黏膜上皮趋化因子28表达与肺移植术后急性肺损伤的关系

目的:探讨黏膜上皮趋化因子28(CCL28)与肺移植术后急性肺损伤发生的关系。方法:高通量筛选低氧条件下人肺毛细血管内皮细胞(PCEC)mRNA-CCL28高表达,同时检测肺移植术后患者血清以及肺移植小鼠肺组织mRNA-CCL28表达。观察低氧条件下PCEC培养基趋化人单核细胞(THP-1)的作用;利用腺病毒携带CCL28转染动物模型,观察过表达CCL28对肺移植小鼠炎性因子及肺损伤的影响。多组比较采用方差分析,术前及术后数据采用配对t检验。结果:肺移植术后血清CCL28表达高于术前,0.970±0.100比0.766±0.148,t=-3.217,P<0.05;经PCR检测,术后mRNA-CCL28高于术前(2.438±0.210比1.000±0.088),t=-17.844,P<0.05;低氧条件下PCEC培养基趋化THP-1,低氧组迁移细胞高于对比组(252.000±20.662比140.670±12.662),t=-7.957,P<0.05;过表达CCL28使支气管灌洗液内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(231.17±22.27)、白细胞介素(IL)-1β(92.81±11.44)和IL-6(317.14±39.14)分别与移植组TNF-α(184.84±14.38)、IL-1β(74.57±9.63)、IL-6(252.22±29.03)比较,表达水平高于移植组,同时过表达CCL28加重肺损伤。结论:低氧条件下CCL28高表达并趋化THP-1加重肺移植术后急性炎性反应以及肺损伤。

慢性胃炎中黏膜相关上皮趋化因子28与白细胞介素-10的表达及与幽门螺杆菌的关系

慢性胃炎是人群中很最常见的疾病之一．幽门螺杆菌（HP）是慢性胃炎的最常见的原因之一。趋化因子是在众多炎性疾病发病过程中起着重要作用的细胞因子。可能在HP感染胃黏膜炎性病变中起着一定作用。但其发病机制尚未完全明了。本研究检测了黏膜相关上皮趋化因子28（CCL28）与白细胞介素（IL）-10在正常胃黏膜及HP阴性及阳性慢性胃炎中的表达水平，并对其临床意义作一讨论。

绵羊黏膜趋化因子CCL28基因的克隆、序列分析与原核表达

利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物,从绵羊结肠黏膜组织提取mRNA,通过RT-PCR获得CCL28基因,将PCR产物克隆、测序,并进行序列分析;再根据克隆的序列设计1对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含BamHⅠ/XhoⅠ酶切位点的CCL28片段,双酶切后亚克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达载体pGEX-CCL28,转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定。克隆的绵羊CCL28基因包含完整的开放阅读框,克隆片段长444 bp,ORF为387 bp,编码129个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛该基因的同源性分别为76.4%、61.4%、84.3%和92.9%,推测的氨基酸序列与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为76%、63%、84%和93%,表达的融合蛋白分子量约为39 ku,并以包涵体形式存在。为下一步研究绵羊CCL28的生物学功能奠定基础。

上皮细胞相关趋化因子及受体与口腔黏膜疾病

趋化因子是一类能诱导免疫细胞向特定组织部位浸润和集聚的细胞因子,其功能行使由趋化因子受体介导,上皮细胞是分泌趋化因子的主要细胞之一。与上皮细胞相关的趋化因子及受体相互作用参与了口腔黏膜疾病炎症的发生与发展,可促使某些口腔慢性炎性疾病向鳞癌转变。

干扰趋化因子CC受体-2调控p38MAPK信号通路抑制人口腔黏膜上皮细胞系增殖的机制

目的探讨干扰趋化因子CC受体(CCR)2基因的表达对口腔黏膜上皮细胞增殖的影响及机制。方法 Western印迹检测CCR2在口腔黏膜下纤维性变(OSF)中的表达;用CCR2的siRNA转染人口腔黏膜上皮细胞系(HOMC)细胞,转染48 h后用Western印迹检测各组细胞中CCR2蛋白表达;细胞增殖与活性检测(CCK8)实验检测细胞增殖;Western印迹检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化(p)-p38MAPK蛋白表达。结果 CCR2在OSF组织中的表达显著高于正常口腔黏膜组织(P<0.01);阴性对照(NC)-siRNA组CCR2蛋白表达、细胞存活率及p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);CCR2-siRNA组CCR2蛋白表达、细胞存活率及p-p38MAPK蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01)。结论 CCR2在OSF中高表达,抑制CCR2的表达可通过调控p38MAPK信号通路抑制HOMC的增殖。

呼吸道合胞病毒感染对鼻黏膜下成纤维细胞分泌趋化因子的影响

[目的]了解呼吸道合胞病毒(RSV)感染对鼻黏膜下成纤维细胞分泌趋化因子的影响.[方法]取手术切除的下鼻甲鼻黏膜进行上皮细胞及黏膜下成纤维细胞培养,将RSV感染鼻黏膜上皮细胞后,用其培养上清液刺激培养的成纤维细胞,用荧光定量PCR分别于6,12,24,48h时测定嗜酸细胞活化趋化因子、调节活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子(RANTES)、白细胞介素8(IL-8)及生长调节癌基因α(GRO-α)的mRNA表达程度;用ELISA方法分别于24,48 h测定培养液中嗜酸细胞活化趋化因子、RANTES,IL-8,GRO-α蛋白质的含量.[结果]实验组IL-8,GRO-αmRNA的表达程度明显高于对照组,RANTES,IL-8,GRO-α蛋白表达量明显高于对照组.[结论]被RSV感染的鼻黏膜组织中成纤维细胞有促进细胞因子分泌的作用.

人鼻黏膜上皮细胞中白细胞介素12和细胞间黏附分子1及单核细胞趋化因子3的表达研究

目的:利用RT-PCR检测原代培养的人鼻黏膜上皮细胞中IL-12、细胞间黏附分子1(ICAM-1)以及单核细胞趋化因子3(MCP-3)mRNA的表达。方法:获取人鼻黏膜组织,原代培养人鼻黏膜上皮细胞。设计IL-12 p35亚基、IL-12 p40亚基I、CAM-1以及MCP-3的引物,参照物采用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),目标扩增片段938 bp。半定量RT-PCR检测其mRNA在鼻黏膜上皮细胞的表达。结果:×400光镜下观察结果显示原代培养的鼻黏膜上皮细胞形状呈圆形或不规则形,饱满贴壁。RT-PCR结果通过1%琼脂糖凝胶电泳显示,鼻黏膜上皮细胞有IL-12 p35I、CAM-1以及MCP-3 mRNA的表达,但无IL-12 p40亚基的表达。结论:人鼻黏膜上皮细胞中有IL-12 p35、ICAM-1以及MCP-3的mRNA表达,但无IL-12p40亚基的表达。人鼻黏膜上皮细胞不能合成完整有活性的IL-12。

不同级别胃黏膜上皮瘤变组织幽门螺杆菌感染和趋化因子CXCL12及受体CXCR4表达的关系及意义

目的探讨不同级别胃黏膜上皮瘤变组织幽门螺杆菌（Hp）感染和趋化因子CXCL12及其受体CXCR4表达的关系及意义。方法行胃镜活检患者138例，其中正常胃黏膜（NGM）32例，低级别上皮内瘤变（LGIEN）35例，高级别上皮内瘤变（HGIEN）36例，胃腺癌（GCA）35例。Hp感染判定采用^13C呼气试验及血清Hp抗体检测，均阳性判定为Hp感染；CXCL12和CXCR4检测采用免疫组织化学SABC法。结果LGIEN、HGIEN和GCA组织CXCL12和CXCR4阳性表达率均高于NGM组织[71．43％（25／35）、86．11％（31／36）、91．43％（32／35）比25．00％（8／32），71．43％（25／35）、86．11％（31／36）、91．43％（32／35）比28．12％（9／32）]，HGIEN和GCA组织CXCLl2和CXCR4阳性表达率高于LGIEN组织，差异有统计学意义（P〈0．05）；HGIEN和GCA组织CXCL12和CXCR4阳性率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。Hp感染与CXCL12和CXCR4阳性表达无相关性（P〉0．05）。结论LGIEN、HGIEN和GCA组织CXCL12和CXCR4阳性表达率均高于NGM组织，HGIEN和GCA组织CXCL12和CXCR4阳性表达率显著高于LGIEN，而HGIEN和GCA组织CXCL12和CXCR4阳性表达率相近。胃黏膜上皮瘤变组织Hp感染与CXCL12和CXCR4阳性表达无相关性，提示Hp感染可能不是通过CXCL12和CXCR4的表达而起到致癌作用的。

儿童龋病与唾液CCL28和sIgA抗体的相关性

目的:探讨儿童唾液中趋化性细胞因子CCL28含量和s Ig A抗体分泌与儿童患龋状况之间的联系。方法:抽取长沙市两所幼儿园3~5岁108名幼儿进行龋齿检查,根据检查结果分为无龋组[龋失补指数(dynamical mean-field theory,DMFT)=0];低龋组(DMFT=1~4);高龋组(DMFT≥5),收集非刺激性全唾液样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测唾液中CCL28及s Ig A的含量,并对结果进行统计学分析。结果:108名儿童唾液中CCL28的浓度为(121.22±32.63)pg/m L,s Ig A的浓度为(16.49±8.02)μg/m L,两者之间存在线性正相关关系(r=0.734),且儿童唾液样本中CCL28和s Ig A含量随儿童患龋程度而增加(P<0.05)。结论:儿童龋患能够促进CCL28和s Ig A分泌,且CCL28和s Ig A的分泌量与龋患程度呈正相关;CCL28对唾液中s Ig A的分泌起促进作用。

SBR融合蛋白和减毒沙门氏菌免疫对小鼠涎腺CCL28 mRNA表达的影响及意义

目的探讨纯化的变形链球菌唾液结合区段(SBR)颌下腺注射和减毒沙门氏菌(SL)灌胃免疫对小鼠涎腺黏膜相关上皮因子CCL28 mRNA表达的影响。方法将120只BALB/C小鼠随机分为SBR组及SL组各60只。SBR组行SBR融合蛋白颌下腺注射免疫,SL组行SL灌胃免疫。免疫48 h、1周、2周时采用ELISA法检测SBR组唾液中SBR特异性抗体(SBR-Ig A)水平;RT-PCR法检测两组颌下腺组织CCL28 mRNA相对表达量。用另选5例BALB/C正常小鼠作为对照组。结果 SBR组免疫48 h及1周、2周时唾液中SBR-Ig A水平均明显高于对照组,P均<0.05;SBR组和SL组颌下腺组织CCL28 mRNA相对表达量均高于对照组(P均<0.05)。结论 SBR融合蛋白经颌下腺接种可诱导小鼠明显的抗体应答;经颌下腺和经胃接种疫苗后涎腺CCL28的表达明显增高。

CXCL12促进人胃癌AGS细胞体外侵袭及其机制研究

目的研究趋化因子CXCL12对人胃癌AGS细胞侵袭性的影响。方法在体外用不同浓度CXCL12处理AGS细胞后,应用Transwell侵袭实验、RT-PCR、明胶酶谱分析法、ELISA法,观察CXCL12对肿瘤体外侵袭能力及金属基质蛋白酶MMP-9活性和VEGF表达的影响。结果CXCL12作用后,人胃癌AGS细胞侵袭能力明显增强,并具一定的量效关系;金属基质蛋白酶MMP-9活性呈剂量依赖性增强,VEGF的分泌增加。结论CXCL12在体外可增加人胃癌AGS细胞的体外侵袭性。

CCL28在子宫内膜异位症中的作用机制研究

目的探讨C-C基序趋化因子配体28(CCL28)在子宫内膜异位症(EM)中的表达及可能机制。方法比较15例卵巢子宫内膜异位组织及15例在位内膜组织中CCL28mRNA及蛋白表达水平。将携带CCL28全基因的慢病毒(CCL28组)及空载体病毒(Emptyvector组)、CCL28-siRNA(CCL28-siRNA组)及其对照基因(CON组)分别转入人子宫内膜基质细胞HESs。检测各组CCL28 mRNA及蛋白表达水平、上皮间质转化(EMT)相关指标(E-cadherin、N-cadherin、Snail-1、Vimentin)蛋白表达水平、细胞活性、细胞侵袭和迁移。结果卵巢子宫内膜异位组织CCL28 mRNA和蛋白表达水平均高于在位内膜组织(P<0.05)。与Emptyvector组比较,CCL28组CCL28mRNA及蛋白表达水平、细胞增殖力、侵袭力、迁移力增高(P<0.05)。与Emptyvector组比较,CCL28组E-cadherin蛋白表达水平较低,而N-cadherin、Snail-1和Vimentin蛋白表达水平较高(P<0.05)。与CON组比较,CCL28-siRNA组CCL28 mRNA及蛋白表达水平、细胞增殖力、侵袭力、迁移力降低(P<0.05)。与CON组比较,CCL28-siRNA组E-cadherin蛋白表达水平较高,而N-cadherin、Snail-1和Vimentin蛋白表达水平较低(P<0.05)。结论CCL28可能通过影响细胞增殖、侵袭、迁移和EMT参与EM发生发展。

CCL25和CCL28及其相应受体CCR9和CCR10

CCL25和CCL28是CC趋化因子家族成员,主要表达于胸腺树突状细胞和黏膜上皮细胞,CCL25和CCL28相应的受体分别是CCR9和CCR10,表达于T淋巴细胞和B淋巴细胞。CCL25和CCL28及其相应受体对循环IgA浆母细胞和T淋巴细胞的归巢起重要作用,而且CCL28还具有广谱的抗微生物活性。

考试压力对大学生唾液中CCL28与sIgA的影响

目的通过检测大学生考试前后唾液中黏膜相关上皮趋化因子(mucosa-associated epithelia chemokine,CCL28/MEC)与分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobin A,sIgA)含量的变化,探讨考试应激对口腔黏膜免疫功能的影响。方法收集37名大学生(17名大二女生,10名大三男生和10名大三女生,后两者分别设为男生组和女生组)考试前后的非刺激性全唾液,采用酶联免疫吸附试验检测唾液中CCL28与sIgA水平的变化。结果考后37名学生唾液中CCL28与sIgA的吸光度值低于考前水平,差异有统计学意义(P<0.05);女生组比男生组的考试前后唾液CCL28水平的变化更显著(P<0.05);女生组考试前后唾液中CCL28水平的变化比sIgA更为明显(P<0.05),而男生组考试前后唾液中两指标间变化的差异不明显。结论考试应激能促进唾液中sIgA与CCL28水平的升高,女性比男性更容易受考试应激的影响。

子宫内膜异位症患者血清CCL28的表达及其对在位子宫内膜间质细胞EMT的影响

目的 探讨子宫内膜异位症(EM)患者血清C-C基序趋化因子配体28(CCL28)的表达及其对在位子宫内膜间质细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法 用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测30例EM患者(EM组)和子宫肌瘤患者(对照组)血清CCL28表达水平。用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清CCL28诊断EM的价值,计算曲线下面积(AUC)。从EM患者子宫内膜分离并培养原代间质细胞,稳定感染sh-RNA-CCL28慢病毒的细胞记为sh-CCL28组;感染sh-RNA阴性对照慢病毒的细胞记为sh-NC组。Western-blot检测EMT相关分子:E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、果蝇蜗牛同源蛋白(Snail);Transwell法检测细胞侵袭和迁移;Annexin-V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡。结果 EM组血清CCL28浓度高于对照组(P<0.05)。血清CCL28诊断EM的AUC为0.813,灵敏度和特异度分别为83.33%和73.33%。与sh-NC组相比,sh-CCL28组E-cadherin蛋白表达水平较高,而N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达水平较低(P<0.05)。与sh-NC组相比,sh-CCL28组细胞侵袭数和迁移数较低,而凋亡率较高(P<0.05)。结论 EM患者血清CCL28表达水平升高,对临床诊断有一定价值;CCL28通过调控EMT影响EM的发生发展。

期刊导读

《美国鼻科学与过敏杂志》(《American Journal of Rhinology and Allergy》)2009,23(1)本期开篇是杂志主编Kennedy教授撰写的述评,主要内容如下:①杂志更名为《美国鼻科学与过敏杂志》;②该杂志1987年创刊,最初由过敏学专家Guy A Settipahe资助,