基于黄鲫蛋白肽制备南美白对虾多酚氧化酶复合生物抑制剂的研究

目的 以黄鲫蛋白肽(half-fin anchovy hydrolysate peptides,HAHp)为基料复配抗坏血酸和茶多酚制备南美白对虾多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)复合生物抑制剂(composite biological inhibitor, CBI)。方法 以南美白对虾PPO抑制率为检测指标,分别研究HAHp、抗坏血酸、茶多酚、柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠盐(ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt, EDTA-2Na)单独抑制PPO活性,选取HAHp、抗坏血酸和茶多酚进行三因素三水平正交优化实验优化CBI配方组成,通过酶促动力学研究CBI对南美白对虾PPO的抑制模式。结果 HAHp、抗坏血酸、茶多酚、柠檬酸和EDTA-2Na对南美白对虾PPO都有一定的抑制作用,且有一定的剂量依赖性,但单一抑制剂对PPO的抑制作用有限。HAHp与天然抗氧化剂抗坏血酸和茶多酚复配,经(L933)正交实验优化CBI的最佳配方为:0.7%HAHp、0.02%抗坏血酸和0.20%茶多酚。经测定CBI对南美白对虾PPO抑制率达到94.71%±0.46%,酶促动力学结果表明CBI是一种混合型抑制剂,通过降低南美白对虾PPO对底物亲和力实现抑制PPO活力。结论 以HAHp为基料复配抗坏血酸和茶多酚制备的CBI能够有效地抑制南美白对虾PPO活性,有望开发成一种防虾黑变的天然抑制剂,为南美白对虾天然保鲜剂的研究奠定了理论基础。

磁性纳米Fe3O4对黄鲫蛋白抗菌肽的富集作用

[目的]以磁性Fe3O4粒子为基粒,采用溶胶-凝胶法在基粒表面键合二氧化硅,将基粒制成改性磁性纳米Fe3O4用于吸附黄鲫蛋白抗菌肽中的活性肽,从而达到对黄鲫蛋白肽中有效抗菌组分的快速分离富集。[方法]黄鲫蛋白肽经改性磁性纳米Fe3O4吸附后,测定抑菌率、肽含量、蛋白质含量和氨基酸含量指标,再结合透射电镜分析和高效液相分析结果,比较黄鲫蛋白肽在吸附前后的变化。[结果]透射电镜结果显示,改性磁性纳米Fe3O4吸附黄鲫蛋白抗菌肽,可在粒子表面形成“冕层”。经改性磁性纳米Fe3O4吸附后,黄鲫蛋白抗菌肽液对大肠杆菌的抑菌作用显著降低,其中黄鲫蛋白肽中的肽含量、蛋白质含量分别由吸附前的7.249mg和416.221μg降低至6.297mg和346.183μg,而吸附后肽液中氨基酸含量则略有提高。高效液相分析结果表明,黄鲫蛋白肽经改性磁性纳米Fe3O4吸附后主要分离峰的保留时间和峰面积均发生改变。[结论]改性磁性纳米Fe3O4能有效吸附黄鲫蛋白肽中的抗菌肽,实现对抗菌组分的分离富集作用。

采用美拉德反应提高黄鲫蛋白抗菌肽的抑菌活性

以黄鲫蛋白抗菌肽(HAHp)为底物,通过美拉德反应提高其抑菌活性。以大肠杆菌为指示菌,在100℃水浴加热条件下,比较HAHp-葡萄糖、HAHp-蔗糖、HAHp-麦芽糖和HAHp-乳糖的美拉德反应物抑菌活性;选用葡萄糖为添加糖,测定HAHp-葡萄糖美拉德反应初始pH值、加糖量、加热温度和加热时间对美拉德反应物的抑菌活性影响。结果表明:提高反应初始pH值(大于pH6.0)会降低HAHp美拉德产物的抑菌活性,选择葡萄糖适宜加入量,控制加热温度和时间可以提高HAHp-葡萄糖美拉德反应物对大肠杆菌的抑菌活性。

黄鲫蛋白抗菌肽—葡萄糖美拉德反应物的抑菌性实验研究

利用响应面分析法优化黄鲫蛋白抗菌肽-葡萄糖美拉德反应条件,提高产物的抑菌活性。以大肠杆菌为指示菌,在黄鲫蛋白抗菌肽初始反应pH为5.58条件下,进行葡萄糖添加量、加热温度和加热时间三因素三水平Box-Benhnken响应面分析实验,得出黄鲫蛋白抗菌肽-葡萄糖美拉德反应最优条件为葡萄糖添加量0.25%(w/v)、加热温度100℃、加热时间60 min。在最优反应条件下,黄鲫蛋白抗菌肽-葡萄糖美拉德反应物对大肠杆菌的抑菌圈直径为28.9 mm,与理论值28.4 mm接近。

黄鲫蛋白抗菌肽-纳米氧化锌络合物对小鼠肠黏膜氧化性的影响

[目的]研究黄鲫蛋白抗菌肽-纳米氧化锌络合物对肠黏膜氧化作用的影响。[方法]以小鼠为动物模型,透射电镜分析显示,黄鲫蛋白抗菌肽-纳米氧化锌络合物微观为形状不规则的聚合物,将该聚合物注射到小鼠空肠中吸收30 min,分别测定肠黏膜的髓过氧化物酶(MPO)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性,脂质过氧化物(LPO)和丙二醛(MDA)含量变化。[结果]试验表明,黄鲫蛋白抗菌肽-纳米氧化锌络合物显著提高了MPO活性,但是GPx活性则显著地降低;同样,在脂质氧化程度上,LPO含量显著地降低,而MDA含量则是显著地增加。[结论]该研究说明,黄鲫蛋白抗菌肽-纳米氧化锌络合物能改变小肠黏膜关键酶MPO和GPx活性,但是不同酶对其敏感性不同,MPO活性增强可能与LPO含量降低有关,而GPx活性降低则导致了MDA含量增加。

黄鲫蛋白活性肽及其热反应物的风味特征研究

分别采用电子鼻分析法和顶空固相微萃取-气质联用法对黄鲫蛋白活性肽(HAHp)及其热反应物(HAHp-H)的风味特征进行分析。电子鼻载荷分析结果表明:对氮氧类、醇类及烷烃类化合物敏感的传感器在区分HAHp和HAHp-H的风味性中贡献率大,线性判别分析效果优于主成分分析法。从HAHp中检测到酮类、醇类、酯类、烯类、呋喃类、醛类、烷类及其他类化合物20个,其中酮类和醇类总相对含量达到88.26%。HAHp-H中化合物种类和相对含量与HAHp明显不同,新生成的6-甲基-5-庚烯-2-酮、3,3,6-三甲基-1,5-庚二烯-4-酮、3-甲基-丁醛具有提升风味的作用,而癸醛和壬醛则未被检出或含量降低。HAHp-H的风味性优于HAHp,该研究可为HAHp和HAHp-H在食品中的应用提供参考。