钙黏蛋白家族成员3及11号染色体开放阅读框30基因多态性与支气管哮喘病儿易感性及糖皮质激素疗效的研究

目的探讨钙黏蛋白家族成员3(CDHR3)及11号染色体开放阅读框30(C11orf30,EMSY)基因多态性与支气管哮喘病儿易感性及糖皮质激素疗效。方法前瞻性选取2020年5月至2021年10月于泰州市第二人民医院就诊的支气管哮喘病儿132例作为易感组。均接受糖皮质激素吸入治疗,并根据疗效分为疗效良好组和疗效不良组。选取同期体检的48例儿童作为对照组,采用倾向性匹配方法对易感组和对照组性别、年龄等基线资料进行匹配;采用PCR检测CDHR3及EMSY基因的单核苷酸多态性,计算其基因型频率和等位基因频率,基因位点的多态性与儿童支气管哮喘易感风险间的关系采用多因素logistic回归分析。对比疗效良好组和疗效不良组不同基因型分布。结果易感组和对照组经倾向性评分匹配后有36组配对成功(每组36例),匹配后基线资料对比差异无统计学意义(P>0.05)。匹配后易感组和对照组CDHR3基因rs6967330位点、EMSY基因rs12278256位点基因型频率及A等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示:EMSY基因rs12278256位点AA基因型[OR=9.91,95%CI:(1.02,96.65)]、CDHR3基因rs6967330位点AA基因型[OR=10.09,95%CI:(1.08,94.02)]是支气管哮喘易感的危险因素(均P<0.05)。治疗12周后,24例(66.67%)为疗效良好组,其余12例(33.33%)归为疗效不佳组,两组CDHR3基因rs6967330位点基因型分布对比差异无统计学意义(P>0.05);两组EMSY基因rs12278256位点基因型分布对比差异有统计学意义(P<0.05),其中疗效良好组AA基因型分布频率[37.50%(9/24)]明显高于疗效不良组[0(0/12)](P<0.05)。结论CDHR3基因rs3847076位点以及EMSY基因rs12278256位点与儿童支气管哮喘易感有关,EMSY基因rs12278256位点与糖皮质激素治疗疗效相关。

异染色质相关蛋白TRIM28调控锌指蛋白和原钙黏蛋白家族基因的转录

目的TRIM28是一种异染色质相关蛋白,通过和SETDB1、HP1相互作用参与H3K9me3修饰的建立,本文旨在更深入地研究TRIM28的相关功能。方法本文利用CRISPR/Cas9技术、染色质免疫共沉淀技术、免疫印迹技术和实时荧光定量PCR技术,建立HEK293F Trim28基因敲除细胞系,分析一系列实验数据结果。结果Trim28主要抑制内源表达水平较低的基因转录,进一步分析发现Trim28调控锌指蛋白家族基因和原钙黏蛋白β家族基因的转录。在Trim28敲除细胞系中,锌指蛋白家族基因H3K27ac修饰、H3K4me1修饰和H3K4me3修饰都显著上升,H3K9me3修饰下降。原钙黏蛋白β家族基因的H3K4me3修饰显著上升,H3K9me3修饰下降。结论这些结果提示TRIM28通过改变染色质的开放程度调控锌指蛋白和原钙黏蛋白β家族基因的转录,为更深入研究TRIM28的功能提供了新的思路。

黏蛋白MUC13对胃癌预后及生物学行为的影响

目的:探讨黏蛋白MUC13在胃癌(GC)患者中的预后价值以及对GC细胞生物学行为的影响。方法:TCGA数据库分析MUC基因在GC组织中的表达水平。采用Spearman秩相关分析MUC基因之间表达的相关性,GO功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集探究MUC基因潜在的生物学功能。基于单因素COX回归筛选与GC预后显著相关的MUC基因。通过免疫荧光检测MUC13的表达水平,并分析其与GC预后等临床病理特征的关系。siRNA敲低GC细胞中MUC13后,利用CCK-8、集落形成以及Transwell实验观察其对GC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:MUC1、MUC2、MUC3A、MUC4、MCU5B、MUC12、MUC13等基因在GC组织中表达均显著上调(P<0.05),主要富集在消化系统过程、上皮结构维持、顶端质膜、唾液分泌等途径。其中,MUC13与GC患者的不良预后(Log-rank P<0.05)、年龄(P<0.001)及肿瘤大小(P=0.035)密切相关。细胞学实验表明敲低MUC13后,GC细胞的增殖能力明显下降(P<0.05),但迁移和侵袭能力无显著变化(P>0.05)。结论:高表达的MUC13与胃癌的不良预后密切相关,参与肿瘤进展的调控,是胃癌潜在的治疗靶点和预后标志物。

钙黏蛋白家族成员3、白细胞介素-33、DNA修复蛋白50基因多态性与儿童支气管哮喘易感性的研究

目的检测钙黏蛋白家族成员(CDHR)3、白细胞介素(IL)-33、DNA修复蛋白(RAD)50基因位点多态性与儿童支气管哮喘的易感性。方法选择2012年12月至2014年6月于青岛大学附属医院儿科支气管哮喘门诊就诊及住院治疗的100例支气管哮喘患儿为研究对象,并将其纳入支气管哮喘组(n=100)。选择同期于本院儿科门诊体检中心体检的100例健康儿童纳入对照组(n=100)。本研究遵循的程序符合青岛大学附属医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象监护人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书。两组儿童年龄、性别构成比、民族等基本资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。采用质谱单核苷酸多态性(SNP)技术,对两组儿童CDHR3、IL-33、RAD50基因进行分析。结果两组CDHR3、IL-33、RAD50基因位点基因型分布均符合Hardy-Weinburg平衡定律。两组CDHR3基因rs6967330位点和IL-33基因rs928413位点基因型与等位基因频率比较,差异无统计学意义(χ2=3.442,3.071,2.895,2.829;P=0.179,0.088,0.235,0.124)。两组RAD50rs6871536位点基因型与等位基因频率比较,差异均有统计学意义(χ2=6.635,9.200;P=0.036,0.003)。结论 CDHR3基因rs 6967330位点多态性和IL-33基因rs928413位点的多态性可能与儿童支气管哮喘无相关性。RAD50基因rs6871536位点多态性可能与儿童支气管哮喘有相关关系。

Flamingo钙黏蛋白亚家族的进化研究

目的对flamingo钙黏蛋白亚家族进行系统发育研究,探索脊椎动物与非脊椎动物中flamingo钙黏蛋白的进化差异。方法构建系统发育树,进行蛋白质结构域比较和基因结构分析。结果Flamingo钙黏蛋白亚家族起源于真后生动物;在脊椎动物进化过程中发生了两次基因重复获得3个同源拷贝;脊椎动物flamingo蛋白序列结构域中含有保守的内含子插入及胞质区含有两个高度保守模序作为其进化特征。结论Flamingo钙黏蛋白在脊椎动物与非脊椎动物中存在明显的进化差异,结合小鼠flamingo同源拷贝之一Celsr1基因位于已获得的小鼠脊髓发育相关数量性状基因座(QTL)内,可将Celsr1基因作为小鼠脊髓发育的候选基因进行进一步的研究。

与MUC1共同调控肿瘤化疗耐药的MUCIN家族成员的筛选

目的·在黏蛋白(MUCIN)家族成员中,筛选与黏蛋白1(mucin 1,MUC1)协同调控肿瘤细胞化学治疗(化疗)耐药的蛋白。方法·利用2对细胞系(紫杉醇耐药细胞HeLa229/TR-CasCTL和MUC1敲除细胞HeLa229/TR-CasMUC1,母本细胞HeLa229/P和紫杉醇耐药细胞HeLa229/TR),应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术检测MUCIN家族成员的mRNA表达水平,分析其与MUC1表达的相关性;通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测筛选出的MUCIN家族成员的蛋白表达水平,以筛选出在mRNA和蛋白水平均与MUC1表达存在相关性的靶蛋白;通过短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)方法沉默靶基因,利用药物半抑制浓度(half-maximum inhibitory concentration,IC^(50))实验检测细胞耐药性的变化;进一步利用GEPIA数据库分析多种肿瘤组织中MUC1和MUC13的平均表达水平;采用R2数据库分析在宫颈癌、结肠癌和胰腺癌组织中MUC1与MUC13表达的线性相关性;通过Kaplan-Meier Plotter数据库分析MUC1和MUC13的表达与胃癌患者生存率的关系。结果·qPCR检测结果显示,在MUCIN家族成员中,与MUC1在mRNA水平存在相关性的有MUC13和MUC18;Western blotting检测结果显示,在蛋白水平,只有MUC13随着MUC1的上调而上调,随着MUC1的敲除而下调;IC^(50)实验结果显示,随着MUC13的沉默,肿瘤细胞对紫杉醇的IC^(50)明显下降。进一步利用GEPIA数据库分析发现,在多种肿瘤组织中MUC1与MUC13存在同时高表达或低表达的特点;通过R2数据库分析发现,MUC1和MUC13的表达量在宫颈癌、结肠癌和胰腺癌肿瘤组织中呈正相关;通过Kaplan-Meier Plotter数据库分析发现,MUC1和MUC13的表达量与胃癌患者的生存率呈负相关。结论·MUC1与MUC13在肿瘤细胞化疗耐药中存在协同作用,同时与肿瘤患者的生存预后密切相关;临床上联合抑制MUC1和MUC13在肿瘤细胞化疗耐药治疗上具有可行性。

Tim基因家族与系统性红斑狼疮关系的研究进展

T 细胞免疫球蛋白域黏蛋白域家族（Tim）是2001年由Mcintire 等［1］在小鼠11号染色体上发现的基因家族，是一种 I型跨膜蛋白，可以调节 Th1细胞和 Th2细胞介导的 T 细胞免疫应答。 Tim 蛋白是重要的免疫调节分子，与多种自身免疫性疾病和过敏性疾病有着密切关系，如多发性硬化症、系统性红斑狼疮（SLE）、特发性血小板减少性紫癜、类风湿性关节炎等。

NRP2mAb对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及黏附作用的影响研究

目的探讨神经纤毛蛋白2单克隆抗体(NRP2mAb)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及黏附作用的影响。方法选取人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,采用不同浓度NRP2mAb处理MDA-MB-231细胞后,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率,Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭情况,纤连蛋白(FN)细胞黏附实验检测细胞的黏附能力。结果NRP2mAb处理后,MDA-MB-231细胞的形态不规则,存在皱缩、脱落改变,细胞数量减少,细胞质颗粒数量增多。不同浓度NRP2mAb(25、50、75、100、200μg/ml)处理24、48、72 h后,MDA-MB-231细胞的增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);且随着NRP2mAb浓度的增高,MDA-MB-231细胞的增殖抑制率逐渐增高;随着NRP2mAb作用时间的延长,NRP2mAb对乳腺癌细胞的抑制率逐渐增高。不同浓度NRP2mAb(0、25、50、75μg/ml)处理后,MDA-MB-231细胞的迁移数目、侵袭数目比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01);且随着NRP2mAb浓度增高,MDA-MB-231细胞的迁移数目和侵袭数目均逐渐减少。与无FN组比较,0μg/ml NRP2mAb处理的FN组MDA-MB-231细胞的黏附率增高(P﹤0.05);FN组中,随着NRP2mAb浓度(0、25、50、75μg/ml)的增加,MDA-MB-231细胞的黏附率逐渐降低,组间两两比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论NRP2mAb对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及黏附能力均有抑制作用,并具有浓度依赖性。

TIM-3在免疫调节中的临床应用价值

人T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域家族(TIM)定位于染色体5q33.2,TIM-3在疾病免疫调节中起重要作用,参与多种疾病的发生发展,且与疾病免疫逃避和疾病临床预后明显相关。TIM-3与疾病的关系密切,可作为疾病治疗靶点及预后的指标之一,对开展个体化新型免疫治疗方案具有重要的理论价值及临床应用价值。作者就TIM-3在免疫调节中的临床研究进展作一综述。