黄花苜蓿MfNAC34基因克隆及特性分析

NAC转录因子具有调节植物生长发育和应答非生物胁迫的功能。本研究从内蒙古锡林郭勒草原野生黄花苜蓿材料中克隆获得1个NAC家族蛋白基因MfNAC34(GenBank登录号为MH481768),分析MfNAC34基因编码蛋白的理化性质、亚细胞定位和转录激活特性。结果显示:MfNAC34基因开放阅读框序列为621 bp,编码亲水性蛋白质,分子量为23.52 kD,理论等电点为4.09。MfNAC34为定位在细胞核内的胁迫诱导的转录因子,且转录激活域位于其C端。

呼伦贝尔退化草地接种丛枝菌根真菌对黄花苜蓿生长的影响

将本土草种黄花苜蓿(Medicago falcata)补播呼伦贝尔草甸草原中,能够提高草地生产力和牧草品质,促进退化草地恢复。为解决原位补播黄花苜蓿幼苗生长弱、建植成功率低的问题,本试验以未灭菌的呼伦贝尔退化草地土壤为基质土,当地常用补播物种-黄花苜蓿为研究对象,探究丛枝菌根真菌(AMF)种类及组合对黄花苜蓿幼苗生长的影响。结果表明,黄花苜蓿幼苗的生长受到AMF种类和组合的调控。同时接种摩西斗管囊霉(Funneliformis mosseae)和幼套近明球囊霉(Claroideoglomus etunicatum)显著提高了黄花苜蓿的地下生物量和总生物量,抵消F.mosseae单接种的负效应。共同接种F.mosseae和C.etunicatum活化了土壤速效磷,提高了土壤氮含量,促进了黄花苜蓿根系对铁、钾、镁、锰、磷的吸收,因而促进了黄花苜蓿的生长。因此,在呼伦贝尔退化草甸草原进行黄花苜蓿补播时,同时接种F.mosseae和C.etunicatum可能促进黄花苜蓿幼苗生长,提高建植成功率。

黄花苜蓿MfMYB3R-3基因克隆及结构与功能的生物信息学分析

MYB转录因子是植物中分布最广的转录因子家族之一,在植物响应生物及非生物胁迫,调控逆境胁迫相关基因表达方面起着重要的作用。本研究基于黄花苜蓿转录组数据,鉴定和克隆了黄花苜蓿MfMYB3R-3基因,并进行了生物信息学分析。结果表明,MfMYB3R-3基因CDS区长1701 bp,编码566个氨基酸,具有SANT保守结构域,为MYB3R型转录因子;MfMYB3R-3蛋白化学分子式为C_(2690)H_(4314)N_(796)O_(873)S_(20),理论等电点为8.75,该蛋白是亲水性不稳定偏碱性非分泌蛋白,不具有信号肽,无跨膜结构,亚细胞定位预测在细胞核。系统进化分析发现,黄花苜蓿MfMYB3R-3蛋白与蒺藜苜蓿的MYB3R-3的亲缘关系最近。

基于SNP分子标记的新疆野生黄花苜蓿遗传多样性分析

为揭示新疆野生黄花苜蓿的遗传多样性,研究利用SLAF-seq技术对材料进行SNP开发。结果显示,材料测序平均Q30值为96.32%,平均GC值为37.99%。研究共开发了376 641个SLAF标签,多态性SLAF标签119 331个;SNP平均完整性为24.77%,平均杂合率5.53%。供试新疆野生黄花苜蓿品系的有效等位基因数、观测等位基因数、期望杂合度、观测杂合度和Shnnon Wiener指数的平均值分别为1.380、1.594、0.220、0.117和0.327。研究表明,聚类分析将材料分为7类,PCA将材料分为3类,但样品的来源为同一个祖先。

黄花苜蓿叶片解剖结构对盐碱胁迫的响应

为探讨盐碱胁迫下黄花苜蓿叶片结构的特征变化,揭示解剖结构与其耐盐碱的关系,采用石蜡切片法对龙牧18黄花苜蓿在150 mmol/L NaHCO3和Na2CO3混合盐碱胁迫0、1、6 h和12 h后的叶片解剖结构进行观测,测定叶片的厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度、上表皮厚度、下表皮厚度等,计算栅海比、栅栏组织紧密度和海绵组织疏松度,研究不同盐碱胁迫时间对黄花苜蓿叶片结构的影响。结果表明,盐碱胁迫对黄花苜蓿叶片表皮结构、叶肉组织具有显著影响,盐碱胁迫下龙牧18黄花苜蓿叶片的栅栏组织厚度、海绵组织厚度对叶片厚度起主导作用。对上述指标标准化并进行主成分分析,龙牧18黄花苜蓿盐碱胁迫时提取特征值>1的3个主成分,累计方差贡献率达83.523%。

野生黄花苜蓿胚性愈伤诱导研究

为优化黄花苜蓿胚性愈伤培养条件,本研究以黄花苜蓿(Medicago falcata L.)为试验材料,探讨培养基、外植体、激素浓度以及凝固剂对黄花苜蓿胚性愈伤形成的影响。结果表明,以成熟胚为外植体接种至MS培养基的愈伤块呈淡黄色,质地为粘性且体积较大,该处理下添加1 mg·L^(-1)2,4-D和0.05 mg·L^(-1) KT愈伤诱导率可达95.24%。利用该培养条件进一步探究了凝固剂对愈伤组织诱导的影响,发现培养基中添加6 g·L^(-1)琼脂和7 g·L^(-1)植物凝胶可以有效降低愈伤组织褐化率。因此,诱导黄花苜蓿最适培养基为:以成熟胚为外植体,其成分包括MS培养基,添加1 mg·L^(-1)2,4-D+0.05 mg·L^(-1) KT+6 g·L^(-1)琼脂/7 g·L^(-1)植物凝胶。

苏南大棚春夏番茄—秋甜糯玉米—越冬黄花苜蓿模式

根据苏南地区气候特点及消费习惯推广的大棚春夏番茄—秋甜糯玉米—越冬黄花苜蓿土壤改良栽培模式,可有效改良土壤性状,减轻连作障碍对生产的影响,具有良好的经济效益与生态效益。从茬口安排、品种选择、育苗、田间管理、病虫害防治、采收等方面对该种植模式进行了详细介绍,以供生产者参考。

饱和烷烃处理下紫花苜蓿(Medicago sativa)的转录学特征

为探究紫花苜蓿在石油污染下的耐受机理,采用超声碎促溶的方法,将3种有机物(十二烷、十六烷和二十四烷)配置成质量分数均为1%的混合溶液,模拟饱和烷烃污染对紫花苜蓿幼苗进行处理,分别对污染0,6,24 h的植株取样进行转录组学分析,共获得1431个差异表达基因(DEGs)。GO富集分析表明,这些DEGs主要涉及蛋白结合、代谢途径和催化活性等;KEGG富集分析表明,DEGs主要富集到植物病原体相互作用、MAPK信号通路和光合生物碳固定途径等。qRT-PCR验证转录组结果可靠。研究结果为研究植物降解和耐受原油中饱和石油烃污染机制原理及后续筛选和培育耐石油污染植物提供理论依据。

基于表型性状的新疆野生黄花苜蓿核心种质构建

本研究利用70份新疆野生黄花苜蓿种质的19个表型性状构建新疆野生黄花苜蓿核心种质,设置随机、位点优先和偏离度取样三种取样方法,10%,15%,20%,25%,30%五种取样比例,抽选核心种质。结果表明,70份材料的19个表型性状的平均变异系数为24.05%,平均遗传多样性指数为1.9246;19个农艺性状提取出6个主成分,累计贡献率达74.131%;15个取样策略中,位点优先取样、取样比例为30%时,抽提出的21份核心种质能够较好的保留原始种质的表型性状并有效降低遗传冗余度。因此,本研究简化了育种工作,为提高育种工作效率提供一定的理论支持。

11份新疆野生黄花苜蓿形态学比较及倍性检验

以11份新疆野生黄花苜蓿(Medicago falcata)为材料,在同质园中通过对其形态特征及染色体倍性比较分析,以期为新疆黄花苜蓿资源评价及核心种质构建提供参考依据。通过形态学的测量以及以新疆大叶苜蓿(M.sativa‘Xinjiang Daye’)作为倍性检验的参照材料,使用CyFlow Space流式细胞仪对相关参试材料进行倍性检测。结果表明,11个材料的13个性状之间变异系数为7.62%~19.98%,11个材料之间的变异系数为9.66%~17.22%,平均变异系数为13.56%。聚类分析将11个材料分为5类:其中YM、MNS-2、YW-13份材料各成一类,YM为二倍体材料,叶面积最小,花部性状较好,可以作为杂交育种以及构建新疆野生黄花苜蓿核心种质库的重要材料;MNS-2为四倍体材料,绝对株高最高;YW-1为复合体材料,茎粗及单序小花数最高;其余材料均为四倍体,其中AGXWB和MNS-1聚为一类,此类的特征是具有较长的节间、较多的茎节数以及叶片面积较大;材料BLK、YL、YW-2、FY、JMN、ALT聚为一类。

黄花苜蓿种质资源苗期抗旱性鉴定评价

本研究选择16份黄花苜蓿(Medicago falcata)、1份紫花苜蓿(Medicago sativa)‘中苜1号’和1份杂花苜蓿(Medicago varia)‘阿尔冈金’作为试验材料,采用苗期反复干旱法模拟干旱胁迫,通过11个形态与生理指标变化分析和模糊数学隶属函数法对18份种质抗旱性进行综合评价。结果表明,干旱胁迫后,不同苜蓿种质的株高、叶长、叶宽、地上生物量、CAT、POD活性均出现不同程度下降,下降程度从1%~71%不等;可溶性糖、MDA、ABA、fPro含量均出现不同程度上升,上升程度从9%到65%不等。株高和地上生物量与综合评价D值呈极显著相关关系,叶片相对含水量与综合评价D值呈显著相关关系,这3个指标可作为黄花苜蓿抗旱性评价核心指标。基于综合评价D值,18份苜蓿种质的抗旱性强弱顺序为PI 634112>PI 502445>PI 561456>PI 631635>PI 499666>W621494>PI 325384>PI 634105>PI 502450>PI 502449>PI 491407>PI 440518>PI 440527>PI 384506>PI 325396>‘中苜1号’>‘阿尔冈金’>PI 464765。黄花苜蓿不同种质之间抗旱性存在差异,且染色体倍性对抗旱性存在一定影响。本文筛选出的抗旱材料和鉴定指标可为今后抗旱苜蓿品种的选育提供依据。

不同处理破除新疆黄花苜蓿种子硬实效果的研究

本试验以新疆野生黄花苜蓿为材料,采用机械打磨、变温(高温干燥、低温处理、液氮处理)、浸种(热水、浓硫酸、盐湖水)等方法处理种子,通过分析比较各处理下的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数等指标来探究打破种子硬实的最佳处理方法。结果表明,机械打磨降低硬实率的效果最佳,可以完全破除硬实;100℃热水浸种也可有效降低硬实率,种子发芽率可达70%以上,液氮处理30 min也可提高发芽率至80%;高低温处理、盐湖水浸种等处理能够降低硬实率,但效果不显著;浓硫酸浸种虽然可以完全打破硬实,但处理浓度和时间难以控制,很容易导致种子死亡。综合分析,机械打磨和热水浸种是破除黄花苜蓿种子硬实较为理想的处理方法。

30份新疆野生黄花苜蓿荚果裂荚力数字化评价

本研究以新疆博乐温泉县30份黄花苜蓿(Medicago falcata L.)种质作为试验材料,通过艾德堡HP-50数显推拉力计,结合黄花苜蓿的荚果裂荚率,分析黄花苜蓿荚果水平/竖直放置下的裂荚机械力,为选育新疆地区抗裂荚黄花苜蓿种质提供了一种准确、高效的评价方法。试验结果表明:新疆野生高裂荚黄花苜蓿种质荚果的裂荚机械力极显著低于低裂荚黄花苜蓿种质荚果的裂荚机械力(P<0.01);在水平放置下,黄花苜蓿荚果的裂荚机械力与裂荚率呈极显著相关关系;当荚果水平放置时,机械力大于3.395 N的黄花苜蓿被认为是低裂荚种质,而机械力小于1.885 N的黄花苜蓿被认为是高裂荚种质。研究表明,通过推拉力计测试水平放置下的黄花苜蓿荚果开裂的机械力,可以准确反映新疆野生黄花苜蓿不同种质间的开裂特性,并为黄花苜蓿裂荚特性的标准化测量提供重要参考。

激素对黄花苜蓿扦插成活率及生长的影响

以现蕾期黄花苜蓿的新鲜茎节为扦插条,研究不同激素对黄花苜蓿扦插成活率及生长的影响。结果表明,3种激素处理后黄花苜蓿扦插成活率依次为吲丁萘乙酸>硝钠萘乙酸>萘乙酸,且浓度为1 200 mg/L的吲丁萘乙酸激素处理扦插成活率高达90.83%,且生根率为100%。

盐胁迫对黄花苜蓿发芽及幼苗生长的影响

为了选择适宜松嫩地区轻度盐碱化草地种植的牧草,解决饲草蛋白质含量低的问题,发展耐盐碱的优质豆科牧草是关键。种子发芽和幼苗生长是植物生活史最关键的阶段,决定着植株的后续生长。本实验研究了盐对黄花苜蓿种子发芽和幼苗生长的影响,与紫花苜蓿CW400和紫花苜蓿公农2号对比,在0,20,40,60,80,100,120,140,160,180,200mmol/L浓度NaCl胁迫条件下,研究了3种材料的种子发芽率、发芽指数(Gi),胚根、胚轴生长状况及脯氨酸含量。结果表明,随着盐浓度的升高3种苜蓿的发芽率、发芽指数(Gi)都受到不同程度的抑制,盐浓度越高,抑制作用越明显。与紫花苜蓿CW400及公农2号相比,黄花苜蓿在发芽百分数和发芽指数上显著降低,但是胚根生长不受盐浓度的影响,各处理与对照间没有显著差异。复萌实验结果显示3种苜蓿种子在盐溶液中能够保持活力。紫花苜蓿CW400,黄花苜蓿均在60mmol/LNaCl中达到最大总发芽率100%,但只有黄花苜蓿在所有盐浓度下总发芽率全部达到90%以上,各盐处理间复萌率无显著差异,复萌率最高。脯氨酸作为渗透调节剂在幼苗中能够迅速积累,黄花苜蓿、紫花苜蓿CW400和紫花苜蓿公农2号在100mmol/LNaCl中的脯氨酸量分别是对照的3.1,2.3和1.4倍。黄花苜蓿耐盐性较紫花苜蓿CW400和紫花苜蓿公农2号强,更适合在松嫩草地上种植。

盐、碱胁迫与温度对黄花苜蓿种子发芽的影响

为了探讨盐、碱胁迫与温度交互作用对黄花苜蓿(Medicago falcata)种子萌发的影响,选用两种中性盐(Na Cl、Na2SO4)和两种碱性盐(Na2CO3、Na HCO3),3个温度(10/20℃、15/25℃和25/35℃)处理,测定各因子对种子最终发芽率及发芽速度的影响。结果表明,盐、碱胁迫与温度及其交互作用对黄花苜蓿种子发芽均有显著影响(P<0.05)。黄花苜蓿种子发芽率和发芽速度在10/20℃或15/25℃处理下最高,并且两者之间差异不显著(P>0.05)。随着盐、碱胁迫浓度的增加,种子发芽率和发芽速度降低,且碱性盐的胁迫作用大于中性盐。25/35℃高温显著抑制了各个处理下黄花苜蓿种子发芽,并且加剧了盐、碱胁迫对种子萌发的抑制作用。黄花苜蓿对碱性盐和高p H有一定的耐受性,在25 mmol·L-1的Na2CO3和30 mmol·L-1的Na HCO3处理下均能良好发芽。

野生黄花苜蓿叶肉原生质体培养和植株再生

取野生黄花苜蓿15～20天叶龄的叶片，去掉下表皮，用1％纤维素酶、1％半纤维素酶和0．5％果胶酶的混合液游离原生质体。用改良的MS培养基附加2，4－D、BA和NAA等，在黑暗条件下浅层悬浮培养。培养第4天、第7天和第10天，原生质体分别出现第一次、第二次和多次分裂，在此期间数次加液或换液调节渗透压，直至形成1mm左右的大细胞团，然后转移到附加2，4-D和KT等的MS固体培养基，诱导形成愈伤组织，再经4～5次继代培养，分化成为完整的再生植株。

播量对黄花苜蓿草产量与种子生产的影响

试验以黄花苜蓿为研究对象,在呼伦贝尔草甸草原进行固定行距为30cm的播量试验,探讨了播量对黄花苜蓿草产量及种子产量的影响规律。结果表明：随着播量的增大,黄花苜蓿的草产量、分枝数、每枝小花数、结荚数和种子粒数均呈先增加后减少的趋势。当播量为10.5kg/hm^2时,分枝数与草产量显著（P〈0.05）高于其他处理,且二者之间呈显著正相关（P〈0.05）,回归方程Y=34.06X＋2064;播量为14kg/hm^2时,每枝小花数、结荚数和种子数最多（P〈0.05）,而且结荚数与种子数呈显著正相关（P〈0.05）,回归方程为Y=2.626X-0.241。若在生产过程中同时兼顾草产量与种子产量,最适的播量范围是10.5-14kg/hm^2。

黄花苜蓿种质发芽及早期生长对NaCl胁迫的响应

选取俄罗斯、蒙古国、中国3个地域的7份黄花苜蓿种质,比较其在不同浓度NaCl胁迫下(0.25%、0.50%、0.75%、1.00%、1.25%、1.50%)发芽及早期幼苗生长特性。结果表明,随着NaCl浓度增加所有种质的发芽率、发芽速度及早期幼苗的胚根、胚轴长都显著降低;盐分解除后,未萌发的种子可迅速萌发,但种质间有差异;综合比较,俄罗斯的秋柳、雅酷、达菲耐盐性最强,蒙古国种质次之,我国的锡盟、呼盟、新疆种质对盐最敏感。

二倍体和四倍体野生黄花苜蓿形态特征比较研究

为了解野生黄花苜蓿(Medicago falcataL.)的种质特征与特性,对来自我国新疆、内蒙古和俄罗斯的二倍体和四倍体野生黄花苜蓿的19项形态指标进行比较研究。结果表明:二倍体和四倍体的形态特征存在不同程度差异,其中营养器官的差异比生殖器官显著;二倍体植株的花为桔黄色,茎主要为紫-绿色,叶片明显较四倍体窄小,叶形以倒披针形和线形为主,叶片毛被多为上下密集型;四倍体植株的花主要为黄色,茎多为绿色和紫-绿色,叶片明显较二倍体宽大,叶形以倒披针形和倒卵形居多,叶片毛被多为上面光滑下面稀疏型;四倍体黄花苜蓿与二倍体相比,具有植株高大,生长繁茂,叶片增大等特征;聚类分析可将供试材料明显分为二倍体和四倍体2类,四倍体材料间表现出相似生境的聚类趋势,不同染色体数目间的形态学差异远比相同染色体数目而生境不同材料间的形态差异明显。