黄苓昔对脂多糖诱导的H9C2心肌细胞炎症的保护作用及机制研究

目的探讨黄芩苷对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导的H9C2心肌细胞炎症反应的保护作用及可能机制。方法培养H9C2心肌细胞,用终浓度为10、20、30 μmol/L黄芩苷预处理12 h后,加入终浓度为1 μg/mL的LPS刺激6 h,对照组加入等量的生理盐水,收集细胞样本。CCK-8(The Cell Counting Kit-8)检测细胞活力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)的蛋白表达水平的变化。采用SPSS 23.0统计软件,两组样本比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析检验。结果对照组心肌细胞存活率为(93.67±1.453)%,而LPS刺激组存活率为(60.33±2.603)%。与对照组相比,LPS诱导后H9C2心肌细胞存活率降低(P<0.05)。对照组H9C2心肌细胞IL-6表达量为(49.33±2.42)pg/mL,TNF-a表达量为(86.33±1.85)pg/mL,IL-1β表达量为(28.67±4.66)pg/ml。与对照组相比,LPS诱导后H9C2心肌细胞IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平升高(P<0.05),p-NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-IκBα蛋白水平升高(P<0.05),IκBα蛋白水平降低(P<0.05),而NF-κB p65及p38 MAPK蛋白表达无明显变化(P>0.05)。与LPS组相比,黄芩苷干预组H9C2心肌细胞存活率升高(P<0.05),IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平降低(P<0.05),p-NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-IκBα蛋白水平降低(P<0.05),IκBα蛋白水平升高(P<0.05),而NF-κB p65及p38 MAPK蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论黄芩苷可能通过抑制NF-κB、p38 MAPK的激活来减轻LPS诱导的心肌细胞炎症反应,提高细胞的存活率。

黄苓昔对狼疮鼠肾炎的治疗作用和对滤泡辅助T细胞的调控作用

目的研究黄苓昔对狼疮鼠肾炎的治疗作用和对滤泡辅助T(Tfh)细胞的调控作用方法8只12周龄雌性狼疮鼠按随机数字表法随机分为两组,每组4只.黄苓昔组腹腔注射200 mg/kg黄苓昔每日1次,共治疗4周,对照组注射生理氯化钠溶液治疗结束时.考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白含量,处死小鼠.取出脾脏称重,分离单个核细胞,流式细胞仪检测Tfh细胞比例;取出肾脏行苏木精-伊红染色,评估肾脏损伤情况从上述对照组狼疮鼠脾脏中分离单个核细胞.免疫磁珠分选幼稚性CD4+ T细胞,分3组培养,空白对照组不做处理.诱导组加入10 μg/L IL-21 IL-6和3 μg/L抗CD3及CD28抗体培养5 d,干预组在诱导组基础上同时加入40μmol/L黄苓齐体外培养5d 用50 μg/L佛波酯,750μg/L离子霉素和20 mg/L布雷非德菌素A刺激在上述体系中培养的部分幼稚CD4+T细胞5 h:流式细胞仪检测CD4+CXCR5+PI)-1+绷胞和CDM4+ IL-21+胞比例.采用SPSS20.0进行统计分析.定量资料通过方差分析和Student检验进行组间比较:结果黄苓昔治疗能有效改善狼疮鼠肾脏损伤,黄苓井组尿蛋白含量(1416 土 171)μg/24 h显著低于对照组[(2 623 ± 278)μg/24 h、P =0.022],脾脏中Tfh细胞的比例也低于对照组(12.6%±2.3%比40.2%±1.1%,P= 0.005)。体外黄苓昔能抑制Tfh细胞分化,干预组CD4+CXCR5+PD-1+Tfli细胞比例(13.3%± 0.8%)低于诱导组(17.6%±0.9%. P = 0.04).CD4+IL-21细胞比例(1.0%± 0.4%)亦低于诱导组(2.7%士 0.2%, P < 0.01 )-结论黄苓秆治疗能有效改善狼疮肾炎的损伤.可能与抑制Tfh细胞分化有关.