I型单纯疱疹病毒感染对人角膜上皮细胞基质金属蛋白酶-2和黏着斑激酶表达的影响

背景研究表明，I型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染可导致角膜上皮细胞（CECs）基质金属蛋白酶（MMPs）表达、分泌和活性改变。黏着斑激酶（FAK）对MMPs的表达、释放和激活起着重要的调节作用。人角膜上皮感染HSV-1后FAK的表达变化鲜有报道。目的探讨HSV-1感染对体外培养的人CECsMMP-2和FAK表达的影响。方法以HSV-1（F株）感染体外培养的人CECs，应用逆转录PCR（RT—PCR）、免疫印迹法、免疫组织化学法分别于感染后2、20、40h检测人CECsMMP-2、FAK及磷酸化黏着斑激酶（p-FAK）的表达情况。结果RT．PCR法检测结果显示，感染细胞的MMP-2mRNA、FAKmRNA较非感染细胞（即加入无病毒无血清培养液的阴性对照组）的表达明显增强，不同时间点间比较差异无统计学意义，组别与时间点间不存在交互作用（MMP-2mRNA：F目目=0．968，P=0．436；F蚴I=47．649，P=0．000；F女Ⅱ#目=0．757，P=0．536．FAKmRNA：F时间=0．658，P=0．631；F组别=35．182，P=0．000；F交互作用=1．386，P=0．137）。Westernblot法检测结果显示，感染后2h时p-FAK、FAK、MMP-2在感染细胞与非感染细胞间差异均无统计学意义（P’0．05），感染后20h、40h感染细胞的蛋白表达较非感染细胞均明显增强（P〈0．05）。免疫组织化学染色检测结果显示，随着感染时间的延长，MMP-2、FAK、p-FAK蛋白染色阳性细胞数目增多。结论在HSV-1感染早期，FAK的激活可刺激MMPs活性增强，从而加速角膜溃疡及坏死性病变的形成。

川芎嗪对人肝癌细胞钙激活中性蛋白酶-2、黏着斑激酶及迁移侵袭能力的影响

目的探讨川芎嗪(TMP)对人肝癌细胞钙激活中性蛋白酶(Calpain)-2、黏着斑激酶(FAK)及迁移侵袭能力的影响,以了解其抑制肝癌的机制。方法将人肝癌细胞(MHCC97-H)分为对照组和TMP组,TMP组予以TMP 1.0 mg/ml干预24 h,采用Western印迹检测两组Calpain-2、FAK蛋白表达情况,划痕实验、Transwell实验检测MHCC97-H迁移、侵袭能力。结果与对照组比较,TMP组Calpain-2、FAK蛋白表达均明显下调(P<0.05);其迁移率、穿膜细胞数及吸光度值均明显下降(P<0.05)。结论下调肝癌细胞系(MHCC97-H)的Calpain-2、FAK水平可能是TMP抗肝癌作用机制之一。

Kindlin-2在前列腺癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探究黏着斑蛋白-2(Kindlin-2)表达与前列腺癌(PCa)患者临床病理参数和预后的关系。方法选取本院确诊并治疗的109例前列腺癌患者作为研究对象,同期93例良性前列腺增生(BPH)患者作为对照,对所有前列腺癌患者进行3年随访。采用组织芯片结合免疫组化染色法检测不同前列腺组织Kindlin-2表达水平,分析Kindlin-2表达与PCa患者临床病理参数及预后之间的关系。结果 Kindlin-2在前列腺癌组织中高表达率明显高于BPH组织(P<0.05)。Kindlin-2蛋白表达高低与患者TNM分期、前列腺特异性抗原(PSA)水平、Gleason评分及前列腺癌危险程度有关(P<0.05);前列腺癌患者3年生存率比较,Kindlin-2高表达低于低表达(P<0.05)。Cox分析结果显示,Kindlin-2高表达、PSA水平、Gleason评分、临床分期、淋巴结转移、远处转移、危险因素分级是前列腺癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 Kindlin-2在前列腺癌组织中高表达,可能参与前列腺癌的发生、发展,并影响患者预后,可作为前列腺癌诊断及预后评估的有效生物标志物。

Kindlin-2与整合素在机体中的研究进展

Kindlin-2蛋白是Kindlin家族成员之一,属于黏着斑蛋白,含有一个典型的FERM结构域。Kindlin-2可通过FERM结构域与整合素β亚基胞内段结合,在细胞-细胞间连接、细胞-细胞外基质黏附、细胞迁移、细胞骨架重构等细胞行为以及整合素介导的双向信号转导过程中发挥重要作用,参与胚胎形成、止血、免疫反应、肿瘤转移、器官发育等过程。Kindlin-2基因缺陷将导致胚胎、心脏及血管等组织器官发育异常,且Kindlin-2在很多恶性肿瘤中表达增加,影响肿瘤细胞的侵袭性和转移能力。因此,对Kindlin-2与整合素作用机制研究的深入,不仅有助于深化对Kindlin家族蛋白和整合素的认识,还有助于Kindlin-2相关疾病的诊断和治疗。

前列腺癌组织中SKP2、Kindlin-2的表达变化及意义

目的观察前列腺癌组织中S期激酶相关蛋白2(SKP2)和黏着斑蛋白-2(Kindlin-2)的表达变化并探讨其意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测90例份前列腺癌组织及40例份良性前列腺增生(BPH)组织中SKP2、Kindlin-2表达,分析癌组织中SKP2、Kindlin-2表达与患者临床病理特征的关系及两者间相关性,Kaplan-Meier生存分析比较不同水平SKP2、Kindlin-2患者3年总体生存率(OS)的差异。结果前列腺癌组织中SKP2、Kindlin-2的相对表达量均高于BPH组织(P均<0.05)。前列腺癌组织中SKP2、Kindlin-2表达与患者病理Gleason评分、肿瘤TNM分期有关(P均<0.05)。前列腺癌组织中SKP2与Kindlin-2表达呈正相关(r=0.517,P=0.013)。Kaplan-Meier分析结果显示,前列腺癌组织中SKP2、Kindlin-2高表达患者3年生存率分别低于SKP2、Kindlin-2低表达患者(P均<0.05)。结论前列腺癌组织中SKP2、kindlin-2表达增高,二者联合检测有助于前列腺癌患者的病情评估及预后判断。

乳腺癌组织中基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9和E-cadherin的表达及临床病理意义

目的探讨乳腺癌组织中基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9和E-cadherin的表达水平及临床病理意义。方法用免疫组化方法检测了该院72例乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9以及E-cadherin的表达。结果55.6%(40/72)的乳腺癌组织中MMP-2表达阳性,63.9%(46/72)MMP-9表达阳性,与对照组比较差异有显著性(P<0.01);TNMⅢ、Ⅳ期患者MMP-2、MMP-9阳性分别为48.1%和83.3%,均明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者(P<0.01);两种酶的表达均与Her-2表达相关(P<0.01)。E-cadherin在正常乳腺组织中均为阳性表达,E-cadherin表达阴性与临床分期和肿瘤的病理分级密切相关(P<0.05)。结论乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9高表达及E-cadherin的表达下调可能参予乳腺癌的侵袭转移,联合检测三者在乳腺癌组织中的表达对推测乳腺癌的侵袭转移及预后有一定意义。

SKP2、kindlin-2在前列腺癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系

目的探讨前列腺癌组织中细胞S相激酶相关蛋白2(SKP2)、kindlin-2蛋白的表达情况及其与患者临床特征的关系。方法选取70例前列腺癌患者的前列腺癌组织标本和同期70例前列腺良性增生患者的前列腺良性增生组织标本。采用免疫组织化学染色检测两种组织中SKP2、kindlin-2蛋白的阳性表达情况,并分析不同T分期、N分期、M分期、前列腺特异性抗原(PSA)水平、Gleason评分前列腺癌患者前列腺癌组织中SKP2、kindlin-2蛋白的阳性表达情况。结果前列腺癌患者前列腺癌组织中kindlin-2、SKP2蛋白的阳性表达率均明显高于前列腺良生增生患者的前列腺良性增生组织(P﹤0.01)。T分期为T3～T4期、N分期为N_1期、Gleason评分为8～10分前列腺癌患者前列腺癌组织中kindlin-2蛋白的阳性表达率均高于T分期为T_1～T_2期、N分期为N_0期、Gleason评分为2～7分的前列腺癌患者(P﹤0.05)。T分期为T_3～T_4期、N分期为N_1期、PSA水平﹥20 ng/ml、Gleason评分为8～10分前列腺癌患者前列腺癌组织中SKP2蛋白的阳性表达率均高于T分期为T_1～T_2期、N分期为N_0期、PSA水平≤20 ng/ml、Gleason评分为2～7分的前列腺癌患者(P﹤0.05)。结论前列腺癌组织中SKP2、kindlin-2蛋白的阳性表达率明显升高,并与前列腺癌的发生、发展密切相关。

胰岛素样生长因子结合蛋白-2在U251细胞中对FAK磷酸化的促进作用

目的探讨外源性胰岛素样生长因子结合蛋白-2(insulin-like growth factor binding protein-2,IGFBP-2)在人胶质母细胞瘤细胞株U251细胞中,对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)磷酸化的影响,从而提示IGFBP-2增强肿瘤细胞迁移、侵袭的机制。方法通过免疫荧光染色及蛋白印记试验检测IGFBP-2对FAK磷酸化的影响。结果在U251细胞中,500ng/mlIGFBP-2作用5分钟后,FAK磷酸化增强近一倍(P<0.05),作用30min后,FAK磷酸化增强近2倍(P<0.01)。结论IGFBP-2可能通过FAK信号通路促进胶质瘤细胞迁移和侵袭。

肺腺癌原发灶及其胸腔渗出液中MMP-2、E-cadherin和β-catenin的表达

目的 研究基质金属蛋白酶2(MMP 2)、上皮钙黏蛋白(E cadherin,E- cad)和β- 连环蛋白(β- catenin)在肺腺癌原发灶及其恶性胸腔渗出液中的表达和相关性及其与患者生存的关系。方法 采用免疫组织化学S- P法检测MMP 2、E cad和β- catenin在30例人原发性肺腺癌与肺腺癌并发的恶性胸腔渗出液中癌细胞表达的关系。结果 MMP 2、E cad和βcatenin在肺腺癌原发灶的阳性表达率分别低于恶性胸腔渗出液。肺腺癌原发灶中MMP 2、E- cad和β- catenin的表达与肺腺癌分化程度和淋巴结转移能力有关(P<0 .05);MMP 2和E -cad在原发灶中的表达呈负相关,在恶性胸腔渗出液中的表达无相关。E -cad和β-catenin在原发灶中的表达呈正相关,在恶性胸腔渗出液中的表达无相关。MMP 2阳性组肺腺癌患者的累积生存率低于MMP- 2阴性组(P<0 .05)。β- catenin阴性组肺腺癌患者的累积生存率低于β-catenin阳性组(P<0. 05)。结论 肺腺癌原发灶MMP 2的表达上调与E cad和β- catenin的表达下调在肺腺癌浸润、转移中起重要作用,可作为预测肺腺癌预后的指标之一。

FRNK高表达诱导HSC凋亡后MMP-2及TIMP-2的变化

目的探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)诱导肝星状细胞(HSC)凋亡后基质金属蛋白酶-2及其抑制剂的变化。方法在体外,以纤维连接蛋白(FN)刺激HSC增殖,在脂质体介导下用FRNK表达质粒瞬时转染HSC,应用膜联蛋白/碘化丙啶双标记流式细胞术和透射电镜检测细胞的凋亡,Western blot检测FRNK、FAK、p-FAK(Tyr397)、MMP-2、TIMP-2蛋白表达。结果FRNK表达质粒成功转染HSC,在翻译后水平抑制FAK磷酸化。与空质粒组比较,FRNK表达质粒转染HSC 48 h后,HSC凋亡率由(9.28%±1.05%)增加至(25.37%±1.92%)(P<0.01);同时,FRNK在翻译水平上调MMP-2表达、抑制TIMP-2表达。结论在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒可诱导HSC发生凋亡,MMP-2/TIMP-2比值上调可能参与了该调节过程。

Kindlin-2诱导胆囊癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移的实验研究

目的 探讨黏着斑蛋白Kindlin-2对胆囊癌细胞生物学行为的影响及相关分子机制.方法 收集2012年9月至2013年5月在郑州大学第一附属医院肝胆胰外科接受手术切除的30例胆囊癌组织和癌旁组织标本.使用real-time PCR和免疫组化方法检测胆囊癌组织和癌旁组织标本中Kindlin-2表达水平;通过构建质粒和转染使胆囊癌细胞株GBC-SD、SGC-996过表达Kindlin-2,应用细胞黏附实验观察胆囊癌细胞与胞外基质的黏附能力,通过Transwell侵袭实验及细胞划痕实验观察胆囊癌细胞的侵袭迁移能力改变;采用免疫印迹法检测过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞上皮间质转化相关标记蛋白的变化.分别使用t检验和 χ2检验对计量资料和计数资料进行统计学分析.结果real-time PCR和免疫组化检测结果显示,Kindlin-2在人胆囊癌组织中表达水平高于癌旁组织（t=4.372,P=0.001;t=7.477,P=0.000）,肿瘤组织Kindlin-2表达水平与Nevin分期密切相关（χ2=5.932,P=0.035）;细胞黏附实验结果显示,过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株GBC-SD、SGC-996与细胞外基质分子纤连蛋白Fibronectin的黏附能力较对照组增强（1. 66±0.03比1.07±0.22,t=2.710，P＝0.041;2.66±0.24比1.03±0.02,t=6.610，P＝0,020)；Transwell侵袭实验结果显示，过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株GBC-SD、 SGS-996穿过Transwell小室基质的细胞数较对照组明显增多（116.1±13.9比54.7±8.4,t=3.781,P=0.0194;136.3±7.5比64.3±6.4,t=7.302, P=0.002) ；细胞划痕实验结果显示，过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株GBC-SD12h和24h划痕修复率高于对照组[（42.9±2.2)%比（29.7±1.7)%,t=4.690,P=0.009;(65.0±2.4)％比（40.4±2.0)%,t=7.945,P=0.001]，过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株SGC-996l2h和24h划痕修复率高于对照组[（32.9±1.3 )％比（24.1±1.5)%,t=4.518,P=0.011;(51.3±1.1)％比（39.2±1.1)%,t=8.001,P=0.001〕；免疫印迹法检测结果显示，过表达 Kindlin-2后胆囊癌细胞间质化表型神经钙豁素、波形蛋白表达上调而上皮化表型上皮钙茹素表达降低。结论 Kindlin-2在胆囊癌组织中表达水平升高，且可通过诱导上皮细胞间质转化促进胆囊癌细胞与胞外基质豁附、侵袭迁移等恶性行为。

纯铜表面渗铝-内氧化强化及磨损研究

利用纯铜渗铝-内氧化工艺制备了Al2O3/Cu表面复合层,测试了表层的组织结构和力学性能,并进行了黏着磨损、固定磨料磨损和松散磨料振动与非振动情况下的磨损试验。结果表明:利用纯铜渗铝-内氧化工艺能够获得Al2O3粒子弥散分布的Al2O3/Cu表面复合层,其各项性能指标优于纯铜;松散磨料的振动频率对纯铜和渗铝-内氧化后试样的磨损量的影响是有范围的,低频率(<5Hz)振动时,磨料的振动加剧试样的磨损,当磨料振动频率继续增大时,试样的磨损失重逐渐降低,即磨料的振动降低了磨损试样的磨损。

5-Aza-CdR对人食管癌细胞株中T-cadherin基因表达和细胞增殖的影响

背景:T-cadherin在肿瘤的发生中可能扮演肿瘤抑制基因的角色,在食管癌等多种肿瘤中的表达明显下降。目的:探讨去甲基化制剂5.氮杂.2'.脱氧胞苷(5.Aza.CdR)对人食管癌细胞株EC109中T-cadherin基因表达和细胞增殖的影响。方法:常规培养人食管癌细胞株EC109,并分为5μmol/L.5.Aza.CdR组和对照组。以甲基化特异性PCR(MSP)法检测T-cadherin基因启动子区甲基化状态,RT.PCR和蛋白质印迹法分别检测T-cadherin mRNA和蛋白表达.MTT法检测EC109细胞增殖。结果:对照组EC109细胞中T-cadherin基因启动子区呈异常甲基化状态,5-Aza-CdR干预可逆转甲基化状态。与对照组相比.5.Aza.CdR组T-cadherin基因mRNA和蛋白表达均显著增高(P<0.01),细胞增殖明显受到抑制。结论:去甲基化制剂5.Aza.CdR通过逆转食管癌细胞中T.cadherin基因启动子区甲基化状态来增强其表达,并抑制肿瘤细胞增殖。

纯铜表面渗铝-内氧化磨损性能研究

为了提高纯铜表面的耐磨性,利用纯铜渗铝-内氧化工艺制备了A12O3/Cu表面复合层,分析了表层的组织结构,测试了显微硬度,并进行了黏着磨损、固定磨料磨损试验。结果表明:利用纯铜渗铝-内氧化工艺能够获得弥散分布的A12O3/Cu表面复合层,其表层显微硬度、耐磨性较纯铜有较大的提高,渗铝量增大,渗铝-内氧化试样的显微硬度、耐磨性也相应提高,但不是线性关系。

FAK和FGF-2在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的:研究黏着斑激酶(FAK)及成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测鼻咽癌及鼻咽炎组织中FAK及FGF-2蛋白表达情况,并分析其与临床病理参数的关系。结果:在鼻咽癌组织中FAK、FGF-2蛋白阳性表达率与鼻咽炎组织中的表达率比较差异均有统计学意义(均P<0.05);FAK、FGF-2蛋白的表达与淋巴结转移有关(分别P<0.01和P<0.05),与其他病理参数无关(P>0.05);FAK的表达与FGF-2的表达呈正相关(r=0.350,P<0.01)。结论:FAK、FGF-2的高表达在鼻咽癌的发生、发展中具有一定的相关性。

干扰素对白血病K562细胞黏附功能及黏着斑激酶表达的影响

目的研究IFN-α-2b对K562细胞黏附功能及黏着斑激酶(FAK)mRNA表达的影响。方法 1.采用Cyto Tox96RNon-Radioactive Cytotoxicity Assay Kit试剂盒检测IFN-α-2b对K562细胞黏附功能的影响。2.流式细胞术检测IFN-α-2b作用于K562细胞前后整合素β1表达水平的变化。3.应用RT-PCR技术检测不同浓度IFN-α-2b对K562细胞FAK mRNA表达水平的影响。结果 1.K562细胞高表达整合素β1。IFN-α-2b可提高K562细胞与纤维黏连蛋白的黏附率,并且可降低整合素β1的表达水平。2.当IFN-α-2b的水平为250万～1 000万U.L-1时,随IFN-α-2b水平的增加FAK mRNA的表达逐渐增高。结论 K562细胞中可能存在整合素β1活化障碍。IFN-α-2b可能是通过增加K562细胞的黏附功能反馈性降低整合素β1的表达水平。IFN-α-2b可能通过增加正常FAK mRNA表达水平来改善β1介导的黏附信号通路的缺陷。

赖氨酸羟化酶2在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其对食管鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的通过观察赖氨酸羟化酶2(PLOD2)在食管鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织中的表达水平并分析其与临床病理参数间的相关性,探讨PLOD2调控食管鳞癌细胞侵袭转移的作用机制。方法应用免疫组织化学法检测60例食管鳞癌患者(收集于2016年1月至2017年12月新乡医学院第一附属医院)肿瘤组织和配对癌旁组织中PLOD2的表达水平并分析其与临床病理参数的关系;应用天狼猩红染色检测胶原纤维蛋白沉积;LV-vector、LV-over/PLOD2慢病毒载体转染食管鳞癌细胞系EC-109细胞,应用即时荧光定量PCR法检测PLOD2表达情况;细胞迁移和侵袭实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测PLOD2/AKT上皮-间质转化信号通路相关蛋白的表达。结果在食管鳞癌患者肿瘤组织中PLOD2的表达水平(81.7%,49/60)显著高于配对癌旁组织(8.3%,5/60;P<0.01);且与肿瘤浸润深度和淋巴结转移显著相关(P<0.01);天狼猩红染色显示,PLOD2高表达的食管鳞癌组织中胶原纤维沉积显著高于PLOD2低表达的组织(P<0.01);细胞迁移和侵袭实验结果显示,过表达PLOD2可提高EC-109细胞的迁移和侵袭能力,与LV载体组相比,差异有统计学意义(P<0.01);Western blot结果显示,过表达PLOD2可上调黏着斑激酶(FAK)/AKT信号通路相关蛋白p-FAK、p-AKT、波形蛋白等的表达。结论PLOD2在食管鳞癌组织中高表达,并与肿瘤迁移和侵袭密切相关;PLOD2促进食管鳞癌迁移和侵袭的机制可能与激活FAK/AKT信号通路、促进上皮-间质转化进程有关。

CDH17在胃癌组织中的表达及其临床病理诊断价值

目的:探讨CDH17在胃癌肿瘤组织中的表达及其在临床病理诊断中的价值。方法:采用免疫组化Maxvision法检测133例胃癌组织中CDH17及CDX-2的表达,同时检测97例正常胃粘膜组织CDH17的表达。结果:CDH 17在胃癌组织中阳性表达率为61.6%,高于正常胃粘膜上皮细胞阳性表达率8.2%,差异具有统计学意义(P<0.001)。CDH 17表达与肿瘤临床分期、Lauren分型和淋巴结转移相关(P<0.05)。胃癌组织中CDH 17表达阳性率高于CDX-2,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CDH 17在胃癌组织中表达上调,其表达水平与肿瘤临床分期、Lauren分型以及淋巴结转移相关,胃癌中CDH 17阳性率高于CDX-2,有一定的鉴别诊断价值。

血管内皮损伤因子与职业性手臂振动病的关联性

目的研究血管内皮损伤因子与职业性手臂振动病(HAVD)的关联性。方法采用判断抽样方法,以23例男性HAVD患者为HAVD组,以61名男性手传振动作业工人为振动接触组,以64名男性非手传振动作业工人为对照组。采用酶联免疫吸附法检测3组人群血浆中肌球蛋白轻链2(MLC2)、内皮素-1(ET-1)和黏着斑蛋白(VCL)水平。采用Logistic回归分析筛选HAVD的关联指标,以之构建新的多变量模型指标Y,通过受试者工作特征(ROC)曲线筛查判断HAVD的指标。结果 3组人群血浆中MLC2水平由高到低依次为HAVD组>振动接触组>对照组(P<0.05)。HAVD组人群血浆中ET-1水平低于对照组(P<0.05),但与振动接触组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组人群血浆中VCL水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经Logistic回归分析排除年龄、工龄、吸烟、饮酒和自觉症状等混杂因素后,MLC2水平越高者,发生HAVD的风险越高(P<0.05);ET-1水平越低者,发生HAVD的风险越高(P<0.05)。采用MLC2、ET-1判断HAVD的ROC曲线下面积(A_Z)分别为0.820和0.524,采用以MLC2和ET-1构建的Y判断HAVD的A_Z为0.799;A_Z由高到低依次为MLC2>Y>ET-1(P<0.01)。结论HAVD患者血浆中MLC2与ET-1水平均与HAVD有关联;MLC2作为生物标志物筛查HAVD的效果优于ET-1。未发现VCL与HAVD有关联。