黏着斑激酶对血小板源性生长因子刺激的血管平滑肌细胞迁移和黏附的调控

目的探讨黏着斑激酶(FAK)信号分子在雷帕霉素抑制血小板源性生长因子(PDGF)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)迁移、黏附中的调控作用。方法将培养的大鼠VSMC分为对照组、PDGF组、雷帕霉素+PDGF组(雷帕霉素组)和FAK反义寡核苷酸+PDGF组(FAK组)。用PDGF诱导VSMC的迁移和黏附,计数贴壁细胞;采用Boyden检测细胞迁移;采用RT-PCR、Western blot、免疫沉淀方法分别检测FAK基因、蛋白及蛋白磷酸化表达量。将FAK反义寡核苷酸经脂质体转染VSMC,观察FAK mRNA及蛋白磷酸化、细胞迁移和黏附的变化。结果与对照组比较,PDGF组明显诱导细胞迁移和黏附,上调FAK mRNA的表达,提高FAK蛋白和磷酸化FAK表达,差异有统计学意义(P<0.05),与PDGF组比较,FAK组和雷帕霉素组细胞迁移、黏附能力减弱,FAK mRNA、FAK蛋白和磷酸化FAK表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDGF诱导细胞迁移和黏附可能是FAK介导的,雷帕霉素可能是通过抑制FAK蛋白和磷酸化FAK来抑制VSMC的迁移和黏附。

小分子干扰RNA抑制黏着斑激酶基因对子宫内膜癌细胞生物学特征的影响

目的探讨小分子干扰RNA(small interference RNA,si RNA)抑制黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因对子宫内膜癌细胞生物学特征的影响。方法培养人子宫内膜癌HEC-1A细胞,分为si RNA-FAK组、si RNA-阴性对照组和空白对照组,实时荧光定量PCR检测各组细胞中FAK基因表达,细胞增殖能力、迁移和侵袭能力检测分别采用MTT法和Transwell法,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞中FAK、磷酸肌醇3激酶(phosphoinositol 3 kinase,PI3K)、磷酸化-Akt(phosphorylateAkt,p-Akt)、磷酸化-哺乳动物雷帕霉素(phosphorylation-mammalian rapamycin,p-mTOR)蛋白表达。结果 si RNA-FAK组细胞中FAK m RNA和蛋白相对表达量分别为(1. 31±0. 15)、(0. 26±0. 08),均低于si RNA-阴性对照组[(2. 06±0. 18)、(0. 62±0. 11)]和空白对照组[(2. 11±0. 20)、(0. 64±0. 13)],差异有统计学意义(P <0. 05); si RNA-FAK组24 h、48 h、72 h、96 h时细胞吸光度A值均低于si RNA-阴性对照组和空白对照组,均差异有统计学意义(P <0. 05);与si RNA-阴性对照组和空白对照组比较,si RNA-FAK组迁移细胞数和侵袭细胞数均降低,si RNA-FAK组细胞中FAK、PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达相对表达量均降低,而Akt和m TOR蛋白相对表达量均升高,均差异有统计学意义(P <0. 05)。结论沉默FAK基因表达可抑制HEC-1A细胞增殖、迁移及侵袭能力,可能与抑制PI3K/Akt/m TOR信号有关。

高血压大鼠左心室肥大心肌细胞中黏着斑激酶丝氨酸722和910磷酸化及其核转位

目的 探讨黏着斑激酶（FAK）在高血压致左心室肥大发生发展过程中的作用。方法以特发性高血压心力衰竭（SHHF）大白鼠为研究对象，通过免疫荧光标记、共聚焦显微镜及Western blot等方法，检测不同月龄SHHF大白鼠左心室心肌细胞中丝氨酸722磷酸化的FAK（FAK-pSer722）和丝氨酸910磷酸化的FAK（FAK-pSer910）的表达与分布。结果 2月龄时SHHF组与对照组比较，FAK-pSer722和FAK-pSer910表达无明显区别，在6、12和18月龄时SHHF组FAK-pSer722和FAK-pSer910表达均明显增加并表现出明显核内聚积。结论 在心肌失代偿肥大的发生发展过程中，存在着FAK丝氨酸722和丝氨酸910两位点的磷酸化增加和核内聚积，与心肌纤维的纵向性生长的过程相吻合，而与早期心肌向心性肥大无关。

实验性高血压大鼠左心室肥大心肌细胞中黏着斑激酶的表达

目的研究黏着斑激酶(FAK)在高血压心室肥大发生发展机制中的作用。方法以特发性高血压心力衰竭(SHHF)大鼠为研究对象,通过免疫荧光标记、共聚焦显微镜及 Western blot等方法,检测不同月龄 SHHF 大鼠左心室心肌细胞中 FAK 的表达及其分布。结果实验组 SHHF 大鼠与对照组 WKY 大鼠比较,FAK 的表达在2月龄时无明显变化(50.5±6.9比49.8±5.0,n=6,P>0.05),而6、12、18月龄的 SHHF 大鼠心肌细胞中,FAK 表达明显增加(130.6±3.0比47.3±1.3,144.7±5.4比46.4±3.1,141.4±9.8比48.5±2.2,各组 n=6,P<0.05),并且聚集在心肌细胞两端的闰盘和细胞核等部位。结论在心肌肥大的发展过程中,FAK 表达增加并有闰盘及核内的聚积,提示 FAK 与心肌肥大关系密切,可能参与了心肌肥大细胞信号转导的调控。

赖氨酸羟化酶2在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其对食管鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的通过观察赖氨酸羟化酶2(PLOD2)在食管鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织中的表达水平并分析其与临床病理参数间的相关性,探讨PLOD2调控食管鳞癌细胞侵袭转移的作用机制。方法应用免疫组织化学法检测60例食管鳞癌患者(收集于2016年1月至2017年12月新乡医学院第一附属医院)肿瘤组织和配对癌旁组织中PLOD2的表达水平并分析其与临床病理参数的关系;应用天狼猩红染色检测胶原纤维蛋白沉积;LV-vector、LV-over/PLOD2慢病毒载体转染食管鳞癌细胞系EC-109细胞,应用即时荧光定量PCR法检测PLOD2表达情况;细胞迁移和侵袭实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测PLOD2/AKT上皮-间质转化信号通路相关蛋白的表达。结果在食管鳞癌患者肿瘤组织中PLOD2的表达水平(81.7%,49/60)显著高于配对癌旁组织(8.3%,5/60;P<0.01);且与肿瘤浸润深度和淋巴结转移显著相关(P<0.01);天狼猩红染色显示,PLOD2高表达的食管鳞癌组织中胶原纤维沉积显著高于PLOD2低表达的组织(P<0.01);细胞迁移和侵袭实验结果显示,过表达PLOD2可提高EC-109细胞的迁移和侵袭能力,与LV载体组相比,差异有统计学意义(P<0.01);Western blot结果显示,过表达PLOD2可上调黏着斑激酶(FAK)/AKT信号通路相关蛋白p-FAK、p-AKT、波形蛋白等的表达。结论PLOD2在食管鳞癌组织中高表达,并与肿瘤迁移和侵袭密切相关;PLOD2促进食管鳞癌迁移和侵袭的机制可能与激活FAK/AKT信号通路、促进上皮-间质转化进程有关。