黄连解毒汤有效成分的提取及其对体内白色念珠菌的清除作用

试验旨在研究黄连解毒汤有效成分的提取及对其体内白色念珠菌的清除作用。分别采用水煎煮和乙醇回流提取法,随后乙醇提取物用3种不同极性的有机溶剂萃取(正丁醇、乙酸乙酯、石油醚),以最小抑菌浓度为指标优化出最佳抑菌效果的提取工艺;观察给药前后系统性感染白色念珠菌小鼠肾脏、肝脏的真菌负荷量及活性氧(ROS)含量水平的变化,并检测血清中细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、白细胞介素-1β前体(pro-IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果显示,黄连解毒汤抑菌效果最优的提取工艺为:料液比1∶30,乙醇浓度60%,温度80℃,提取时间1 h,提取次数2次,测得乙酸乙酯萃取物MIC 90为0.3125 mg/mL。与模型组相比,黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(EAHD)高剂量组能显著降低小鼠肾脏真菌负荷量(P<0.05),完全治愈率达40%,并明显高于氟康唑组;EAHD低、中和高剂量组(50、100及200 mg/(kg·d))均能显著降低肝脏真菌负荷量(P<0.05),其中中剂量组和氟康唑组降低肝脏真菌负荷量效果接近。同时EAHD高剂量组能显著或极显著降低感染后小鼠肾脏和肝脏ROS含量(P<0.05;P<0.01);显著或极显著提高血清中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量(P<0.05;P<0.01),同时降低pro-IL-1β含量。综上所述,通过优化后的提取工艺得到的EAHD具有降低模型小鼠肾脏和肝脏ROS含量和调控炎症因子的作用,进而降低炎症反应,起到保护组织和抵抗白色念珠菌的作用。

黄连解毒汤乙酸乙酯提取物抑制白念珠菌菌丝的形成

目的:探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Huanglian Jiedu decoction,EAHD)对白念珠菌菌丝形成的影响。方法:以0,78,312,1 250 mg·L-1EAHD干预白念珠菌6 h,采用倒置显微镜、荧光显微镜及扫描电镜分别观察白念珠菌菌丝形态;固体培养基上观测菌落形态;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测白念珠菌菌丝形成相关基因HWP1,ALS3,UME6,SUN41,CSH1,Ca PDE2的表达量。结果:312,1 250 mg·L-1EAHD可显著抑制白念珠菌菌丝的形成及菌落的形态;qRT-PCR检测显示1 250 mg·L-1EAHD使HWP1,ALS3,UME6,CSH1表达分别下调4.13,3.64,2.46,2.75倍,SUN41表达上调7.26倍,Ca PDE2表达无变化。结论:EAHD可能通过抑制HWP1,ALS3,UME6,CSH1等相关基因的表达来抑制白念珠菌菌丝的形成。

黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对白假丝酵母菌黏附作用的影响

目的探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Huanglianjiedu decoction,EAHD)对白假丝酵母菌黏附作用的影响。方法 XTT法检测白假丝酵母菌黏附力;平板法计数导管上黏附的白假丝酵母菌CFU;倒置显微镜观察黏附的白假丝酵母菌;qRT-PCR法定量检测黏附相关基因EAP1、HWP1、ALS1、ALS3、MP65的表达。结果 312μg/mL EDHA可显著抑制白假丝酵母菌在聚苯乙烯和聚酯导管上的黏附;白假丝酵母菌生长早期在EDHA作用下,菌细胞出芽数均呈现剂量依赖性降低;EDHA作用后,EAP1、HWP1均下调,ALS3、MP65均上调,ALS1几乎未变化。结论 EAHD可显著抑制白假丝酵母菌的黏附作用。

黄连解毒汤高效液相色谱分析方法的建立

黄连解毒汤由黄连、黄芩、黄柏、栀子四味中药组成,主要包含生物碱类(黄连、黄柏),黄酮类(黄芩)和环烯醚萜类(栀子)三大类成分,其理化性质差别较大,在分别进行高效液相色谱(HPLC)分析时适用的流动相差别较大。本文比较了不同浓度的甲酸-三乙胺流动相添加剂对黄连解毒汤水提取物高效液相色谱(HPLC)分析的影响,提出了一种稳定、重复的HPLC分析方法:柱子为HypersilODS2色谱柱(250×4.6mmi.d,5μm),流动相组成为0.3%(V/V)甲酸-0.3%(V/V)三乙胺的水溶液与0.3%(V/V)甲酸-0.3%(V/V)三乙胺的乙腈溶液,检测波长260nm。这种方法能够同时分析复方中的生物碱类、黄酮类和环烯醚萜类物质,为类似的成分复杂中药提取物的分析提供了参考。

黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对光滑念珠菌黏附作用的影响

目的:探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Huanglian Jiedu decoction,EAHD)对光滑念珠菌Candida glabrata黏附作用的影响。方法:采用二倍稀释法测定黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对光滑念珠菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);采用XTT还原法评价EAHD对光滑念珠菌黏附作用的影响;利用倒置显微镜、扫描电子显微镜与荧光显微镜观察EAHD对光滑念珠菌早期黏附形态学影响;采用半定量与实时荧光定量PCR检测其黏附相关基因EPA1,EPA6和EPA7的表达量。结果:EAHD对光滑念珠菌的MIC为320 mg·L-1,阳性对照药氟康唑对光滑念珠菌的MIC为1 mg·L-1;EAHD对光滑念珠菌2,4 h的黏附的干预作用较明显,其中对4 h效果优于2 h;PCR结果显示EAHD可显著抑制EPA1,EPA6和EPA7的表达。结论:EAHD可能通过抑制光滑念珠菌部分黏附基因的表达而抑制其早期黏附。

黄连解毒汤主要成分的含量测定

测定黄连解毒汤提取物中黄芩苷、小檗碱和京尼平苷的含量,以进一步完善质量标准。制备黄连解毒汤总提取物、总生物碱、总黄酮和京尼平苷,高效液相色谱法进行总提取物、总生物碱、总黄酮中主要成分的定量分析和分离制备的主要成分的纯度标定。结果黄连解毒汤总提取物的黄芩苷含量为6.32%-6.53%,黄连解毒汤总提取物的小檗碱含量为6.02%-6.10%,黄连解毒汤总提取物的京尼平苷含量为5.36%-5.60%,生物碱中的小檗碱含量为68.21%-70.44%,京尼平苷的纯度标定99.70%-99.73%,总黄酮中的黄芩苷含量为96.09%-98.15%。

黄连解毒汤提取物对大鼠应激性急性胃粘膜损害的治疗作用

黄连解毒汤提取物(TJ-15)能防止肥大细胞脱粒剂(化合物48/80)所致的大鼠急性胃粘膜损害。水浸拘束(WIR)应激模型大鼠胃粘膜组织中氧自由基的产生及脂质过氧化和巯基氧化是急性胃粘膜损害的主要病理过程。TL-15对WIR应激造成的急性胃粘膜损害是否有保护作用尚存争议,至今尚无有关动物实验的报道。此外,柴胡桂枝汤提取物(TJ-10)和四逆散提取物(TJ-35)不仅能清除氧自由基。

黄连解毒汤联合氟康唑对耐药白念珠菌麦角甾醇的影响

目的：探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物（ethyl acetate extract of Huanglian Jiedu decoction,EAHD）联合氟康唑（fluconazole,FLZ）对耐药白念珠菌生物膜麦角甾醇的影响. 方法：采用CLSI M27-A3的微量稀释法测定EAHD与FLZ对白念珠菌FLZ耐药株的MIC与SMIC80;棋盘稀释法测定EAHD与FLZ联用对白念珠菌的协同效应;稀释涂布平板法考察EAHD与FLZ联用不同时间对菌体的杀伤作用;分别用HPLC和qRT-PCR法检测耐药白念珠菌生物膜麦角甾醇含量及相关基因的变化. 结果：对于9株白念珠菌FLZ耐药株,EAHD对其MIC介于156~1 250 mgL-1,FLZ对其MIC介于256~2 048 mgL-1以上,二者联用后MIC显著降低,FICI（部分抑菌浓度指数）最低达0.066;EAHD单用对其SMIC80均高于1 250 mgL-1,FLZ单用对其SMIC80均高于512 mgL-1,最高可达2 048 mgL-1以上,联用组除个别组具有相加作用外也均有协同效应.时间杀菌（time kill,TK）实验显示当作用12 h,二者联用杀菌效应最强.HPLC结果显示联用组、EAHD组与空白组麦角甾醇量相比,分别降低了近85%,50%.qRT-PCR检测FLZ组ERG1,ERG2,ERG6,ERG7,ERG11均上调,ACS1,ACS2,MET6均下调;EAHD组所有基因均下调;联用组ERG2,ERG6,ERG11均显著上调,ERG1,ERG7,ACS1,ACS2,MET6均显著下调. 结论：EAHD协同FLZ抗白念珠菌耐药株,可能与抑制麦角甾醇合成相关基因的表达来降低麦角甾醇的合成有关,造成细胞膜损伤,抑制菌体生长.

成人与儿童汉方煎剂提取物用量比较

汉方方剂的使用说明一般只标注成人用量，儿童量根据成人量适当减少，但减量后能否得到相同的疗效不得而知.本文对常用的黄连解毒汤、桂枝茯苓丸、十全大补汤的成人、儿童量提取物的pH、提取率及提取成分进行了比较。

A large-scale transcriptional study reveals inhibition of COVID-19 related cytokine storm by traditional Chinese medicines

The application of traditional Chinese medicine(TCM)has made great contributions to the fight against the epidemic of coronavirus disease-2019(COVID-19).Despite the remarkable therapeutic effects of TCM,the molecular mechanisms of TCM formulae inhibiting COVID-19 are still not fully understood.Here,we cφm-bined the automated high throughput sequencing-based high throughput screening(HTS^(2))assay with bioinformatics and computer-aided drug design(CADD)to investigate the molecular mechanisms of TCM-mediated therapeutic effects on COVID-19-related cytokine storm(Fig.1a).