分离鉴定黄连花薹的差异性成分并测定其中4个成分的含量

目的采用薄层鉴别法与高效液相色谱法对比寻找出黄连药材与黄连花薹中含量最大的差异性成分,并对其进行鉴定;同时建立一测多评法测定黄连花薹中4个化学成分的含量。方法采用聚酰胺柱层析等分离纯化手段对黄连花薹与黄连药材差异性成分进行提取、分离、纯化,并采用液质联用以及核磁鉴定的方法对差异性成分进行确证;采用资生堂C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),检测波长为340 nm,柱温为40℃,流速为1.0 mL·min^(-1),进样量为10μL,流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸(每1000 mL加入20μL三乙胺)(B),梯度洗脱。以盐酸小檗碱为内标物,计算其他3个成分的相对校正因子,建立用一测多评法和常规外标法测定黄连花薹中4个化学成分的含量,并对两种方法的含量测定结果进行比较。结果分离鉴定出黄连花薹与黄连药材的差异性成分蒙花苷,同时在各自的线性范围(r>0.9999)内,芦丁、绿原酸、蒙花苷的相对校正因子分别为2.5704、2.4532、1.7700。6批黄连花薹一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异,但大大提高了检测的效益,节约了检测成本。结论分离鉴定出黄连花薹与黄连药材的差异性成分蒙花苷,同时建立的一测多评法测定结果准确,可用于黄连花薹的定量分析及质量控制。

黄连花薹提取液的降血脂作用

目的研究黄连花薹提取液对高脂血症大鼠血脂的影响。方法采用高脂饲料致大鼠高脂血症模型,研究黄连花薹提取液对血脂的影响。结果黄连花薹提取液可使高脂血症大鼠的TC、TG、LDL-C水平降低(P<0.01),HDL-C升高(P<0.01),并有效降低动脉硬化指数TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C,降低腹腔脂肪和肝脏粗脂肪重量(P<0.05)。结论黄连花薹提取液具有显著降低高脂血症大鼠血脂的作用。

黄连花薹润肠通便功能研究

采用动物实验对不同剂量(500、1000、2000mg·kg^(-1))的黄连花薹提取物对小鼠便秘模型的通便效果进行观察,发现在不影响小鼠正常生长的情况下,黄连花薹中高剂量组能够显著缩短首便时间,增加黑便数量和质量,增加墨汁推进率,说明黄连花薹具有润肠通便的功能。

Q-marker思路下的黄连花薹抗菌作用及机制研究

目的 基于Q-marker思路探究黄连花薹的抗菌活性和机制,在此基础上探讨中药质量标志物与药物整体的作用机制的异同的确定原则。方法 采用二倍稀释法测定黄连花薹提取物和盐酸小檗碱对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草芽胞杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并通过菌体的胞外可溶性蛋白质含量、胞外核酸相对含量和电导率的测定研究其抗菌机制。结果 黄连花薹和盐酸小檗碱对3种细菌抗菌作用有差异,其中黄连花薹提取物对金黄色葡萄球菌的抗菌效果最好,MIC为12.5 mg/mL,MBC为25 mg/mL;盐酸小檗碱对枯草芽胞杆菌的抗菌效果最好,MIC为0.25 mg/mL,MBC为2.0 mg/mL。在盐酸小檗碱和黄连花薹提取物的作用下胞外可溶性蛋白质含量、胞外核酸相对含量及电导率增加。结论 黄连花薹及盐酸小檗碱对3种致病菌具有较好的抗菌活性,其作用机制相同,均通过对细菌细胞膜造成损伤增加其通透性,使菌体物质大量外渗,从而达到其抗菌活性。

黄连花薹HPLC指纹图谱的建立及其抗氧化和抑菌作用谱效关系研究

目的:建立黄连花薹的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并研究其与抗氧化和抑菌作用的谱效关系。方法:以14批不同产地的黄连花薹为对象,采用HPLC法测定。色谱柱为Supersil C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,检测波长为329 nm,进样量为10μL。采用《中药指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)建立14批黄连花薹的指纹图谱并进行相似度评价和共有峰指认。以DPPH自由基清除率和羟自由基清除率为抗氧化作用指标,以相对抑菌活性(大肠埃希菌)为抑菌作用指标,利用SPSS 21.0软件对黄连花薹共有峰与上述两种药效指标进行Pearson相关性分析,建立谱效关系模型,并进行验证。结果:黄连花薹的HPLC指纹图谱中共得到7个共有峰,相似度均不低于0.916,并指认5号峰为盐酸小檗碱。7个共有峰均与DPPH自由基清除率呈正相关;1~3、4、6、7号峰与羟自由基清除率呈正相关,5号峰与羟自由基清除率呈负相关;5号峰与相对抑菌活性呈正相关。经验证,黄连花薹样品的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、相对抑菌活性的预测值与测量值的相对误差为0.92%~14.5%。结论:所建立的谱效关系模型可用于黄连花薹抗氧化、抑菌作用的评价;1、2、3、4、6、7号峰所代表化学成分是黄连花薹抗氧化作用的物质基础,盐酸小檗碱是其抑菌作用的物质基础。

基于综合评分和聚类分析的不同海拔、生长年限及干燥加工方法的黄连花薹的品质评价

目的:对不同海拔、生长年限及干燥加工方法的黄连花薹进行品质评价,为其开发利用及质量控制提供参考。方法:分别采用紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法测定24批不同产地、不同生长年限及不同干燥加工方法的黄连花薹样品(S1~S24)中总黄酮和盐酸小檗碱的含量。以总黄酮和盐酸小檗碱含量为指标,并兼顾以干燥加工时间较短为优,分别对总黄酮含量、盐酸小檗碱含量、干燥时间标准化值赋予权重比例为30、40、30,计算其综合评分,对24批样品进行品质评价。以总黄酮和盐酸小檗碱含量为变量,应用SPSS 19.0统计学软件对24批样品进行聚类分析。结果:海拔为1200 m左右、生长年限在4年及以上的黄连花薹综合评分较高(84~94分),采用梯度干燥方法所得黄连花薹的综合评分普遍高于其他干燥加工方法所得样品。聚类分析结果显示,S1~S4、S9、S10、S13~S18聚为一类,其余12批聚为一类,与综合评分法分析结果基本一致。结论:不同海拔、生长年限及干燥加工方法对黄连花薹的品质均有一定影响,其中以海拔为1200 m左右、生长年限在4年及以上、梯度干燥法加工的样品为优。

黄连花薹复配茶的研制

为了开发一款以黄连花薹和红茶为主要原料的复配茶,本文以感官评分、α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的总抑制率为评价指标,对黄连花薹与红茶配比、过筛目数、冲泡时间、冲泡温度、茶水比和冲泡次数6个因素进行单因素试验,确定复配茶的最佳工艺。结果表明,复配茶的制备工艺为黄连花薹和红茶的配比2∶3,过筛目数20目,冲泡时间5 min,茶水比3∶200,冲泡温度80℃,冲泡次数最多不超过2次。

黄连花薹固体饮料的制备工艺研究

以黄连花薹为原料,初步探索其固体饮料的制备工艺.以盐酸小檗碱转移率、总黄酮转移率与浸膏得率的综合评分为指标,采用正交试验法对黄连花薹提取工艺进行优化;采用感官评价法选择适宜的矫味剂来确定黄连花薹固体饮料的最适食用口感.结果显示,优选提取工艺为加18倍量水,提取3次,每次0.5 h;以黄连花薹提取物∶脱脂奶粉∶木糖醇∶可可粉=1∶4.5∶9.5∶0.7为最佳配方比例.结果表明,将黄连花薹制备成固体饮料的工艺稳定可行,可为进一步开发和利用黄连这一传统中药资源提供参考.

黄连花薹及其生物碱的急性与亚急性毒性研究

为调查黄连花薹作为可食用资源的安全性,开展了黄连花薹及其主要生物碱的急性毒性和亚急性毒性试验。在急性毒性试验中,用20000 mg/kg黄连花薹提取物和743.2 mg/kg生物碱混合物分别灌胃KM小鼠,14 d内未发现任何毒性反应且无动物死亡现象。在亚急性毒性试验中,以500、1000、2000 mg/kg 3个剂量的黄连花薹提取物及37.16 mg/kg的生物碱混合物分别灌胃SD大鼠28 d,对照组和各处理组的动物体重和器官相对质量没有显著性差异,生化、血液和尿液指标检查均在正常范围内,主要脏器无病变,而且未观察到动物死亡现象。上述实验结果证明了黄连花薹作为药食同源原料的安全性。

不同来源黄连花薹的自由基清除活性及其物质基础

为了研究不同来源黄连花薹的自由基清除活性及其物质基础,对不同来源黄连花薹(湖北省利川市味连、重庆市石柱县味连、四川省洪雅县雅连和云南省福贡县云连)乙醇提取物中总酚、总花青素、总生物碱、总黄酮及蒙花苷的含量进行检测,对其清除DPPH自由基(DPPH^(•))、ABTS自由基(ABTS^(•+))和超氧阴离子自由基(O_(2)^(•-))的活性进行分析。结果表明:总酚与总黄酮含量以雅连花薹乙醇提取物中最高,分别为118.26±7.07 mg/g(以没食子酸计)和78.39±4.92 mg/g(以芦丁计);总花青素与总生物碱含量以云连花薹乙醇提取物中最高,分别为9.83±2.00 mg/g(以儿茶素计)和86.46±0.38 mg/g(以盐酸小檗碱计);利川味连与石柱味连花薹中总生物碱含量间无显著性差异(P>0.05)。不同来源黄连花薹乙醇提取物对DPPH^(•)、ABTS^(•+)和O_(2)^(•-)的清除活性由强到弱依次为:雅连花薹、石柱味连花薹、利川味连花薹及云连花薹。蒙花苷对DPPH^(•)、ABTS^(•+)和O_(2)^(•-)的清除活性均较低,分别为4.88%~5.54%、12.17%~16.82%和11.37%~12.21%。分子对接结果表明,影响蒙花苷清除自由基活性的主要原因是蒙花苷给电子能力较弱,推测这是蒙花苷对3种自由基的清除活性贡献率较低的内在原因。

重庆市石柱县黄连及其种植土中金属元素含量测定结果分析

目的:了解重庆市石柱县不同品种(种植、野生)、不同生长年限黄连及其种植土中金属元素的含量。方法:用火焰原子吸收光谱法测定样品中铁(Fe)、锰(Mn)、锌(Zn)、铅(Pb)、钙(Ca)、铜(Cu)、铬(Cr)和镉(Cd)8种金属元素的含量。结果:黄连样品中金属元素含量Ca>Mn>Fe>Zn>Cu>Pb>Cd>Cr。黄连中金属元素含量与国家标准中对中药材重金属限量指标比较,Pb、Cu差异有统计学意义(P<0.05)。黄连与黄连花薹中金属元素含量比较,Fe、Mn、Zn、Ca差异有统计学意义(P<0.05),其中黄连中Mn、Zn含量更高,黄连花薹中Fe、Ca含量更高;黄连与种植土中金属元素含量比较,Fe、Zn、Pb、Ca、Cu差异有统计学意义(P<0.05),其中黄连中Zn、Ca、Cu含量更高,种植土中Fe、Pb含量更高;种植与野生黄连中金属元素含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:黄连与黄连花薹,种植与野生黄连中金属元素含量一致。种植土、黄连、黄连花薹中金属元素含量受地质因素的影响。

黄连花薹保健袋泡茶的研制

为了开发利用黄连花薹这一食品新资源,研究了用黄连花薹、甜茶和杭白菊制作具有保健功能袋泡茶的方法,并通过正交试验确定了黄连花薹、甜茶和杭白菊的最佳配比为90∶2∶20。

基于次生代谢产物和网络药理学探索黄连及黄连花薹抗菌作用的物质基础及机制差异

目的:基于次生代谢产物与网络药理学探讨黄连及黄连花薹抗菌作用机制差异。方法:基于超高液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)检测平台,自建黄连及黄连花薹次生代谢产物数据库(MWDB),通过代谢物信息公共数据库以及多元统计分析相结合的手段研究了黄连花薹和黄连的次生代谢组差异,筛选含量相对较高的黄连花薹18个代谢产物和11个黄连代谢产物,借助BATMAN-TCM数据库获取成分作用靶点,于UniProt数据库中查询靶点对应的基因。通过GeneCards检索抗菌基因,使用Venny平台获得成分和抗菌的交集基因。通过DAVID进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,预测其作用机制,并通过GraphPad Prism软件和OmicShare数据库绘制柱状图及高级气泡图使结果可视化。通过STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,Cytoscape 3.7.2软件构建成分-靶标-通路网络,对网络药理学分析结果对比二者抗菌差异性。结果:通过网络药理学得到黄连发挥抗菌有效活性成分比黄连花薹少5个,抗菌靶点比黄连花薹多55个;预测黄连和黄连花薹对抗菌作用的共同成分为槲皮素和小檗碱;参与抗菌作用的不同关键基因有p38丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14),过氧化氢酶(CAT);涉及的不同关键通路有疟疾及Toll样受体信号通路。结论:黄连与黄连花薹主要通过多靶点、多通路的方式发挥抗菌作用,可为黄连和黄连花薹抗菌机制研究提供新的思路和线索,同时为黄连花薹资源的综合开发和合理应用提供了新的发展方向。

黄连花薹化学成分和药理作用的研究进展

传统中药材黄连因其含有黄连素、黄连碱、黄藤素、药根碱等生物碱类,黄酮类和酚类活性物质,而具有清热解毒、抗炎抗病毒、降血糖血脂血压、保护胃肠道、抗肿瘤等作用。近些年体内和体外研究发现,黄连花薹与黄连具有相似的化学活性物质,在体内外具有广泛的药理作用。本文就近几年黄连花薹的化学成分和药理作用做一综述,为黄连花薹的综合开发和合理应用提供思路。

黄连花薹化学成分的UPLC-Q-Orbitrap HRMS鉴定

目的:应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)分析黄连花薹中的化学成分。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱(0~15 min,10%~22%B;15~20 min,22%B;20~25 min,22%~44%B;25~35 min,44%~50%B;35~40 min,50%~60%B;40~55 min,60%~85%B),流速0.15 mL·min^(-1),进样量3μL,柱温30℃。高分辨质谱采用电喷雾离子源(ESI),正、负离子切换模式扫描,扫描方式为全扫描/数据依赖二级扫描(Full MS/dd-MS^(2))。经高分辨质谱采集的数据运用Compound Discoverer 3.0软件进行分析,根据化合物的精确相对分子质量、色谱保留时间、特征离子碎片信息,并结合数据库(mzCloud,mzVault,ChemSpider,中药成分高分辨质谱数据库OTCML),相关文献和对照品信息比对后鉴定黄连花薹中的化学成分。结果:共鉴定出51个成分,包括生物碱类16个、黄酮类14个、苯丙素类7个、有机酸类7个和其他类7个,其中10个成分[小檗碱、巴马汀、黄连碱、芦丁、槲皮素、异槲皮苷、绿原酸、隐绿原酸,D-(-)奎尼酸和D-脯氨酸]经与对照品比对后准确鉴定。结论:该方法可准确分析黄连花薹中的化学成分,41个成分首次在黄连花薹中报道,6个生物碱类成分首次在黄连植物中发现。该研究可为黄连花薹的质量评价和药效物质基础研究提供方法学参考和实验依据,并为其后续的资源开发奠定基础。

反相高效液相色谱法及紫外-可见分光光度法测定黄连花薹的含量

目的 建立黄连花薹含量测定的方法。方法 采用紫外-可见分光光度法,以芦丁为对照品,在波长为500 nm处测定总黄酮的含量;采用反相高效液相色谱法,Supersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(50∶50)(每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4 g,再以磷酸调节pH值为4.0),检测波长为345 nm,测定盐酸小檗碱的含量。结果 芦丁在8.0~48.0μg·mL-1范围内,浓度与吸光度呈良好的线性关系(R2=0.999 6),平均回收率为99.80%,RSD为2.44%(n=6);盐酸小檗碱在26.74~160.44μg·mL-1范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系(R2=0.998 7),平均回收率为97.57%,RSD为1.68%。结论 紫外-可见分光光度法测定总黄酮的含量及反相高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量的方法,具有分析速度快、灵敏度高、重现性好的特点,该方法可为黄连花薹以及其加工产品提供一种较好的质量控制方法。

基于肠道菌群新靶点的中药防治糖尿病研究进展

糖尿病已成为威胁人类生命健康的第3大杀手,其发生发展与肠道菌群失调引起的系列变化密切相关。因此调整肠道菌群结构成为治疗糖尿病的新思路。中药防治糖尿病取得了较好疗效,改善肠道菌群结构可能是其重要机制之一。对基于肠道菌群新靶点的中药单体成分(小檗碱、根皮苷、大黄酸等),中药单方(肉桂精油、黄连花薹、前胡总香豆素等)和中药组方(葛根芩连汤、升降散、补中益气汤等)防治糖尿病研究进展进行综述,为糖尿病防治药物的开发及防治方法与思路提供参考。