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膜型基质金属蛋白酶-1在黏着斑激酶相关非激酶调控肝星状细胞胶原代谢中的作用 被引量:2
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作者 魏娟 张晓岚 +4 位作者 敦志娜 赵春洪 申建刚 霍晓霞 安君艳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2155-2158,共4页
目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)对纤维连接蛋白(FN)刺激的肝星状细胞(HSC)膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)表达的影响并探讨MT1-MMP在FRNK调控HSC胶原代谢中的作用。方法:应用体外细胞培养技术,脂质体介导法进行FRNK质粒瞬时转染;... 目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)对纤维连接蛋白(FN)刺激的肝星状细胞(HSC)膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)表达的影响并探讨MT1-MMP在FRNK调控HSC胶原代谢中的作用。方法:应用体外细胞培养技术,脂质体介导法进行FRNK质粒瞬时转染;采用Western blotting法测定FRNK蛋白在瞬时转染时相应的表达,鉴定转染效果;分别应用Western blotting和RT-PCR方法测定MT1-MMP在HSC中的相应表达。结果:FRNK质粒成功转染HSC,于转染48h时,FRNK蛋白表达最强,P<0·05;FRNK转染后在基因水平上:MT1-MMP mRNA表达明显增加;翻译蛋白水平上:FRNK质粒转染HSC48h后,MT1-MMP蛋白表达量显著升高。结论:脂质体介导下FRNK质粒转染,可使外源性FRNK在HSC内大量表达,FRNK可能通过上调MT1-MMP值来抑制HSC胶原合成。 展开更多
关键词 肝星状细胞 黏着激酶 黏着激酶相关非激酶 膜型基质金属蛋白酶-1 胶原 肝硬化
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黏着斑激酶相关非激酶质粒转染对肝星状细胞凋亡的影响
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作者 申建刚 张晓岚 +1 位作者 霍晓霞 魏娟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2239-2244,共6页
目的:应用黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)表达质粒瞬时转染肝星状细胞(HSCs),探讨FRNK选择性抑制黏着斑激酶(FAK)磷酸化对FN刺激的HSCs凋亡的影响。方法:在体外培养HSCs,以FN刺激HSCs增殖,采用脂质体介导的方法进行FRNK表达质粒转染。应用... 目的:应用黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)表达质粒瞬时转染肝星状细胞(HSCs),探讨FRNK选择性抑制黏着斑激酶(FAK)磷酸化对FN刺激的HSCs凋亡的影响。方法:在体外培养HSCs,以FN刺激HSCs增殖,采用脂质体介导的方法进行FRNK表达质粒转染。应用膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术、DNA凝胶电泳技术和透射电镜技术检测细胞的凋亡,Western blotting及RT-PCR方法检测FRNK、FAK、p-FAK(Tyr397)、caspase-3蛋白及其mRNA表达。结果:FRNK表达质粒成功转染HSCs,在翻译后水平抑制FAK磷酸化;FRNK表达质粒转染HSCs48h后,细胞凋亡率增加,与空质粒组之间有显著差异[(25.37±1.92)%vs(9.28±1.05)%],P<0.01,伴随caspase-3在翻译和转录水平的增高[(264.17±12.60vs185.82±9.69),P<0.01;(4.19±0.48vs1.07±0.27),P<0.01]。结论:在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒,可使外源性的FRNK在HSCs内大量表达,在翻译后水平抑制FAK磷酸化;可以诱导FN刺激的HSCs发生凋亡。 展开更多
关键词 肝星状细胞 细胞凋亡 黏着激酶相关非激酶 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
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黏着斑激酶在鼻咽癌细胞系6-10B中的表达及其对Bcl-2和Bax表达的影响 被引量:1
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作者 王凤琴 章许晶 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第23期5844-5846,共3页
目的探讨黏着斑激酶(FAK)在鼻咽癌细胞6-10B中的表达及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的影响。方法鼻咽癌细胞6-10B培养后利用RNA干扰(RNAi)技术下调FAK在6-10B中的表达水平,通过RT-PCR、Real-time PCR、Western印迹检测其干扰效率,通过Wes... 目的探讨黏着斑激酶(FAK)在鼻咽癌细胞6-10B中的表达及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的影响。方法鼻咽癌细胞6-10B培养后利用RNA干扰(RNAi)技术下调FAK在6-10B中的表达水平,通过RT-PCR、Real-time PCR、Western印迹检测其干扰效率,通过Western印迹检测干扰后凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平,通过Hoechst染色观察细胞凋亡形态。结果干扰后FAK在鼻咽癌细胞6-10B中表达量较低、下调明显(P<0.05);鼻咽癌细胞系6-10B干扰FAK后,Bcl-2和Bax的表达量发生较明显改变(P<0.05);Hoechst染色结果显示干扰后细胞出现明显的凋亡形态。结论干扰FAK后促进鼻咽癌细胞凋亡,提示可以通过下调FAK表达水平促进肿瘤细胞凋亡,为鼻咽癌的基因治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 黏着激酶 鼻咽癌细胞 RNA干扰 凋亡相关蛋白
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小鼠黏着斑相关蛋白在不同组织中的表达分析 被引量:2
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作者 张旭 马红 +2 位作者 刘娣 孙亚蒙 汪亮 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第6期59-61,共3页
黏着斑相关蛋白(focal adhesion associated protein,FAAP)是近几年新发现的一种分布广泛的蛋白,该蛋白由小鼠D10Wsu52e基因编码。为探索D10Wsu52e基因在小鼠各组织中的表达情况,进一步预测该蛋白的功能,提取小鼠心脏、肾脏、脾脏、肺... 黏着斑相关蛋白(focal adhesion associated protein,FAAP)是近几年新发现的一种分布广泛的蛋白,该蛋白由小鼠D10Wsu52e基因编码。为探索D10Wsu52e基因在小鼠各组织中的表达情况,进一步预测该蛋白的功能,提取小鼠心脏、肾脏、脾脏、肺、背肌、腿肌、小肠、睾丸、附睾及卵巢、子宫的总RNA,利用实时荧光定量PCR技术,检测D10Wsu52e基因在各组织中的相对表达量,寻找组织表达规律及其潜在的功能。结果显示:所提取的小鼠11种组织中均有D10Wsu52e基因的表达,其相对表达量在各组织之间差异显著(P<0.05);D10Wsu52e基因在小鼠11种组织中的表达量由高到低依次为背肌、子宫、卵巢、腿肌、附睾、睾丸、肾脏、脾脏、心脏、肺、小肠,其中D10Wsu52e基因在心脏、肺、小肠中的相对表达量显著低于背肌和子宫(P<0.05)。结果表明:D10Wsu52e基因可能对调控啮齿动物多种组织器官,特别是生殖器官及骨骼肌发育具有一定的作用。 展开更多
关键词 黏着相关蛋白(faap) D10Wsu52e基因 小鼠 组织表达谱
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黏着斑激酶相关非激酶对CFSC细胞基质金属蛋白酶-2及其抑制因子mRNA表达的影响 被引量:5
5
作者 魏娟 张晓岚 +3 位作者 姚冬梅 霍晓霞 申建刚 敦志娜 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期757-761,共5页
目的探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)对纤维连接蛋白刺激的肝星状细胞CFSC胶原代谢的影响及其分子机制。方法用体外细胞培养技术、脂质体介导法进行FRNK质粒瞬时转染;采用Western blot方法测定FRNK蛋白表达,鉴定转染效果;用^3H Pr... 目的探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)对纤维连接蛋白刺激的肝星状细胞CFSC胶原代谢的影响及其分子机制。方法用体外细胞培养技术、脂质体介导法进行FRNK质粒瞬时转染;采用Western blot方法测定FRNK蛋白表达,鉴定转染效果;用^3H Pro掺入技术测定CFSCI型胶原的合成;用RTPCR方法测定FRNK转染前后基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其抑制因子(TIMP2)基因在CFSC中表达的变化情况。结果FRNK质粒成功转染CFSC,Ⅰ型胶原合成下降;MMP2基因表达上升,TIMP2基因表达下降,MMP2/TIMP2比值明显上升。结论外源性FRNK在CFSC内大量表达后,CFSC胶原表达减少;FRNK可能通过调节MMP2/TIMP2比值来促进CFSC的胶原降解。 展开更多
关键词 肝星状细胞 胶原Ⅰ型 明胶酶A 金属蛋白酶组织抑制剂2 黏着激酶相关非激酶
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乳腺癌中黏着斑激酶、抑癌基因PTEN编码蛋白的表达与生物学行为相关性分析 被引量:8
6
作者 黄玉钿 张声 +3 位作者 郑曦 吴钦穗 黄双月 杨发端 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1201-1202,i0001,共3页
目的研究乳腺癌组织中黏着斑激酶(FAK)和PTEN蛋白的表达与肿瘤分化、浸润转移的关系,揭示细胞信号转导系统与乳腺癌发生发展的关系,同时为乳腺癌的基因治疗提供依据。方法应用免疫组织化学SP法检测92例乳腺癌组织和30例乳腺良性病变组织... 目的研究乳腺癌组织中黏着斑激酶(FAK)和PTEN蛋白的表达与肿瘤分化、浸润转移的关系,揭示细胞信号转导系统与乳腺癌发生发展的关系,同时为乳腺癌的基因治疗提供依据。方法应用免疫组织化学SP法检测92例乳腺癌组织和30例乳腺良性病变组织中FAK、PTEN的表达情况及其与临床病理参数的关系。结果(1)在92例乳腺癌中FAK和PTEN的阳性表达率分别为69.6%和51.1%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);(2)FAK表达与乳腺癌肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、临床分期呈正相关(P<0.01),PTEN表达与乳腺癌组织学分级、腋窝淋巴结转移、临床分期呈负相关(P<0.05);(3)乳腺癌组织FAK表达与PTEN表达呈负相关(P<0.01)。结论乳腺癌FAK的高表达和PTEN的缺失表达与肿瘤发生发展、浸润转移密切相关;检测这些指标,有助于判断乳腺癌的恶性程度及生物学行为。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 PTEN 免疫组织化学 抑癌基因PTEN 乳腺癌组织 黏着激酶 生物学行为 相关性分析 编码蛋白 腋窝淋巴结转移
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川芎含药血清对大鼠肝星状细胞大麻素受体1相关信号通路的影响 被引量:9
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作者 何娟 曹文富 +1 位作者 王海兰 韩仕庆 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1397-1401,共5页
目的观察川芎含药血清对血小板源生长因子(PDGF-BB)活化的大鼠肝星状细胞(HSCs)大麻素受体1(CB1)、黏着斑激酶(FAK)及磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法制备川芎含药血清,MTT法检测川... 目的观察川芎含药血清对血小板源生长因子(PDGF-BB)活化的大鼠肝星状细胞(HSCs)大麻素受体1(CB1)、黏着斑激酶(FAK)及磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法制备川芎含药血清,MTT法检测川芎含药血清对肝星状细胞增殖情况,Western blot法分析肝星状细胞CB1、FAK、p-Akt蛋白的表达。结果与正常对照组相比,PDGF-BB作用24 h能刺激HSCs增殖,上调CB1、FAK、p-Akt蛋白的表达;川芎含药血清、秋水仙碱及大麻素受体1抑制剂AM251均能明显抑制上述效应;且加入AM251后,川芎含药血清对上述效应的抑制效果增强,且作用呈剂量依赖性。结论川芎含药血清可能通过大麻素相关信号通路抑制HSCs增殖,从而发挥防治肝纤维化的作用。 展开更多
关键词 川芎含药血清 肝纤维化 肝星状细胞 大麻素受体1相关信号通路 黏着激酶 磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶
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黏着斑激酶相关非激酶对肝星状细胞凋亡及细胞外信号调节激酶的影响 被引量:6
8
作者 申建刚 张晓岚 霍晓霞 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期849-853,共5页
目的应用黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)表达质粒瞬时转染纤维连接蛋白(FN)预刺激的肝星状细胞(HSC),探讨FRNK对HSC凋亡及细胞外信号调节激酶(ERK)的影响。方法在体外,以FN诱导HSC增殖,采用脂质体介导的方法用FRNK表达质粒瞬时... 目的应用黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)表达质粒瞬时转染纤维连接蛋白(FN)预刺激的肝星状细胞(HSC),探讨FRNK对HSC凋亡及细胞外信号调节激酶(ERK)的影响。方法在体外,以FN诱导HSC增殖,采用脂质体介导的方法用FRNK表达质粒瞬时转染HSC,应用膜联蛋白/碘化丙啶双标记流式细胞术、DNA凝胶电泳技术和透射电镜技术检测细胞的凋亡,Western blot及RT-PCR方法检测FRNK、黏着斑激酶(FAK)、p-FAK(Tyr^397)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)、ERK1、PERK蛋白及其mRNA表达。结果FRNK表达质粒成功转染HSC,在翻译后水平抑制FAK磷酸化。与空质粒组比较,FRNK表达质粒转染HSC 48h后,HSC凋亡率由9.28%±1.05%增至25.37%±1.92%(P〈0.01),caspase-3蛋白由185.82±9.69增至264.17±12.60(P〈0.01),caspase-3mRNA由1.07±0.27增至4.19±0.48(P〈0.01)。FRNK抑制FAK磷酸化和在翻译和转录水平抑制ERK1、p-ERK的表达,而FN则促进FAK和ERK1、pERK在翻译和转录水平的表达。结论在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒,可使外源性的FRNK在HSC内大量表达,在翻译后水平抑制FAK磷酸化;并可能通过FAK-ERK信号转导通路诱导FN刺激的HSC发生凋亡。 展开更多
关键词 细胞凋亡 肝星状细胞 有丝分裂素激活蛋白激酶类 黏着激酶 黏着激酶相关非激酶
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敲降Ras相关结合蛋白23表达对食管鳞状细胞癌细胞侵袭和迁移的影响及机制 被引量:1
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作者 马刚 梁寒 +1 位作者 张汝鹏 孙意 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期108-117,共10页
目的探讨Ras相关结合蛋白23(RAB23)在食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)细胞侵袭和迁移中的作用和机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测16例配对食管鳞癌及癌旁正常组织中RAB23 mRNA的表达。比较基因表达综合(GEO)数据库的GSE20347... 目的探讨Ras相关结合蛋白23(RAB23)在食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)细胞侵袭和迁移中的作用和机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测16例配对食管鳞癌及癌旁正常组织中RAB23 mRNA的表达。比较基因表达综合(GEO)数据库的GSE20347数据集中食管鳞癌和配对癌旁正常组织RAB23 mRNA的表达水平。免疫组织化学检测106例配对食管鳞癌和癌旁正常组织、33例淋巴结阳性与10例淋巴结阴性患者原发灶与淋巴结组织中RAB23蛋白含量。在食管鳞癌KYSE30和KYSE150细胞中瞬时敲降RAB23表达(转染si-RAB23-1和si-RAB23-9)或者稳定敲降RAB23表达(转染sh-RAB23), 采用Western blot法验证RAB23敲降效率, 采用细胞计数试剂盒8法和裸鼠皮下成瘤实验检测食管鳞癌细胞的增殖能力, 采用Transwell实验和裸鼠尾静脉-肺转移实验检测食管鳞癌细胞的侵袭和迁移能力, 采用细胞黏附实验检测食管鳞癌细胞的黏附能力, 采用转录组测序技术分析RAB23敲降后对细胞转录谱的影响, 并通过Western blot检测验证相关信号通路。结果 16例食管鳞癌组织中RAB23 mRNA表达水平为0.009 7±0.008 9, 高于癌旁正常组织[0.003 2±0.003 7, P=0.006]。对GEO数据库GSE20347数据集中食管鳞癌和配对癌旁正常组织表达谱的生信分析显示, 食管鳞癌组织中RAB23 mRNA表达水平为4.30±0.25, 高于癌旁正常组织(4.10±0.17, P=0.037)。106例食管鳞癌组织中, 51例RAB23低表达, 55例RAB23高表达;而配对癌旁正常组织中, 82例RAB23低表达, 24例RAB23高表达, 食管鳞癌组织中RAB23表达水平高于配对癌旁正常组织(P<0.001)。33例淋巴结阳性食管鳞癌组织中, 1例RAB23低表达, 32例RAB23高表达;10例淋巴结阴性的食管鳞癌组织中, 3例RAB23低表达, 7例RAB23高表达。淋巴结阳性食管鳞癌组织中RAB23表达水平高于淋巴结阴性食管鳞癌组织(P=0.024)。33例阳性淋巴结组织中, 1例RAB23低表达, 32例RAB23高表达, 而10例阴性淋巴结组织中均为RAB23低表达。阳性淋巴结组织中RAB23表达水平高于阴性淋巴结组织(P<0.001)。瞬时或稳定敲降RAB23后, KYSE30细胞体外和体内的增殖能力无明显变化, KYSE30细胞的细胞侵袭和迁移能力下降, 而KYSE150细胞仅侵袭能力下降, 迁移能力无明显变化。sh-RAB23组KYSE30细胞黏附细胞的数量为(313.75±89.34)个, 少于sh-NC组[(1 030.75±134.29)个, P<0.001]。sh-RAB23组KYSE150细胞的黏附细胞数为(710.5±31.74)个, 也少于sh-NC组[(1 005.75±61.09)个, P<0.001]。转录组测序分析显示, 敲降RAB23后, si-RAB23-1组和si-RAB23-9组KYSE30细胞中黏着斑相关信号通路均被削弱, sh-RAB23组KYSE30和KYSE150细胞中p-FAK和p-paxillin表达水平降低。结论 RAB23在食管鳞癌组织中高表达, 与淋巴结转移有关。敲低RAB23表达后能够削弱黏着斑相关信号通路, 进而抑制食管鳞癌细胞的侵袭、迁移和黏附。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 Ras相关结合蛋白23 黏着 侵袭 迁移
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结肠癌组织中Paxillin的表达变化及意义
10
作者 秦军 马利林 +2 位作者 徐美荣 樊勇 柯靖 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第14期50-51,共2页
目的观察结肠癌组织中Paxillin的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫荧光组织化学法检测40例结肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中的Paxillion。结果 Paxillin在结肠癌组织中表达量为60.80±13.90,正常组织为40.10±9.37,两者比较,... 目的观察结肠癌组织中Paxillin的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫荧光组织化学法检测40例结肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中的Paxillion。结果 Paxillin在结肠癌组织中表达量为60.80±13.90,正常组织为40.10±9.37,两者比较,P<0.05;Paxillin表达量与结肠癌组织浸润程度、分化程度及有无淋巴结转移均有关(P均<0.05)。结论结肠癌组织中Paxillin表达增加;Paxillin可作为判断结肠癌生物学行为的指标之一。 展开更多
关键词 大肠肿瘤 结肠癌 黏着相关蛋白 蛋白
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下咽鳞癌组织中Paxillin mRNA的表达变化及意义
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作者 邱晓霞 郑宏良 +3 位作者 尤易文 张振新 陈剑秋 夏思文 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第14期96-97,共2页
目的观察下咽鳞癌组织中桩蛋白(Paxillin)mRNA的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用荧光定量RT-PCR法检测38例下咽鳞癌患者癌组织及癌旁组织中的Paxillin mRNA。结果下咽癌组织中Paxillin mRNA表达量为12 871.5,正常组织中为3 405.0,... 目的观察下咽鳞癌组织中桩蛋白(Paxillin)mRNA的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用荧光定量RT-PCR法检测38例下咽鳞癌患者癌组织及癌旁组织中的Paxillin mRNA。结果下咽癌组织中Paxillin mRNA表达量为12 871.5,正常组织中为3 405.0,两者比较,P<0.05。下咽癌组织中,低、中、高分化者Paxillin mRNA表达量分别为17 163.0、11 333.5、6 760.5,三者比较,P>0.05;浸润程度浅者为7 821.0,深者为16 783.0,两者比较,P<0.05;有淋巴结转移者为19 832.0,无转移者为6 721.0,两者比较,P<0.05。结论下咽鳞癌组织中Paxil-lin mRNA表达增加,Paxillin与下咽癌的发生发展有关。 展开更多
关键词 咽部肿瘤 下咽癌 黏着相关蛋白 蛋白
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FAK-ERK信号转导通路在FRNK抑制肝星状细胞胶原合成中的作用 被引量:2
12
作者 申建刚 张晓岚 +3 位作者 魏娟 霍晓霞 桑荣霞 安君艳 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第14期1402-1405,共4页
目的:探讨FAK-ERK信号转导通路在黏着斑激酶相关非激酶(FAK-related non-kinase,FRNK)质粒转染抑制肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)胶原合成中的作用.方法:在体外,以FN诱导HSCs增殖,采用脂质体介导的方法用FRNK表达质粒瞬时转... 目的:探讨FAK-ERK信号转导通路在黏着斑激酶相关非激酶(FAK-related non-kinase,FRNK)质粒转染抑制肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)胶原合成中的作用.方法:在体外,以FN诱导HSCs增殖,采用脂质体介导的方法用FRNK表达质粒瞬时转染HSCs,利用3H-Pro掺入技术测定HSCsⅠ型胶原的合成,Western blot及RT-PCR方法检测FRNK、FAK、p-FAK(Tyr397)、ERK蛋白和mRNA的表达.结果:FRNK表达质粒成功转染HSCs,在翻译后水平抑制FAK磷酸化.在FRNK转染HSC48h后胶原合成能力较空质粒组显著下降(498.17±73.20vs748.33±61.30,P<0.01).FRNK抑制FAK磷酸化和在翻译和转录水平抑制ERK1、p-ERK的表达,而FN则促进FAK和ERK1、p-ERK在翻译和转录水平的表达.结论:FRNK可以使HSCs胶原合成能力降低,FAK-ERK信号转导通路可能发挥了负调控作用. 展开更多
关键词 肝星状细胞 黏着激酶相关非激酶 细胞 外信号调节激酶 胶原 免疫蛋白印迹
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FRNK高表达诱导HSC凋亡后MMP-2及TIMP-2的变化 被引量:1
13
作者 申建刚 张晓岚 +3 位作者 魏娟 霍晓霞 桑荣霞 安君艳 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2009年第9期943-947,共5页
目的探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)诱导肝星状细胞(HSC)凋亡后基质金属蛋白酶-2及其抑制剂的变化。方法在体外,以纤维连接蛋白(FN)刺激HSC增殖,在脂质体介导下用FRNK表达质粒瞬时转染HSC,应用膜联蛋白/碘化丙啶双标记流式细胞术和透... 目的探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)诱导肝星状细胞(HSC)凋亡后基质金属蛋白酶-2及其抑制剂的变化。方法在体外,以纤维连接蛋白(FN)刺激HSC增殖,在脂质体介导下用FRNK表达质粒瞬时转染HSC,应用膜联蛋白/碘化丙啶双标记流式细胞术和透射电镜检测细胞的凋亡,Western blot检测FRNK、FAK、p-FAK(Tyr397)、MMP-2、TIMP-2蛋白表达。结果FRNK表达质粒成功转染HSC,在翻译后水平抑制FAK磷酸化。与空质粒组比较,FRNK表达质粒转染HSC 48 h后,HSC凋亡率由(9.28%±1.05%)增加至(25.37%±1.92%)(P<0.01);同时,FRNK在翻译水平上调MMP-2表达、抑制TIMP-2表达。结论在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒可诱导HSC发生凋亡,MMP-2/TIMP-2比值上调可能参与了该调节过程。 展开更多
关键词 肝星状细胞 凋亡 黏着激酶相关非激酶 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶组织抑制剂-2
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改良的大鼠鼠尾增生性瘢痕动物模型制备方法 被引量:1
14
作者 徐祥文 邝依敏 +4 位作者 黄昕 高雅姗 李海洲 顾舒晨 昝涛 《组织工程与重建外科杂志》 2020年第1期22-26,38,共5页
目的建立增生性瘢痕的有效动物模型。方法于SD大鼠鼠尾形成6 mm矩形创面,根据创面边缘距鼠尾根部的距离分为A组(3 cm)和B组(5 cm)。术后16 d进行牵拉并测量创面牵张力。于牵拉7、14、21、28 d拍照记录两组的瘢痕的大体变化。于牵拉28 d... 目的建立增生性瘢痕的有效动物模型。方法于SD大鼠鼠尾形成6 mm矩形创面,根据创面边缘距鼠尾根部的距离分为A组(3 cm)和B组(5 cm)。术后16 d进行牵拉并测量创面牵张力。于牵拉7、14、21、28 d拍照记录两组的瘢痕的大体变化。于牵拉28 d检测两组瘢痕中张力相关蛋白局部黏着斑激酶(FAK)和共激活因子相关蛋白(YAP)活化情况。结果A、B两组牵拉即刻的牵张力分别增加了(22.78%±2.452%)和(15.46%±2.193%)(P<0.05)。相比B组,A组瘢痕厚度显著增加(P<0.05),胶原束粗大呈漩涡样排列紊乱,且α-SMA蛋白表达高于B组(P<0.05)。A组FAK和YAP阳性表达率均较B组增高(P<0.05;P<0.001)。结论于鼠尾3 cm处建立创面进行牵拉可以建立更接近于人增生性瘢痕的动物模型。 展开更多
关键词 增生性瘢痕 张力 大鼠 局部黏着激酶 转录共激活因子相关蛋白
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吉马酮调节FAK/YAP信号通路对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的影响
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作者 李明 范敏娜 《安徽医学》 2023年第12期1419-1425,共7页
目的 探讨吉马酮(GMC)调节局部黏着斑激酶(FAK)/Yes相关蛋白(YAP)通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法 将A549/DDP细胞分为CK组、低剂量GMC组(GMC-L组,5μmol/L)、中剂量GMC组(GMC-M组,10μmol/L)、高剂量GMC组(G... 目的 探讨吉马酮(GMC)调节局部黏着斑激酶(FAK)/Yes相关蛋白(YAP)通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法 将A549/DDP细胞分为CK组、低剂量GMC组(GMC-L组,5μmol/L)、中剂量GMC组(GMC-M组,10μmol/L)、高剂量GMC组(GMC-H组,20μmol/L)、GMC-H+pcDNA组(20μmol/L+转染pcDNA)、GMC-H+pcDNA-FAK组(20μmol/L+转染pcDNA-FAK)。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况;检测多药耐药基因1(MDR1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化的FAK(p-FAK)、YAP蛋白表达情况。结果 与CK组比较,GMC-L组、GMCM组、GMC-H组A549/DDP细胞OD450值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与GMC-H组、GMC-H+pcDNA组比较,GMC-H+pcDNA-FAK组A549/DDP细胞OD_(450)值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达升高,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 GMC可能通过抑制FAK/YAP信号通路减弱NSCLC细胞DDP耐药性。 展开更多
关键词 吉马酮 局部黏着激酶/Yes相关蛋白通路 非小细胞肺癌 顺铂 耐药性
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基于蛋白质组学分析参芎葡萄糖注射液拮抗H_(2)O_(2)诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制 被引量:3
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作者 陆定艳 吴忠秀 +5 位作者 孙佳 陆苑 王永林 李勇军 郑林 刘亭 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期141-149,共9页
目的:利用串联质谱标记(TMT)定量蛋白质组学技术探究参芎葡萄糖注射液(SGI)拮抗过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制。方法:体外培养H9c2细胞,H_(2)O_(2)诱导H9c2细胞建立氧化损伤模型,利用细胞增殖与毒性检测法(MTS)... 目的:利用串联质谱标记(TMT)定量蛋白质组学技术探究参芎葡萄糖注射液(SGI)拮抗过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制。方法:体外培养H9c2细胞,H_(2)O_(2)诱导H9c2细胞建立氧化损伤模型,利用细胞增殖与毒性检测法(MTS)检测细胞存活率,高效液相色谱法(HPLC)进行肽段分级,超高效液相色谱-质谱联用技术检测H9c2细胞的蛋白表达,使用MaxQuant(v1.5.2.8)进行数据检索,高分辨质谱定量分析筛选差异表达蛋白,通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对差异表达蛋白进行生物信息学分析,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内脂质结合蛋白2(Plin2)和原肌球蛋白1(Tpm1)的蛋白表达水平进行验证。结果:通过谱图解析鉴定有48608个特异性肽段,5903个可定量蛋白。与模型组比较,SGI组有82个差异表达的蛋白,其中有22个蛋白上调,60个蛋白下调。GO分析结果显示,差异表达蛋白主要参与程序性细胞死亡调节、细胞增殖调控、心血管系统发育和细胞迁移等生物进程。KEGG分析结果表明,这些蛋白与过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR),黏着斑和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt),Ras相关蛋白1(Rap1)等通路有关。Western blot结果显示,与模型组比较,SGI能显著增加Plin2蛋白表达水平,显著降低Tpm1蛋白表达水平(P<0.01),与蛋白质组学结果一致。结论:提示SGI可能通过调控PPAR,黏着斑,PI3K/Akt和Rap1等通路抑制细胞凋亡,从而拮抗H_(2)O_(2)诱导细胞氧化损伤,但需要后续实验进一步验证研究。 展开更多
关键词 参芎葡萄糖注射液 氧化损伤 蛋白质组学 过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)通路 黏着通路 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路 Ras相关蛋白1(Rap1)通路
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