建立的HPLC-CAD-QAMS法简便、准确,同时测定当归丸中5个指标成分,可用于当归丸的多指标成分质量控制,为当归丸的质量标准研究提供参考。

HPCE同时测定黄芪饮片中3种指标成分的含量

目的建立高效毛细管电泳法(HPCE)同时测定黄芪饮片中黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的方法。方法 40mmol/L硼砂-20mmol/L硼酸-10%甲醇(pH=8.7)为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(75μm i.d.×64.5cm,有效长度56cm)为分离通道,分离电压为20kV,检测波长为206nm,毛细管温度为25℃,压力进样为5kPa×6s。结果 3种指标成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r>0.9900);加样回收率为91.20%～104.40%。结论该方法简单、准确,重复性较好,可用于黄芪饮片的质量评价和控制。

黄芪当归主要活性成分配伍对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

目的观察黄芪当归主要活性成分黄芪甲苷、黄芪皂苷-Ⅰ、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、阿魏酸和芒柄花素配伍对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用。方法以ox-LDL构建HUVECs氧化损伤模型,采用均匀设计实验探讨6种活性成分配伍对氧化损伤HUVECs活性的影响,寻找6种活性成分抗HUVECs氧化损伤的最佳配伍浓度。在此基础上采用药物“敲出/敲入”中药辨识模式,分为正常组、模型组、各药物单用组、各药物敲出组及6种成分配伍组,分别检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、一氧化氮(NO)总含量及一氧化氮合酶(NOS)活性,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,分析各主要成分及其配伍对HUVECs氧化损伤的影响。结果黄芪、当归6种主要活性成分及配伍均可降低LDH漏出率,减少细胞损伤,且黄芪甲苷和毛蕊异黄酮敲出的LDH漏出率升高,提示6种成分均可抑制内皮细胞损伤,其中以黄芪甲苷、毛蕊异黄酮作用较强。黄芪、当归6种主要活性成分及其配伍均能增强NOS活性,且黄芪皂苷-Ⅰ单用可增加NO含量,提示6种成分可增加NOS活性,且黄芪皂苷-Ⅰ可增加NO合成,6种成分配伍作用增强。黄芪甲苷和芒柄花素均可促进细胞增殖,而黄芪皂苷-Ⅰ、阿魏酸可抑制细胞增殖,提示黄芪甲苷和芒柄花素可能是促进细胞增殖的有效物质,而黄芪皂苷-Ⅰ、阿魏酸可能对细胞增殖具有负向调控作用。黄芪皂苷-Ⅰ、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、芒柄花素可降低细胞凋亡率,6种活性成分配伍可增强抗细胞凋亡作用。结论6种活性成分对血管内皮细胞氧化损伤具有保护作用,这些活性成分配伍可增强抗血管内皮细胞氧化损伤,促进血管内皮细胞功能的修复。

市售不同产地黄芪HPLC-DAD-ELSD指纹图谱及同时测定3种成分含量的方法研究

目的采用高效液相色谱法、二极管阵列检测器和蒸发光散射检测器联用技术(HPLC-DADELSD)建立45批不同产地黄芪药材的指纹图谱,并在指纹图谱条件下,同时测定3种黄酮类及皂苷类成分的质量分数。方法采用Phenomenex kinetex@XBC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.02%甲酸水(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,柱温为30℃,进样量为10μL,检测波长为230 nm。蒸发光散射检测器条件:漂移管温度为60℃,载气流速为2.5 L/min。结果建立了45批不同产地黄芪药材的HPLC-DAD-ELSD串联指纹图谱,并确立了HPLC-DAD指纹图谱的22个共有峰,指认了其中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷和毛蕊异黄酮; HPLC-ELSD指纹图谱确立了22个共有峰,指认了其中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮和黄芪皂苷Ⅰ。毛蕊异黄酮葡萄糖苷在126.350~750.812μg/m L、毛蕊异黄酮在162.500~975.000μg/m L、黄芪皂苷Ⅰ在84.230~505.350μg/m L线性关系良好,r>0.999 0,平均加样回收率分别为100.5%、103.2%、98.2%。结论建立的方法简单、准确、可靠,为评价和控制不同产地的黄芪药材质量提供了一定的科学依据。

黄芪皂苷Ⅰ调控PI3K/Akt/NF-κB通路抑制LPS诱导BV-2细胞激活

目的:探讨黄芪皂苷Ⅰ(ASTⅠ)对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞激活的作用及其分子机制。方法:不同浓度的ASTⅠ(25、50、100μmol/L)预处理BV-2细胞2h后,加入LPS(200ng/m L)诱导20h,收集培养基上清及细胞。CCK-8法检测不同浓度的ASTⅠ对BV-2细胞活性的影响;分别采用ELISA和Greiss法检测培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和一氧化氮(NO)的含量;q PCR法检测细胞中CD11b,TNF-α,诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和白介素1β(IL-1β)m RNA水平;Western blot法检测细胞PI3K/AKT/NF-κB信号通路蛋白表达;细胞免疫荧光(ICC)法观察p-NFκB的入核情况。结果:ASTⅠ在不影响BV-2细胞存活率的条件下,能显著抑制LPS诱导BV-2细胞TNF-α和NO分泌的增加(P<0.01)。q PCR结果显示,ASTⅠ能够显著抑制TNF-α,i NOS及IL-1β的m RNA生成(P<0.001,P<0.001,P<0.05),但对BV-2细胞CD11b的m RNA水平无显著影响。同时,ASTⅠ能显著抑制BV-2细胞中LPS诱导上调的i NOS,COX-2蛋白表达。ASTⅠ能够降低LPS诱导的p-NF-κB的核转位作用,并且能够减少LPS引起的PI3K/Akt/NF-κB/IκB蛋白的磷酸化作用。结论:ASTⅠ能够抑制LPS诱导BV-2细胞的大量激活,作用机制可能与其抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。

基于HPLC-PDA-ELSD的炙黄芪特征成分一测多评适用性研究

目的针对炙黄芪中主要指标成分及经蜜炙转化的特征乙酰基成分,建立HPLC-PDA-ELSD测定炙黄芪中6种异黄酮及2种三萜皂苷的分析方法以及6种异黄酮的一测多评(quantitative determination analysis multi-component by a singlemarker,QAMS)法。方法选取毛蕊异黄酮7-O-β-D-葡萄糖苷(CYG)、黄芪皂苷I(AGI)分别为异黄酮和三萜皂苷类成分的内参物,并计算CYG与乙酰毛蕊异黄酮苷(CYA)、芒柄花苷(FMG)、毛蕊异黄酮(CY)、乙酰芒柄花苷(FMA)、芒柄花素(FM)及AGI与乙酰黄芪皂苷I(ATI)的相对校正因子(f_(k/s)),在不同仪器、色谱柱、柱温、体积流量上考察各成分相对校正因子的稳定性与耐用性,比较QAMS法与外标法(ESM)结果差异。结果对来自8个厂家共18批炙黄芪进行检测,PDA检测的6种异黄酮的QAMS法与ESM的结果相近,相对误差绝对值均在5%以内,表明针对异黄酮类成分建立的QAMS法准确性良好,可选用QAMS法与ESM进行质量控制;ELSD检测的2种三萜皂苷的QAMS法与ESM的结果差异明显,相对误差绝对值为0.40%~22.69%,显示针对三萜皂苷类成分建立的QAMS法不适用,应选用ESM进行质量控制。结论建立的炙黄芪中6种异黄酮及2种三萜皂苷的分析方法及6种异黄酮的QAMS法准确可靠,操作简便,可反映黄芪的蜜炙程度,为更加全面地评价炙黄芪质量提供参考,以期提升炙黄芪饮片质量。

遗传神经网络与遗传算法优选黄芪皂苷微波提取工艺条件

目的基于中心组合试验设计(central-composite design,CCD),采用遗传神经网络(genetic neural network,GNN)和遗传算法(genetic algorithm,GA)优选黄芪皂苷类成分的微波提取工艺条件。方法构建黄芪皂苷的HPLC指纹图谱,选择含量较高的7种成分(黄芪皂苷I^V和异黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ),以峰面积代替质量浓度,将通过熵权法计算得到的综合得分作为评价指标。在单因素实验基础上,运用CCD开展实验,构建遗传神经网络以建立提取工艺条件与评价指标之间的定量关系,并通过遗传算法优选微波提取黄芪皂苷成分的最佳工艺参数,并与响应面法优化结果进行比较。结果通过GNN与GA获得的最佳提取工艺条件为提取时间260 s、提取功率695 W、乙醇体积分数50%、液料比21.5,7个皂苷成分的综合得分为1 432.584;响应面分析法获得最佳提取工艺条件为提取时间190 s、提取功率880 W、乙醇体积分数70%、料液比18.5,7个皂苷成分的综合得分为1 066.236;GNN与GA所获提取工艺条件可有效增加综合得分。结论通过熵权法以及遗传神经网络构建黄芪皂苷成分与微波提取工艺条件之间的数学模型是可行的,可为实现中药有效部位多成分提取、分离纯化的工艺优选提供一种新的模式。

UPLC法同时测定甘肃产蒙古黄芪皂苷类成分的含量

目的:建立同时测定甘肃产蒙古黄芪药材中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷含量的方法。方法:采用超高效液相色谱法。色谱柱为Waters Acquity,流动相为乙腈-0.3%甲酸溶液(梯度洗脱);蒸发光散射检测器(ELSD)参数为漂移管温度70℃,喷雾器温度42℃,氮气体积流量2.07 L/min。结果:精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1.22%;黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷的加样回收率分别为100.32%、99.51%、100.57%、100.21%,RSD分别为0.44%、0.39%、1.19%、0.65%。结论:该方法简便、快速,结果准确、可靠,重复性良好,可为甘肃黄芪的质量控制提供依据。

HPLC法同时测定参芪扶正注射液中6种成分的含量

目的：建立同时测定参芪扶正注射液中黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和党参炔苷、芒柄花素含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Ultimate XB-C_（18）,检测器为蒸发光散射检测器,流动相为乙腈-0.5%甲酸（梯度洗脱）,流速为1.2 ml/min,柱温为30℃,进样量为10μl。结果：黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、党参炔苷和芒柄花素检测进样量线性范围分别为0.62-5.67μg（r=0.999 6）、0.78-6.31μg（r=0.999 6）、0.36-3.48μg（r=0.999 7）、0.81-6.72μg（r=0.999 5）、0.82-7.03μg（r=0.999 8）、0.58-6.62μg（r=0.999 7）;定量限分别为1.21、0.15、0.12、0.03、0.12、0.17μg/ml;检测限分别为0.35、0.35、0.04、0.01、0.03、0.04μg/ml;精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈2%;加样回收率分别为95.1%-101.1%（RSD=2.0%,n=9）、95.2%-100.7%（RSD=1.9%,n=9）、95.8%-100.2%（RSD=1.4%,n=9）、96.2%-100.6%（RSD=1.7%,n=9）、96.6%-101.2%（RSD=1.4%,n=9）、95.9%-99.5%（RSD=1.2%,n=9）。结论：该方法操作简便、结果准确,可用于同时测定参芪扶正注射液中黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、党参炔苷和芒柄花素的含量。

补阳还五汤抗脑卒中网络动力学研究

目的基于补阳还五汤抗缺血性脑卒中的超分子“印迹模板”理论中的物质流量平衡原理,建立网络动力学平衡常数模型,阐明补阳还五汤复方抗脑缺血成分-成分作用关系,为中药复方治疗疾病的复杂作用体系提供新思路。方法通过UPLC-MS/MS测定补阳还五汤血药成分及其浓度,研究稳态血药浓度内再次给药对体系的扰动,以网络动力学数学模型为媒介,选取20个有效成分作为模型中的节点,计算补阳还五汤网络动力学平衡常数参数,从而以平衡常数矩阵的方式揭示补阳还五汤成分群在体内的作用关系。结果在构建的平衡常数拓扑网络中,补阳还五汤中10种入血成分对网络有正向调控作用,按作用大小排序为异黄芪皂苷Ⅰ>琥珀酸>刺芒柄花苷>洋川芎内酯H>洋川芎内酯Ⅰ>香草醛>丁烯苯酞>苦杏仁苷>氧化芍药苷>3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷;另10种成分网络有负向调控作用,按作用大小排序为黄芪皂苷Ⅰ>洋川芎内酯C>阿魏酸>羟基红花黄色素A>藁本内酯>胡萝卜苷>洋川芎内酯A>毛蕊异黄酮>芒柄花素>毛蕊异黄酮葡萄糖苷,异黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅰ等成分的作用平衡常数较大。结论在构建的成分-成分间的平衡常数拓扑网络中,异黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅰ等对成分群间的网络影响较大,可能为补阳还五汤治疗缺血性脑卒中的“印迹模板”。

基于化学计量学分析方法黄芪药材质量评价体系的建立

目的采用化学计量学分析方法,建立黄芪Astragalus membranaceus药材质量评价体系。方法收集20批不同产地不同品种黄芪药材,建立皂苷、黄酮类成分特征图谱。运用主成分分析、聚类分析方法深入研究不同黄芪药材中化学成分量的变化趋势及规律。结果 17个特征成分中,黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷ⅣV、芒柄花素和2个未知皂苷成分的差异显著,可作为区分不同产地或不同品种黄芪的关键性指标成分。结论通过化学计量学分析方法,建立的黄芪药材中皂苷、黄酮类成分评价体系专属性强、准确性高,可有效控制和评价黄芪药材质量。

山西恒山地区蒙古传统黄芪和移栽黄芪的质量差异研究

目的比较生长于山西北部恒山及其周边地区的蒙古传统黄芪和移栽黄芪化学成分差异。方法采用~1H-NMR代谢组学技术结合HPLC-UV-ELSD联用技术分别对两种种植模式黄芪的初级代谢物和次级代谢物进行差异性比较。结果从核磁图谱中共指认出25个代谢物,其中甲醇水相中主要为氨基酸和有机酸等初级代谢物,氯仿相中主要为脂肪酸类物质;多元统计结果显示二者的初级代谢物差异不大,但8,2′-羟基-7,4′-甲氧基异黄烷只在传统黄芪中检测到。采用HPLC-UV-ELSD联用技术测定不同黄芪样本中6种黄酮和4种皂苷的量,结果显示传统黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和黄芪皂苷III量显著高于移栽黄芪,而移栽黄芪中黄芪皂苷I的量显著高于传统黄芪,传统黄芪总黄酮量显著高于移栽黄芪,总皂苷量无显著性差异。结论恒山地区蒙古传统黄芪和移栽黄芪差异性主要体现在次级代谢物上,说明不同种植方式对黄芪次级代谢物的积累影响较大,为恒山地区发展优质的传统黄芪资源奠定了基础。

黄芪当归主要活性成分抗血管平滑肌细胞增殖和迁移的作用

目的:研究黄芪和当归6种主要活性成分芒柄花素、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、阿魏酸、毛蕊异黄酮苷单用及其配伍对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖与迁移的影响。方法:以血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导VSMCs增殖,随机分为对照组、模型组、各成分单用组、各成分剔除组、六药配伍组。CCK-8检测VSMCs增殖,流式细胞术检测细胞周期,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫荧光法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)的表达。结果:各成分单用组(除芒柄花素单用组外)、各成分剔除组、六药配伍组均可显著抑制VSMCs增殖、细胞周期转化、PCNA的表达(P<0.05,P<0.01)。与六药配伍组比较,黄芪皂苷Ⅰ剔除组、黄芪甲苷剔除组、毛蕊异黄酮剔除组细胞增殖抑制率显著降低,增殖指数(PI)、PCNA蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);单用黄芪皂苷Ⅰ组、单用毛蕊异黄酮组、单用阿魏酸组、各成分剔除组、六药配伍组均可使细胞迁移降低,α-SMA表达上调,OPN蛋白表达下调(P<0.01),单用毛蕊异黄酮苷组可上调α-SMA表达(P<0.05)。与六药配伍组比较,黄芪皂苷Ⅰ剔除组、黄芪甲苷剔除组、毛蕊异黄酮剔除组均可使细胞迁移率增加,α-SMA表达降低,OPN表达增强(P<0.01);阿魏酸剔除组可使细胞迁移率和OPN表达增加(P<0.01)。结论:黄芪当归主要活性成分配伍对VSMCs表型转化、增殖和迁移的抑制作用强于药物单用,其中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮主要起抑制VSMCs增殖和迁移的作用,阿魏酸起抑制VSMCs迁移的作用,毛蕊异黄酮苷可抑制VSMCs增殖。黄芪和当归主要活性成分配伍的作用可能是通过抑制VSMCs表型转化和细胞周期进程而发挥的。