不同培养条件下灰黄青霉分生孢子的核数分析

分生孢子是青霉菌的无性繁殖细胞,其核型特征对青霉菌的生长繁殖、遗传育种等具有重要影响,用水琼脂和察氏培养基在不同的培养天数中寻找单核分生孢子比例最高的条件。采用DAPI核染色法,荧光显微观察灰黄青霉Penicilliumgriseofulvum分生孢子在水琼脂和察氏培养条件及不同天数的核型特征。结果表明:灰黄青霉生长发育过程分生孢子同时出现单核、双核及多核现象,其核型具有多样性。在不同培养基中的分生孢子各种核型的比例呈现显著差异(P<0.001);而在相同培养基,不同培养时间的特定核型的分生孢子占比相对稳定,未呈现显著差异(P>0.05)。研究结果为更好地开展灰黄青霉的遗传操作提供理论参考。

产黄青霉废菌体对铅的吸附机理研究——参与铅生物吸附的化学物质及功能团的确定

对产黄青霉废菌体对废水中Pb2 +的生物吸附机理进行了研究 ,主要探讨了参与吸附的细胞组分及化学功能团。对菌体的化学处理及红外光谱分析结果表明 :经脱蛋白、脱脂及脱乙酰化预处理的菌体对Pb2 +的吸附量明显增大 ;产黄青霉废菌体对Pb2 +的吸附主要发生在产黄青霉菌细胞壁上 ;细胞壁的主要成分几丁质和葡聚糖均参与了吸附过程 ;酰胺基团 (-NHCOCH3)和羟基基团 (-OH)协同作用结合Pb2 +,Pb2

固定化产黄青霉废菌体吸附铅与脱附平衡

研究固定化产黄青霉废菌体对Ｐｂ２＋的吸附与脱附平衡的结果表明，Ｐｂ２＋的生物吸附受ｐＨ值的影响很大，温度的影响则很小．ＥＤＴＡ是洗脱固定化产黄青霉废菌体上所吸附Ｐｂ２＋的最佳脱附剂．在保持脱附率为１００％的条件下，ＥＤＴＡ的初浓度、固定化废菌颗粒的吸附量与最大固液比之间存在正相关关系．０．１ｍｏｌ／Ｌ的ＥＤＴＡ在脱附Ｐｂ２＋时终浓度最高可达２０７００ｍｇ／Ｌ，最大固液比可达２９０以上，浓缩因子可达１１３。

产黄青霉原生质体制备和再生影响因子分析

产黄青霉原生质体制备过程中 ,菌丝体最佳酶解条件与原生质体释放最适条件不同 ,菌丝体培养基含有 0 .0 5 % L-天冬酰胺时 ,选取培养 48h的菌丝体 ,在裂解酶 (L ysing enzym e)浓度 15 mg/ ml,0 .7mol/ LKCl作为渗透压稳定剂的条件下酶解 ,可获得大量原生质体 ;同时 ,再生培养基中含有 2 5 mm ol/ L Ca2 +离子、上层琼脂浓度 1.1% 。

非生长产黄青霉吸附铅的研究

本文报道非生长产黄青霉对溶液中铅离子的吸附。菌体对铅的吸附依赖于溶液的ｐＨ值，在ｐＨ４－５范围内，其饱和吸附量（１１６ｍｇＰｂ＾２＋／ｇ干菌）高于活性炭及文献中所报道蕈状芽孢杆菌，小刺青霉及长木链霉等。当ｐＨ４．５时，产黄青霉对铅的选择性高于Ｚｎ＾２＋，Ｃｄ＾２＋，Ｃｕ＾２＋和Ａｓ＾３＋的存在对吸附无明显影响，Ｃｄ＾２＋的存在的使铅的吸附量有所提高，而Ｚｎ＾２＋的存在则使之降低。在小试规模下。

产黄青霉形态的显微图像分析研究

利用显微图像分析法对产黄青霉的菌丝形态进行了定量研究 ,并统计分析了青霉素发酵过程中菌丝形态的变化规律 ,具体对菌丝总长度、菌丝生长期的菌丝生长单位。

产黄青霉废菌体对铅的吸附机理(Ⅱ)——铅生物吸附途径和吸附类型的确定

探讨了铅生物吸附途径和吸附类型。X射线衍射分析及离子竞争及洗脱实验结果表明 ,产黄青霉废菌体对Pb2 +的吸附途径有 2个 :第 1,Pb2 +与一些细胞自溶物或细胞碎片结合 ,沉积在吸附剂颗粒表面 ,这些沉积物具有晶体结构 ,此部分吸附量最大可占总吸附量的 5 3% ;第 2 ,Pb2 +与菌体表面结合位作用 ,进行离子交换吸附 ,Pb2 +与[H+/ 2 +Ca2 ++Mg2 +]等量置换 ,其中以离子键形式进行的吸附至少占离子交换吸附总量的 2 5 % ,其余主要为以共价 /配位键形式存在的化学吸附。

利用根瘤农杆菌LBA4404 Ti质粒介导高效转化产黄青霉及克隆vgb基因

通过根瘤农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens) L BA4 4 0 4中 Ti-质粒的介导将含有透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscilla Hemoglobin,VHb)基因 vgb和博来霉素 (bleomycin)抗性基因转移到产黄青霉 (Penicilliumchrysogenum)中 ;利用根瘤农杆菌介导转化产黄青霉孢子时需要有乙酰丁香酮诱导 ;转化菌丝体时乙酰丁香酮不是必要的 ,但一定浓度的乙酰丁香酮可提高转化率 ,与原生质体转化法相比可提高转化率 10倍左右。

灰黄青霉对瓜列当的防效及对番茄根区土壤微生物的影响

根寄生杂草瓜列当(Orobanche aegyptiaca)严重危害番茄(Solanum lycopersicum)等多种经济作物的产量和品质。如何有效防除仍是当今瓜列当研究重点之一。真菌是列当的生防因子之一,但目前对农作物无致病性的列当生防真菌的研究尚少。本研究通过培养皿试验研究1 株灰黄青霉(Penicillium griseofulvum, CF3)的无细胞发酵滤液对瓜列当种子萌发和发芽管生长的影响,通过盆栽试验研究CF3 粉状制剂对瓜列当的防除效果及对寄主番茄生长和根区土壤微生物的影响。结果表明: 1)培养皿试验中, CF3 发酵液抑制了瓜列当种子萌发和发芽管生长。其中,在放有瓜列当种子与番茄幼苗的培养皿中,加入CF3 发酵液后培养6 d,瓜列当种子的萌发均被完全抑制;添加CF3 发酵液与霍格兰德营养液体积比为1∶2、1∶4、1∶6 和1∶8 的混合液培养8 d 后,瓜列当种子的萌发率与对照相比分别减少80.26%、70.26%、68.10%和47.51%。CF3 发酵液原液、10倍稀释液和100 倍稀释液处理后使瓜列当发芽管长度与对照相比分别缩短100.00%、68.84%和19.24%。2)盆栽试验中, CF3 菌剂抑制了瓜列当的出土和单株瓜列当的生长,并使番茄增产。施加1.0 g·kg^-1 CF3 菌剂130 d后,瓜列当的出土数量、出土率和单株瓜列当干重分别降低76.19%、85.30%和28.48%,番茄果实鲜重增加51.57%。此外,灰黄青霉菌剂还调整了番茄根区土壤的微生物区系结构,使施加菌剂130 d 后番茄根区土壤中除接入CF3 外真菌数量与对照相比降低75.60%,细菌与真菌的数量之比增加117.57%。平均来看, CF3 使番茄根区土壤中除CF3 外真菌数量降低42.81%,放线菌总数增加84.15%。本研究表明,灰黄青霉CF3 具有防除番茄上寄生瓜列当的能力,适宜作为瓜列当的生防真菌。

产黄青霉发酵过程中菌体量测定的研究

对产黄青霉(Penicillium chrysogenum)发酵过程中菌丝量的测定方法进行研究,提出了一种新的基于超声波破碎细胞以及二苯胺显色法进行菌体量测定的方法,此方法与常规的测定菌体干重的方法比较,能很好地反映发酵过程中菌体量的变化情况。该方法重现性好、准确度和精密度较高,用于含固形物的发酵液中菌丝量的测定,得到了满意的结果。

产黄青霉、扣囊复膜孢酵母替代部分大曲提高食醋原料利用率

从分离自山西老陈醋大曲中高产糖化酶和纤维素酶的菌株中筛选优良菌株,制成麸曲与大曲共发酵,采用混料回归设计确定最佳原料配比并检测食醋质量。结果表明,以菌株AS3.4309(M0)为对照菌株,筛选出产黄青霉(M4)和扣囊复膜孢酵母(M8),大曲与麸曲的最佳总添加量为主料的40%,其中大曲25.10%,M8麸曲6.81%,M4麸曲8.09%,安琪酵母0.06%,料水比1∶3(g∶m L),此时酒精度为11.2%vol。制成麸曲与大曲共发酵后酒精度显著高于菌株M0(P<0.05),与大曲单独发酵相比,麸曲M4+M8+大曲共酵提高原料利用率提高了31.81%,减少大曲用量37.25%,且食醋各项质量指标均符合国家标准。

海洋真菌灰黄青霉Penicillium griseofulvum次级代谢产物中一个新的内酯醛结构

采用硅胶柱色谱,半制备高压液相色谱(HPLC),ODS柱色谱以及Sephadex LH-20凝胶柱色谱等多种方法从海洋真菌灰黄青霉Penicillium griseofulvum发酵液的乙酸乙酯萃取物中分离纯化得到3个化合物,采用1D NMR(1H NMR、13C NMR、DEPT)、2D NMR(HMBC、HMQC、1H-1H COSY)及MS等光谱学方法分析及参考相应的文献,确定它们的结构分别为:2-(6-羟基-5,7-二甲基苯并呋喃酮-4-基)乙醛(1)、对苯二甲酸二(2-乙基)己酯(2)和己二酸二乙基己酯(3),其中化合物1为新化合物。

一种快速提取丝状真菌产黄青霉DNA的方法

介绍一种快速有效的提取丝状真菌产黄青霉染色体DNA的方法。该方法以100mm o l/L T ris、100mm o l/L N aC l、50mm o l/L EDTA-N a2和2%SDS(pH 9.0)为提取液,经石英砂研磨破壁,获得了较高质量的染色体DNA,该法较酶解法和氯化苄法廉价、快速、安全,且不影响其后续的分子生物学操作。

剪切环境与产黄青霉形态和代谢的关系

结合青霉素发酵过程，考察了产黄青霉形态变化和发酵罐中剪切环境对菌体形态的影响。考察的产黄青霉菌株对强剪切作用呈现出瞬时响应和逐渐衰减的反应机制，实际剪切强度介于发酵罐内最高剪切速率和平均剪切速率之间。提出了总体剪切强度的概念，用于定量表达不同桨型、多层搅拌下剪切环境。青霉素发酵需要在较强剪切环境中进行，采用轴向流桨和涡轮桨组合搅拌时，可通过调整桨径和搅拌转速来保证剪切环境满足菌体生长和代谢的需要。

产黄青霉vgb转化菌PTH-1嗜盐新特性研究

利用 Ca Cl2 /PEG介导的原生质体转化法获得一株有产抗能力的产黄青霉 vgb转化菌 PTH- 1。该转化菌具有嗜盐性 ,必须在含有高浓度 KCl的培养基中才能生长。在该盐条件下转化菌 PTH - 1对博莱霉素抗性稳定 ,具有摄氧率高、易自溶、细胞壁脆弱等特性。在高盐发酵试验中 ,PTH - 1产抗比对照株提高 14%。

利用产黄青霉培养液的上清液生物合成纳米银影响因素的研究

[目的]对利用产黄青霉培养液的上清液生物合成纳米银的影响因素进行研究。[方法]利用紫外-可见光谱和投射电镜研究硝酸银起始浓度、pH值、光照和微波辐照等条件对合成反应速率及合成纳米银粒径的影响。[结果]硝酸银的最佳起始浓度为2 mmol/L;随着反应体系pH值的升高,反应速率随之加快,合成纳米银粒子的粒径变小;光照和微波辐照均能有效促进纳米银的合成。[结论]该研究为实现纳米银的可控合成提供了试验基础。

工业用产黄青霉菌基因组的RAPD多态性研究

为寻找高产菌株的分子标记,尝试利用RAPD(random amplified polymorphic DNA)技术,对青霉素生产菌株进行基因组多态性分析,分别以9株不同产量的产黄青霉菌基因组DNA为模版,筛选引物23条,并且对一条高产菌株特异条带进行了克隆与杂交验证.

产黄青霉菌株39B分离培养及其白藜芦醇代谢积累条件研究

在虎杖组织培养过程中获得1株产黄青霉菌株(Penicillum chrysogenum,39B)菌株,其发酵液经TLC和HPLC检测含白藜芦醇,对其培养条件及白藜芦醇积累特性进行了研究,通过正交优化试验得到该菌最佳培养条件:20g/L葡萄糖,2g/L硝酸铵,pH值7.0,28℃,100r/min。3mmol/L苯丙氨酸、Mg2+、Zn2+能促进其生长和白藜芦醇的积累,其白藜芦醇含量达8.6617μg/100mL。

产黄青霉谷胱甘肽S-转移酶基因PcgstA的克隆与鉴定(英文)

从青霉素工业生产菌产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)中首次克隆了一个谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因,定名为PcgstA.该基因的开放阅读框长840bp,含有两个内含子,编码一个238氨基酸残基的蛋白质.其推断的氨基酸序列与一些已经鉴定的丝状真菌GST具有50%左右的序列一致性.PcgstA的完整编码区经RT-PCR扩增、验证,插入原核表达载体pET11a,转化大肠杆菌BL21(DE3)-RP菌株,表达得到重组PcGSTA蛋白.酶活测定证实,重组PcGSTA具有GST活性,其对底物CDNB(1-chloro-2,4-dinitrobenzene)的比活为(0.159±0.031)μmol/(min·mg).利用TaqMan探针法,对PcgstA的表达情况进行了比较.结果表明,在添加了侧链前体苯乙酸的青霉素生产培养基中,PcgstA的表达水平和在不含苯乙酸培养基中的表达相比明显下调,显示了该基因与苯乙酸代谢的关系.

基于NCBI核酸数据库资源的产黄青霉微卫星序列的筛选

利用生物信息学方法在产黄青霉基因组中筛选微卫星序列,并对其基因组中微卫星数量和丰度进行了研究.利用SSRHunter1.3软件在长度为30 090 464 bp的产黄青霉基因组中共找到163个微卫星序列.其中以两碱基重复类型数目最多,为133个,占重复序列总数目的 81.60%;其次是三碱基重复为29个,占17.79%;最后是四碱基1个,占0.61%.在两碱基重复序列中,AT(44.79%)重复类别最多,其次是AG(23.92%).在三碱基重复序列中,共发现9种重复类别,其中以AAG和ACT重复类型最多,为6个(3.68%),其次是ACC(2.45%),最少的是AGC(0.61%).四碱基重复中,只有1种重复类别,为ATGT(0.61%).同时选取二碱基的重复次数在7以上和三碱基的重复次数在6以上的微卫星序列,利用Primer Premier 5.0软件设计了引物,共得到30对引物.本研究不仅为后续产黄青霉微卫星标记的筛选奠定了基础,也丰富了其基因组学资源,对产黄青霉的种群遗传结构分析、分子标记选育和遗传多样性有重要意义.