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SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖试验最佳条件的筛选 被引量:4
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作者 刘宸铄 刘芳 杨鸣琦 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第7期15-18,24,共5页
【目的】探讨磺酰罗丹明B法(Sulforhodamine B,SRB)检测鸡外周血T淋巴细胞增殖反应的最佳条件。【方法】体外培养鸡外周血T淋巴细胞,选用SRB法对淋巴细胞含量(1×105,1×106,2.5×106,5×106,7.5×106和1×107 ... 【目的】探讨磺酰罗丹明B法(Sulforhodamine B,SRB)检测鸡外周血T淋巴细胞增殖反应的最佳条件。【方法】体外培养鸡外周血T淋巴细胞,选用SRB法对淋巴细胞含量(1×105,1×106,2.5×106,5×106,7.5×106和1×107 mL-1)、ConA质量浓度(5.0,7.5,10.0,12.5和15.0μg/mL)、培养时间(36,48,60h)3个因素进行组合设计培养T淋巴细胞,每个组合设3个重复,SRB显色后用酶标仪在492nm波长处测量OD492值,计算刺激指数(Stimulation index,SI),筛选SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖的最佳条件。【结果】SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖试验的最佳条件为:淋巴细胞含量1×106 mL-1,ConA质量浓度5.0μg/mL,培养时间48h。【结论】确定了体外培养鸡外周血T淋巴细胞增殖的最佳ConA质量浓度、培养时间及淋巴细胞含量,证实用SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖结果可靠,是切实可行的淋巴细胞数量与活性检测方法。 展开更多
关键词 外周血T淋巴细胞 细胞增殖 罗丹明b
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磺酰罗丹明B法和噻唑蓝法检测皮肤来源细胞活力比较 被引量:3
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作者 吕冰峰 裴新荣 +3 位作者 崔生辉 罗飞亚 张庆生 邢书霞 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期494-497,共4页
目的比较两种细胞活力检测方法 ,即磺酰罗丹明B(SRB)法和噻唑蓝(MTT)法在皮肤来源细胞中的应用。方法选用几种化妆品研究中常用的皮肤来源细胞系,包括角质细胞Ha Ca T、黑色素细胞B16及成纤维细胞BALB/C 3T3,分别应用MTT法和SRB法检测... 目的比较两种细胞活力检测方法 ,即磺酰罗丹明B(SRB)法和噻唑蓝(MTT)法在皮肤来源细胞中的应用。方法选用几种化妆品研究中常用的皮肤来源细胞系,包括角质细胞Ha Ca T、黑色素细胞B16及成纤维细胞BALB/C 3T3,分别应用MTT法和SRB法检测细胞活力,并对两种方法进行比较,包括线性范围、信噪比、变异系数、信号稳定时间等。结果 SRB法的线性范围大于MTT法,变异系数小于MTT法,信号稳定时间比MTT法长。SRB法检测过程中可以暂停,有利于进行批量检测。SRB法可以进行重复检测,如果检测过程中发生意外或者对检测结果存有质疑,可以通过重复检测进行补救。结论在3种皮肤来源细胞系中,使用SRB法检测细胞活力,实验方法灵活、高效,检测结果稳定、精确,可以与MTT法互为补充使用,尤其是在大批量样本检测中具备优势。 展开更多
关键词 化妆品 皮肤 细胞活力 罗丹明b(srb) 噻唑蓝(MTT)
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碘-罗丹明B反荧光猝灭法测定药物中的乙酰半胱氨酸 被引量:1
3
作者 薛林科 张小林 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2020年第3期291-294,共4页
目的采用碘-罗丹明B反荧光猝灭测定药物中乙酰半胱氨酸的含量。方法碘液(I^-_3)对罗丹明B(RB)具有荧光猝灭作用,使荧光信号强度减弱甚至消失,而乙酰半胱氨酸分子中的巯基可将I^-_3还原为I^-,使体系荧光信号再现。激发波长360 nm,发射波... 目的采用碘-罗丹明B反荧光猝灭测定药物中乙酰半胱氨酸的含量。方法碘液(I^-_3)对罗丹明B(RB)具有荧光猝灭作用,使荧光信号强度减弱甚至消失,而乙酰半胱氨酸分子中的巯基可将I^-_3还原为I^-,使体系荧光信号再现。激发波长360 nm,发射波长580 nm,测量试液的荧光强度F,根据F值与溶液中的乙酰半胱氨酸浓度线性关系,完成乙酰半胱氨酸的反荧光测定。结果 0~10μmol·L^(-1)乙酰半胱氨酸与荧光强度有良好的线性关系(r=0.9970),检出限为4.8×10^(-9) mol·L^(-1)。结论所用方法简便快速、准确可靠、灵敏度高,可用于药物中乙酰半胱氨酸的含量分析。 展开更多
关键词 罗丹明b 半胱氨酸 反荧光猝灭 荧光强度 含量测定
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HPLC波长切换法同时测定血脂灵片中7种成分的含量 被引量:3
4
作者 王艳萍 李宏 李鹏 《中医药导报》 2022年第2期48-52,共5页
目的:建立血脂灵片中23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚7种成分的含量测定方法,为血脂灵片的质量评价提供实验参考。方法:采用HPLC波长切换法同时测定血脂灵片中23-乙酰泽泻醇B、23... 目的:建立血脂灵片中23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚7种成分的含量测定方法,为血脂灵片的质量评价提供实验参考。方法:采用HPLC波长切换法同时测定血脂灵片中23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚7种化学成分的含量,色谱柱为Waters XBridge^(TM) C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;柱温为30℃,进样量为10μL;检测波长分别为λ1=208 nm、λ2=246 nm、λ3=284 nm。结果:23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分离度良好;分别在0.755~15.090μg/mL(r=0.9998)、0.765~15.390μg/mL(r=0.9999)、1.269~25.370μg/mL(r=0.9998)、1.268~25.360μg/mL(r=0.9999)、1.465~29.300μg/mL(r=0.9997)、1.240~24.800μg/mL(r=0.9998)、1.038~20.760μg/mL(r=0.9999)的范围内线性关系良好;平均回收率分别为99.98%(RSD=0.86%)、101.29%(RSD=0.92%)、100.88%(RSD=1.10%)、99.98%(RSD=0.92%)、101.50%(RSD=1.63%)、100.19%(RSD=0.55%)、99.95%(RSD=0.60%)(n=9)。结论:本研究同时定量分析了血脂灵片中7种指标性成分的含量,该法操作准确、重复性好,可客观、全面地对血脂灵片的内在质量进行有效评价。 展开更多
关键词 血脂灵片 HPLC波长切换 23-乙泽泻醇b 23-乙泽泻醇C 决明素 芦荟大 素甲醚 含量测定
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4-硫-5-(2-噻吩基)尿苷体外对黑色素肿瘤细胞增殖作用的影响 被引量:2
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作者 蒋革 罗锋 +3 位作者 高瑞琦 樊星 秦建中 张晓辉 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期307-312,共6页
目的探究新化合物4-硫-5-(2-噻吩基)尿嘧啶核苷酸体外对黑色素瘤细胞的增殖作用影响。方法利用MTT法和磺酰罗丹明B染色法对比考察该化合物对人黑色素瘤细胞(A375)、小鼠黑色素肿瘤细胞(B16)和人正常皮肤细胞体外增殖的影响,并利用流式... 目的探究新化合物4-硫-5-(2-噻吩基)尿嘧啶核苷酸体外对黑色素瘤细胞的增殖作用影响。方法利用MTT法和磺酰罗丹明B染色法对比考察该化合物对人黑色素瘤细胞(A375)、小鼠黑色素肿瘤细胞(B16)和人正常皮肤细胞体外增殖的影响,并利用流式细胞术检测不同药物浓度下该化合物对人黑色素瘤细胞(A375)周期的影响。结果 4-硫-5-(2-噻吩基)尿嘧啶核苷酸苷体外对人和小鼠的黑色素瘤细胞无种属特异性,均表现出剂量依赖性的抑制作用,但对正常皮肤细胞却无抑制作用;流式细胞术显示:4-硫-5-(2-噻吩基)尿苷导致剂量依赖性的G2细胞累积,抑制细胞有丝分裂;同时具有诱导细胞凋亡的作用。结论 4-硫-5-(2-噻吩基)尿嘧啶核糖核苷酸对黑色素瘤有明显抑制作用,对正常皮肤细胞无抑制作用表明该化合物对细胞作用时具有选择性,有可能成为新型靶向抗癌药物的候选者。 展开更多
关键词 4-硫-5-(2-噻吩基)尿苷 黑色素瘤细胞 MTT 罗丹明b染色 流式细胞术
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4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果 被引量:13
6
作者 柴冰阳 陈泽慧 +2 位作者 张闪闪 应雪 张波 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期172-177,共6页
目的研究4种细胞毒活性测定方法对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果,对紫草萘醌为代表的天然色素在细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析。方法将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病HL-60细胞和低敏感株人非小细胞肺癌... 目的研究4种细胞毒活性测定方法对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果,对紫草萘醌为代表的天然色素在细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析。方法将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病HL-60细胞和低敏感株人非小细胞肺癌A549细胞体外共培养,通过台盼蓝法、磺酰罗丹明B(SRB)法、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法进行平行实验,测定紫草素在0.4~128μmol/L抑制细胞生长的量效关系曲线。结果台盼蓝法、SRB法、CCK-8法、MTT法测得紫草素对HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为0.57、0.77、1.36、1.01μmol/L,对A549细胞的IC50分别为6.30、10.38、13.48、15.24μmol/L。紫草素浓度分别在3.2、32μmol/L以下时,4种检测方法得到其对2种细胞的抑制率均呈线性增长,超过此浓度即出现差异。其中台盼蓝法与SRB法结果一致性良好,而MTT法与CCK-8法测得的抑制率较低。对于HL-60细胞,紫草素12.8μmol/L时,CCK-8测得抑制率为81%,台盼蓝法为96%;对于A549细胞,紫草素128μmol/L时,MTT法测得抑制率为89%,台盼蓝法为99%。紫草素的吸收光谱与甲臜在波长400~600 nm存在重叠,最大重叠峰在550~570nm,CCK-8试剂与紫草素对HL-60细胞存在协同抑制效应。台盼蓝法结果显示高浓度紫草素几乎完全杀死板孔内细胞,相比对照组差异显著,但MTT法和CCK-8法结果出现假阴性。结论紫草萘醌为代表的天然色素的细胞毒活性评价不建议使用MTT法和CCK-8法,推荐使用SRB法和台盼蓝法。 展开更多
关键词 紫草素 细胞毒活性评价 四甲基偶氮唑盐 罗丹明b CCK-8 台盼蓝
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旱生香茶菜总二萜对人肝癌细胞株增殖、荷人肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的影响 被引量:7
7
作者 田庆锷 李玛琳 孙汉董 《中国药房》 CAS CSCD 北大核心 2006年第15期1134-1136,共3页
目的:研究旱生香茶菜总二萜(IXD)对人肝癌细胞株(CA)增殖、荷CA裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:体外试验采用磺酰罗丹明B(SRB)法测试IXD对CA的IC50值,体内试验测定IXD不同剂量对荷CA裸鼠移植瘤增殖的抑制率。结果:IXD对CA的IC50值为6&#... 目的:研究旱生香茶菜总二萜(IXD)对人肝癌细胞株(CA)增殖、荷CA裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:体外试验采用磺酰罗丹明B(SRB)法测试IXD对CA的IC50值,体内试验测定IXD不同剂量对荷CA裸鼠移植瘤增殖的抑制率。结果:IXD对CA的IC50值为6·17μg/ml,其在剂量为100、200(mg·kg)/d应用12d时抑制率分别为33·52%、38·19%,与生理盐水阴性对照组比较具有显著性差异(P<0·05)。结论:IXD对CA有较强的细胞毒活性,对荷CA裸鼠移植瘤生长具有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 旱生香茶菜总二萜 人肝癌细胞 罗丹明b 细胞增殖 裸鼠
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依立雄胺对雄激素非依赖前列腺癌细胞DU-145的作用
8
作者 李涛 李玉华 +4 位作者 李润生 桂亚平 卞崔冬 黄盛松 吴登龙 《外科研究与新技术》 2012年第2期135-138,共4页
目的为研究依立雄胺治疗前列腺癌的可能性及可能机制,探讨依立雄胺体外对人激素非依赖型前列腺癌细胞(DU-145)生长的作用。方法用2.5,5,10,20和40μM的依立雄胺作用DU-145细胞3天后,用普通倒置显微镜进行细胞形态学观察;用黄酰罗丹明B法... 目的为研究依立雄胺治疗前列腺癌的可能性及可能机制,探讨依立雄胺体外对人激素非依赖型前列腺癌细胞(DU-145)生长的作用。方法用2.5,5,10,20和40μM的依立雄胺作用DU-145细胞3天后,用普通倒置显微镜进行细胞形态学观察;用黄酰罗丹明B法(SRB法)评价依立雄胺对前列腺癌细胞株DU-145的体外增殖抑制作用绘制的生长曲线;应用流式细胞仪评价依立雄胺对对前列腺癌细胞株DU-145的周期阻滞作用。结果 40μM和20μM的依立雄胺作用DU-145细胞3d后,可使其明显的皱缩凋亡;依立雄胺对DU-145呈现明显的浓度依赖的体外增殖抑制作用;通过流式细胞仪分析发现,依立雄胺对DU-145呈现明显的浓度依赖的周期阻滞作用。 展开更多
关键词 依立雄胺 凋亡 增殖 罗丹明b(srb) 细胞株 DU-145 前列腺癌
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基于HPLC波长切换联合梯度洗脱技术的双参龙胶囊中10种主要成分定量研究 被引量:3
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作者 张毅 周慧 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1081-1086,共6页
目的建立HPLC波长切换联合梯度洗脱法(HPLC-DVD法)同时测定双参龙胶囊(SSLC)中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、鲁斯可皂苷元、苦杏仁苷、人参皂苷Rb_1、人参皂苷Re、阿魏酸、西红花苷-I、丹酚酸B、11-羰基-β-乙酰乳香酸和丹参酮Ⅱ_A 10种指标成... 目的建立HPLC波长切换联合梯度洗脱法(HPLC-DVD法)同时测定双参龙胶囊(SSLC)中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、鲁斯可皂苷元、苦杏仁苷、人参皂苷Rb_1、人参皂苷Re、阿魏酸、西红花苷-I、丹酚酸B、11-羰基-β-乙酰乳香酸和丹参酮Ⅱ_A 10种指标成分的方法。方法采用HPLC-DVD法,Hypersil ODS C_(18)(150 mm×4.0 mm,3μm)色谱柱;甲醇-水(8∶2,A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,体积流量0.6 mL/min;毛蕊异黄酮葡萄糖苷的检测波长为260 nm,鲁斯可皂苷元的检测波长为280 nm,苦杏仁苷的检测波长为210 nm,人参皂苷Rb_1和人参皂苷Re的检测波长为203 nm,阿魏酸的检测波长为320 nm,西红花苷I的检测波长为440 nm,丹酚酸B的检测波长为286 nm,11-羰基-β-乙酰乳香酸的检测波长为250 nm,丹参酮Ⅱ_A的检测波长为270 nm;进样量为10μL。结果 10种指标成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷在3.88~69.86mg/L(r=0.999 2)、鲁斯可皂苷元在22.1~397.8 mg/L(r=0.999 1)、苦杏仁苷在37.43~673.5 mg/L(r=0.999 4)、人参皂苷Rb_1在45.15~812.72 mg/L(r=0.999 6)、人参皂苷Re在4.55~81.95 mg/L(r=0.999 5)、阿魏酸在3.06~55.15 mg/L(r=0.999 4)、西红花苷-I在1.93~34.76 mg/L(r=0.999 5)、丹酚酸B在15.68~282.15 mg/L(r=0.999 6)、11-羰基-β-乙酰乳香酸在11.31~203.58 mg/L(r=0.999 1)、丹参酮Ⅱ_A在1.89~34.16 mg/L(r=0.999 6)质量浓度与峰面积具有较好的线性关系;精密度良好,RSD≤1.27%;重复性良好,RSD≤1.28%;供试品溶液在室温条件下8 h内稳定,RSD≤0.96%;平均加样回收率和相应的RSD分别为99.61%、1.21%,100.11%、0.76%,101.52%、0.62%,101.22%、1.03%,100.83%、1.14%,98.94%、0.53%,101.04%、1.09%,100.05%、1.25%,99.81%、0.68%,101.94%、1.31%。9批次供试品中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、鲁斯可皂苷元、苦杏仁苷、人参皂苷Rb_1、人参皂苷Re、阿魏酸、西红花苷-I、丹酚酸B、11-羰基-β-乙酰乳香酸和丹参酮Ⅱ_A量分别为0.142~0.158、0.747~0.764、1.578~1.619、2.163~2.185、0.235~0.251、0.557~0.580、0.105~0.122、0.311~0.328、0.605~0.624、0.062~0.079 mg/粒。结论建立的HPLC-DVD法同时测定SSLC中的10种成分,方法操作简便、快速、准确,可作为SSLC质量控制的分析方法。 展开更多
关键词 HPLC-DVD 双参龙胶囊 毛蕊异酮葡萄糖苷 鲁斯可皂苷元 苦杏仁苷 人参皂苷Rb1 人参皂苷RE 阿魏酸 西红花苷-I 丹酚酸b 11-羰基-Β-乙乳香酸 丹参酮Ⅱ_A
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