绿木霉ZBS6黏粒基因组文库的构建及质量鉴定

为开展绿木霉ZBS6(Trichoderma viride ZBS6)拮抗基因筛选及克隆工作,建立了高质量基因组DNA的提取方法,并采用SuperCos1载体构建了绿木霉ZBS6黏粒基因组文库。试验中共获得3.9×104个黏粒克隆,平均插入片段大小约为33kb,文库滴度约为4.2×108 cfu/mL。理论上,从该文库中筛选到任一DNA序列的精确概率可高达99.9%。

5株不同群型霍乱弧菌黏粒文库构建及JS9803株文库应用

目的研究5株不同群型霍乱弧菌(VC)黏粒文库的构建。方法染色体DNA提取、酶切,质粒DNA提取、酶切及去磷酸化,连接、包装、转染、铺板,克隆子鉴定和保存、菌落原位杂交,PCR和测序。结果成功构建吴江-2株(EVC流行株产毒株)、86015株(EVC流行株非产毒株)、JS32株(EVC非流行株非产毒株)、JS9803株(O139群VC产毒株)和GD98200株(O139群VC非产毒株)等5株霍乱弧菌的染色体基因组黏粒文库,文库克隆子中插入35～45kb的染色体DNA片段,库容量分别为3000～5000克隆子。从JS9803株文库中筛选出分别携带CTXφ或nct-CTXφ基因组的克隆子,后一克隆子携带的rstR-ig2基因为新类型。结论成功构建5株不同群型霍乱弧菌染色体基因组黏粒文库,并对JS9803株文库进行应用。