辣蓼黄酮乙酸乙酯部分体外抗猪伪狂犬病病毒研究

为了研究辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)抗猪伪狂犬病病毒(PRV)的效果,探索FEA体外抗病毒的作用方式,为辣蓼资源开发与利用提供理论依据,试验用PK-15细胞扩增PRV,计算TCID50;采用观察细胞病变联合中性红检测的方法,筛选FEA对PK-15细胞的最大安全浓度;通过计算各试验组(空白对照组、PRV阳性对照组、FEA组)的细胞保护率观察3种作用方式(阻断作用、增殖抑制作用及直接灭活作用)下不同浓度FEA体外抗PRV的效果。结果表明:PRV扩增病毒液的TCID50为1×10-6.25/0.1 mL;FEA的最大安全浓度为200μg/mL;3种作用方式下,药物对细胞的保护率范围分别为23%~74%、60%~94%及42%~91%,并且后两种作用方式下FEA浓度为100~200μg/mL时对细胞保护率达80%以上,细胞活性与PRV阳性对照组差异极显著(P<0.01)。说明高浓度的FEA可能通过抑制病毒增殖及直接灭活病毒这两种方式发挥抗病毒作用,且抗病毒效果呈剂量依赖性。

辣蓼黄酮乙酸乙酯部分对脂多糖诱导内毒素血症小鼠生化指标和炎性细胞的影响

目的观察辣蓼黄酮乙酸乙酯(FEA)部分对内毒素血症小鼠生化指标和炎性细胞的影响,探讨其作用机制。方法采用酶解-超声偶联法提取辣蓼全草中总黄酮,结合大孔树脂纯化富集获得辣蓼黄酮乙酸乙酯(FEA)部分,脂多糖(LPS)刺激小鼠建立内毒素血症模型。实验小鼠分为空白组、模型组和FEA高、中、低剂量组,各给药组给予相应浓度药液。测定肠组织丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)的含量,肝组织总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,血清还原型谷胱甘肽(GSH)含量与溶菌酶(LZM)、酸性磷酸酶(ACP)的活性,RT-PCR检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素(IFN)-α、IFN-γ和白细胞介素-2(IL-2)含量。结果与空白组比较,模型组小鼠肠组织MDA、MPO和血清ACP水平升高,肝组织T-AOC、T-SOD、GSH-Px和血清GSH、LZM水平降低,血清、肠组织和肝组织TNF-α升高,肺组织TNF-α、IFN-α、IFN-γ和IL-2 m RNA表达升高;与模型组比较,FEA各剂量组小鼠肠组织MDA、MPO和血清ACP水平降低,FEA中、高剂量组肝组织T-AOC、T-SOD、GSH-Px和血清GSH、LZM水平升高,FEA各剂量组小鼠血清、肠组织和肝组织TNF-α含量显著降低,肺组织TNF-α、IFN-α、IFN-γ和IL-2 m RNA表达显著降低;FEA高剂量组较模型组小鼠肺组织、回肠和结肠病理形态明显改善。结论 FEA部分能降低LPS诱导小鼠内毒素血症的炎性损伤,对机体具有保护作用。

辣蓼黄酮乙酸乙酯部分对PRV体外诱导RAW264.7细胞分泌炎性因子的影响

探讨辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(ethyl acetate of flavonoids from Polygonum hydropiper L.,FEA)对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)体外诱导RAW264.7细胞分泌炎性因子的影响。正式试验前将不同浓度的FEA作用于RAW264.7细胞,通过CCK-8检测细胞体外增殖活性,筛选FEA对RAW264.7细胞的安全浓度范围。正式试验分为空白对照组、PRV阳性对照组、芦丁对照组、5个FEA药物组,除空白对照组外,其余各组细胞加入PRV共孵育1.5 h后,再加入芦丁或不同浓度的FEA,分别培养4、8、12、24 h,CCK-8法检测FEA对病毒感染的RAW264.7细胞活性,筛选出3个FEA药物组(高、中、低剂量FEA),再通过ELISA法检测各时间点细胞培养液上清中炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、MCP-1和IFN-γ的分泌水平,以确定FEA体外调节炎症反应的最适时间及药物浓度。结果显示:①FEA对RAW264.7细胞的安全浓度为12.5~200μg/mL;②25~100μg/mL FEA能显著提高PRV感染的RAW264.7细胞体外增殖活性;③PRV感染RAW264.7细胞后促进细胞炎症因子的分泌,用FEA处理8~12 h后,在一定程度上降低了TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP-1的分泌水平(P<0.05),升高了IFN-γ分泌水平(P<0.05),调节了IL-10分泌水平,且FEA处理8 h抗炎效果最好。结果表明,FEA能调节病毒感染细胞分泌炎性因子的水平,提示其具有体外抗炎作用。该结果可为进一步研究FEA抗病毒分子机制提供参考依据。

鸡血藤黄酮乙酸乙酯部位对H_2O_2诱导RAW264.7细胞氧化应激的调节作用

为了探讨鸡血藤黄酮乙酸乙酯部位(the ethyl acetate fraction of spatholobus suberectdunn flavonoid,EFSF)的抗氧化应激作用,试验采用双氧水(H_2O_2)处理RAW264.7细胞,建立氧化应激模型,EFSF处理氧化应激细胞后,利用分光光度法检测一氧化氮(NO)分泌水平和细胞内活性氧自由基(ROS)水平的变化。结果表明:200μg/m L及以下浓度的EFSF对RAW264.7细胞无毒性作用;25,50,100μg/m L的EFSF均能明显降低H_2O_2诱导氧化应激细胞的NO分泌水平及细胞内ROS的含量。说明EFSF对H_2O_2处理RAW264.7细胞引起的氧化应激损伤具有一定的保护作用。