黄芪菟箭合剂对糖尿病大鼠肾脏足细胞保护作用机制的研究

目的观察中药黄芪菟箭合剂对糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率及其对肾足细胞保护及凋亡相关指标的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导成模的糖尿病大鼠随机分为糖尿病组(DM组)、黄芪菟箭合剂治疗组(CM组)、缬沙坦组(V组);另设正常对照组(CON组)。CM组以10g/(kg·d)灌胃黄芪菟箭合剂、V组以40mg/(kg·d)灌胃缬沙坦。干预12周后,分别检测大鼠的肾/体重比、尿白蛋白肌酐比(ACR)、肌酐清除率(CCR),并以Western blot法检测肾皮质ZO-1、nephrin、caspase-3及NF-κB的蛋白表达。结果DM组的肾/体重比、ACR、CCR均显著高于CON组(P<0.05);CM组和V组的肾/体重比、ACR、CCR较DM组均明显下降(P<0.05),CM组和V组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与CON组比较,DM组的肾皮质ZO-1、nephrin的蛋白表达显著降低(P<0.01),而caspase-3和NF-κB蛋白表达则显著升高(P<0.01)。与DM组比较,CM组及V组的肾皮质ZO-1和nephrin表达量升高,caspase-3及NF-κB表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪菟箭合剂可抑制糖尿病大鼠肾脏高滤过状态、降低尿白蛋白排泄率,其肾保护机制可能与其保护足细胞、抑制足细胞凋亡有关。

黄芪菟箭合剂对高糖诱导的足细胞损伤及凋亡的影响

目的探讨黄芪菟箭合剂(HTD)对高糖诱导足细胞损伤及凋亡的影响。方法体外培养永生化的肾小球足细胞,待足细胞分化完全后,用不同浓度HTD(0.25,0.5,0.75,1,1.25,1.5 mg/ml)刺激足细胞24 h,用乳酸脱氢酶释放法(LDH法)判断细胞的损伤程度,进而筛选HTD的最佳浓度,并观察其对足细胞形态的影响。随机将分化的足细胞分为对照组、高糖组和黄芪菟箭合剂组(HTD组),通过Western blotting和免疫荧光分析检测足细胞标志蛋白Nephrin和ZO-1以及足细胞凋亡相关蛋白Caspase和NF-κB的表达水平。结果HTD的最佳给药浓度为0.75 mg/ml,其不明显改变足细胞形态。与对照组相比,高糖组标志蛋白Nephrin和ZO-1表达水平显著降低(P<0.05),凋亡相关蛋白Caspase和NF-κB的表达显著升高(P<0.05)。而与高糖组相比,HTD组Nephrin和ZO-1表达水平显著升高(P<0.05),而凋亡相关蛋白Caspase和NF-κB的表达显著下降(P<0.05)。结论在糖尿病肾病中,高糖可以诱导肾小球足细胞的损伤,与足细胞的凋亡有关,而HTD可干预高糖刺激所造成的足细胞损伤,并减少足细胞的凋亡。

黄芪菟箭合剂对高糖状态大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其机制探讨

目的探讨黄芪菟箭合剂对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖活性的影响及其可能的机制。方法将雄性SD大鼠随机分为2组,分别以黄芪菟箭合剂及等体积蒸馏水灌胃,以制备含药血清和正常大鼠血清。将大鼠肾小球系膜(HBZY-1)细胞随机分为4组:5 mmol/L葡萄糖+正常血清组(con组),25 mmol/L甘露醇+正常血清组(D-mannitol组),30 mmol/L葡萄糖+正常血清组(HG组),30 mmol/L葡萄糖+含药血清组(HG+HQTJM组)。分别干预24、48、72 h后,应用CCK8法检测各组HBZY-1细胞的增殖活性,Western blot法检测各组HBZY-1细胞内胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ,COLIV)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的蛋白表达变化,real time PCR法检测各组HBZY-1细胞内肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1,IL-1β)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)和蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)的mRNA表达变化,Elisa法检测细胞培养上清中TNF-α和IL-1β的蛋白含量。结果与con组比较,D-mannitol组HBZY-1细胞的增殖和细胞内各成分的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05);HG组干预48h及72h时HBZY-1细胞增殖活性明显增加,细胞内COLIV和FN蛋白表达增加,细胞内炎症因子TNF-α、IL-1β和AKT基因表达明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05),PTEN基因表达水平下降,但差异无统计学意义(P>0.05),细胞培养上清中TNF-α、IL-1β蛋白表达明显增加(P<0.05)。与HG组比较,HG+HQTJM组在干预72h后,可显著抑制HBZY-1细胞增殖(P<0.05),降低细胞内COLIV和FN蛋白的表达;细胞内TNF-αmRNA表达量在干预24h后显著降低(P<0.05),IL-1βmRNA表达量在干预48 h及72 h后均显著降低(P<0.05);在3个干预时间点,HBZY-1细胞内PTEN的基因表达均明显增加,AKT的基因表达明显降低,细胞培养上清中TNF-α及IL-1β蛋白含量明显增加(P<0.05)。结论黄芪菟箭合剂可明显降低高糖状态下HBZY-1细胞的增殖活性,降低HBZY-1细胞内COLIV、FN蛋白的表达,可能与PTEN的激活及PI3K/AKT通路介导的炎症反应受到抑制有关。