靶向亲和-液相色谱-质谱联用技术快速筛选黄藤总生物碱中乙酰胆碱酯酶抑制剂

采用靶向亲和-液相色谱-质谱联用技术(Target molecule affinity-LC-ESI-MS^n)快速筛选黄藤总生物碱中能够抑制乙酰胆碱酯酶活性的成分,共筛选出12种具有潜在抑制乙酰胆碱酯酶的活性成分,并鉴定了6种成分,分别为黄藤素(Palmatine)、小檗碱(Berberine)、药根碱(Jatrorrhizine)、巴马汀红碱(Palmatrubine)、7,8-二氢-8-羟基小檗碱(7,8-Dihydro-8-hydroxyberberine)、Groenlandicine,结合体外酶学实验对这6种化合物进行了活性验证实验。结果表明,黄藤素抑制活性最强,其抑制作用强于阳性对照药盐酸多奈哌齐,说明黄藤素具有开发成抗阿尔茨海默症药物的潜力。本方法简单、快速、准确地从复杂的中药提取物中筛选出具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的成分,适用于复杂体系中的高通量筛选。

黄藤总生物碱抗抑郁作用研究

通过体外皮质酮诱导的HT22细胞损伤实验和慢性不可预见性应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)刺激小鼠建立CUMS模型实验,探讨黄藤总生物碱抗抑郁作用及作用机制。在细胞水平实验中,采用皮质酮对HT22细胞进行损伤,利用CCK-8法检测细胞活力,Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡情况。整体动物水平实验,将C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组、黄藤总生物碱低(100 mg·kg^(-1))、中(200 mg·kg^(-1))、高(400 mg·kg^(-1))剂量组及阳性药组,采用CUMS刺激21 d,建立CUMS模型。利用行为学评价和Morris水迷宫实验评价小鼠的抑郁行为,ELISA法检测血清中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、多巴胺(dopamine,DA)及去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)含量。利用Western blot法考察HT22细胞及小鼠海马内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果显示,黄藤总生物碱对皮质酮诱导的HT22细胞损伤具有改善作用,并呈剂量依赖性。Hoechst 33258染色实验中,与模型组相比,黄藤总生物碱组减少了蓝色亮点,改善了皮质酮造成的凋亡现象。动物实验结果表明,与模型组相比,黄藤总生物碱显著改善了小鼠的抑郁样行为,提高了血清中5-HT、DA及NE的含量。Western blot结果显示,与模型组比较,黄藤总生物碱显著提高了Bcl-2蛋白的表达,降低了Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达。以上结果说明黄藤总生物碱具有显著的抗抑郁作用,其作用机制可能与调控凋亡相关蛋白或增加脑内单胺类神经递质的含量有关。

黄藤总生物碱固体分散体在小鼠体内吸收的药代动力学及相对生物利用度

以黄藤素和药根碱为测定指标,研究黄藤总生物碱固体分散体(SD)在小鼠体内的吸收药代动力学情况,为其进一步开发利用提供科学依据。选取SPF级昆明小鼠80只,分为2组,分别灌胃黄藤总生物碱原药与黄藤总生物碱固体分散体,剂量均为0.2 g/kg,共设12个采血点,每个采血点的小鼠样本量为3只,所有血样用高氯酸除蛋白、离心,采用高效液相色谱法测定血清中黄藤素和药根碱的含量,用DAS2.0进行房室模型拟合,并计算二者的吸收药代动力学参数与相对生物利用度。结果表明:原药组中黄藤素与药根碱的峰浓度(C_(max))分别为1.28±0.18,0.95±0.07 mg/L;达峰时间(t_(max))均为45 min;药时曲线下面积(AUC)分别为331.85±48.46,263.12±23.28 mg/(L·min),SD组中黄藤素与药根碱的C_(max)分别为1.75±0.05,1.15±0.13 mg/L;t_(max)均为30 min;AUC分别为428.60±47.25,287.50±8.57 mg/(L·min),SD组中的黄藤素的相对生物利用度为129.15%,药根碱的相对生物利用度为109.27%。表明黄藤总生物碱制成固体分散体后能有效提高黄藤素与药根碱的相对生物利用度。

黄藤中巴马汀与药根碱在大鼠体内药动学及口服生物利用度的研究

该文通过灌胃和尾静脉2种方式对大鼠给予黄藤总生物碱,采用RP-HPLC测定大鼠血浆中巴马汀与药根碱的浓度变化后,通过3P97软件计算巴马汀与药根碱的药代动力学参数和口服生物利用度。大鼠经灌胃与尾静脉2种方式给予黄藤总生物碱60 mg·kg^(-1)后,测得的主要药代动力学参数如下:灌胃给药组中巴马汀和药根碱的Cmax分别为(0.91±0.06),(0.70±0.08)mg·L^(-1),tmax分别为(35.24±0.83),(47.76±1.24)min,t1/2分别为(187.03±1.53),(105.64±16.99)min,AUC分别为(280.30±18.69),(144.36±1.06)mg·min·L^(-1);静脉注射给药组中巴马汀和药根碱的t1/2分别为(172.18±12.38),(147.26±1.82)min,AUC分别为(2 553.14±214.91),(328.83±10.81)mg·min·L^(-1)。巴马汀的口服生物利用度为10.98%,药根碱的口服生物利用度为43.90%。