黄药子醇提物致大鼠肝损伤血清总胆汁酸早期变化研究

目的 :探讨血清总胆汁酸(TBA)作为黄药子醇提物致肝损伤早期敏感标志物的可能性。方法:取Wistar大鼠随机分为对照组和黄药子醇提物组(以下简称黄药子组),黄药子组每天灌胃给予醇提物5 g/kg,对照组灌服蒸馏水,于给药后1 d、7 d、16 d分批处理动物。乌拉坦麻醉动物,取血,测定常规血液生化指标-丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TB)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和文献报道的血清早期敏感指标-总胆汁酸(TBA)的水平,取肝,称重,计算肝脏指数并进行HE染色观察肝组织病理形态学变化。结果:与同时间点对照组相比,黄药子组常规生化指标AST和TB的变化较为明显,AST于给药1d～7d升高(P<0.01),TB于给药7 d有升高的趋势(P>0.05),16 d升高(P<0.01);肝脏指数于给药7d～16d升高(P<0.05或0.01),肝组织病理形态学检查显示16 d开始出现细胞肿大和单细胞坏死。血清早期敏感指标TBA于给药1d、7d、16d升高(P<0.05或0.01),与AST比较,TBA表现出良好的时效关系,较TB变化更早;与同时间点对照组相比,TBA数值的变化倍数均高于AST和TB。结论:TBA可作为黄药子致肝损伤的早期敏感生物标志物之一。

黄药子醇提物肝细胞毒性机制的初步研究

目的研究黄药子醇提物对肝HL-7702细胞生长的抑制作用及细胞乳酸脱氢酶释放率的影响。方法采用MTT法,LDH法进行研究。结果细胞经黄药子醇提物处理24 h、48 h后,测得黄药子醇提物的IC50为20.284,19.453μg/ml,乳酸脱氢酶(LDH)的释放率较小。结论黄药子醇提物的肝毒性可能不是通过破坏其细胞膜造成的。

黄药子醇提物对人肝癌细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨黄药子醇提物对人肝癌细胞SMCC-7721凋亡影响及其机制。方法将SMCC-7721细胞株(购自中国科学院)根据黄药子醇提物的不同浓度分为:空白对照组、低浓度组、高浓度组。药物处理48 h后,以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞程序性细胞死亡因子4(PDCD4)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡变化;平板克隆实验检测细胞增殖;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力,组间比较采用t检验。结果 PDCD4、Caspase-3 mRNA表达空白对照组、低浓度组分别为0.47±0.06、0.45±0.07;1.15±0.12、1.02±0.13,高浓度组为2.38±0.31、2.26±0.28明显高于上述两组(t=6.830、5.140,P<0.05);PDCD4、Caspase-3蛋白表达空白对照组、低浓度组分别为0.51±0.09、0.48±0.08;1.23±0.13、1.18±0.10,高浓度组为2.51±0.28、2.48±0.22,明显高于上述两组(t=6.560、5.890,P<0.05);细胞周期结果显示G0/G1期与S期细胞空白对照组、低浓度组分别为[(53.46±4.32)%、(30.95±3.42)%],[(67.32±5.32)%、(21.49±3.46)%],高浓度组为[(77.12±6.34)%、(14.65±2.72)%],G0/G1期细胞明显高于上述两组(t=5.750、4.230,P<0.05),S期细胞数明显低于上述两组(t=5.280、4.460,P<0.05);高浓度组凋亡率[(22.62±1.24)%]明显高于空白对照组和低浓度组[(3.12±0.63)%、(11.25±0.85)%,t=5.280、4.720,P<0.05];平板克隆实验显示高浓度组细胞克隆形成数[(115.54±14.64)个]明显低于空白对照组和低浓度组[(214.35±18.52)、(171.95±16.83)个,t=5.280、4.760,P<0.05];穿膜细胞数高浓度组为(87.63±15.76)个,明显低于空白对照组和低浓度组[(208.36±23.72)、(122.46±21.42)个,t=6.870、6.150,P<0.05]。结论黄药子醇提物调高PDCD4、Caspase-3表达,抑制SMCC-7721细胞的增殖,促进细胞凋亡。

黄药子醇提物的小鼠急性毒性试验

目的探讨黄药子醇提物对小鼠急性毒性的影响。方法按Bliss法设计试验,对小鼠单次灌胃途径给药,观察14d内小鼠的毒性反应和死亡情况,以小鼠急性死亡率为指标,测定黄药子醇提物对小鼠LD50和LD50的95%的可信限。结果黄药子醇提物单次灌胃给药的LD50为9.32 g/kg(相当于饮片58.81 g/kg),约为临床成人剂量的411.55～274.43倍。灌胃黄药子醇提物不同剂量后,多数动物出现消瘦,竖毛,呼吸急促,精神萎靡等异常反应;1～3d之内死亡的小鼠数(23只)超过整个急性毒性试验小鼠死亡数(33只)的50%;观察期内给药组小鼠剖检后肉眼可见肝脏肿大和不同程度的颜色不均、偏黄、纹理粗糙,其他器官肉眼观无明显异常发现;观察期末(第14d)各给药组存活小鼠剖检各脏器未见明显异常。结论在本实验条件下,黄药子醇提物小鼠中毒可能为急性中毒,对小鼠急性毒作用的靶器官为肝,并呈现一定的量-毒关系。