人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4 cDNA全长真核表达载体的构建及其在16HBE细胞中的表达

目的克隆人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)基因cDNA,构建其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并转染16HBE细胞。方法根据GeneBank中人TIM-4 cDNA序列(编号:NM-138379.2),设计出带有EcoRI和BamHI的上下游引物,应用RT-PCR技术,从人骨髓中扩增出TIM-4基因编码区序列,克隆到pMD18-T载体,形成pMD18-T-TIM-4重组质粒,经菌落PCR,双酶切,测序鉴定获得人TIM-4基因cDNA片段,然后将其亚克隆入pEGFP-C2绿色荧光载体中,并通过菌落PCR,双酶切,测序鉴定其重组体。将测序正确的pEGFP-C2-TIM-4质粒转染人气道上皮细胞(16HBE),用实时定量PCR检测目的基因的表达。结果成功扩增出人TIM-4 cDNA全长1134 bp,经T-A克隆构建的pMD18-T-TIM-4重组质粒经菌落PCR,双酶切,测序证实载体中含有正确的TIM-4编码区片段。由此构建的真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,经菌落PCR扩增出1134 bp左右的片段,经双酶切后产生4.7 kb和1134 bp左右的2条带,DNA测序显示与GeneBank中人TIM-4 cDNA序列一致。重组质粒转染16HBE细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,经实时定量PCR分析,转染细胞TIM-4基因的表达显著增加。结论首次从人骨髓中扩增出TIM-4基因cDNA全长,构建了其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并在16HBE细胞内成功高表达,为进一步研究TIM-4的生物学功能奠定了基础。

黏蛋白-4在膀胱癌中的表达及作用机制

目的探讨黏蛋白-4(mucin-4)在膀胱癌中的表达及作用机制。方法选取广东省两家三甲医院2016年1月~2017年6月期间收集的膀胱癌标本115例,同时选取距离肿瘤边缘>2 cm的癌旁组织作为对照。SYBR green实时荧光定量PCR法和Western blot检测mucin-4在膀胱癌、癌旁组织中的相对表达量,并分析mucin-4与临床相关参数的关系,同时观察mucin-4过对T24细胞(膀胱癌细胞系)增殖、凋亡的影响。结果膀胱癌组织mucin-4的相对表达水平高于正常膀胱组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。mucin-4的表达水平与膀胱癌的肿瘤大小、有无淋巴结转移以及TNM分期有关(P<0.05);肿瘤直径大于5 cm组mucin-4的表达水平高于肿瘤直径小于5 cm组;有淋巴结转移的膀胱癌组mucin-4的表达水平高于无淋巴结转移的膀胱癌组;Ⅲ+Ⅳ期膀胱癌组mucin-4的表达水平明显高于Ⅰ+Ⅱ期膀胱癌,差异具有统计学意义(P<0.05)。mucin-4的表达水平与膀胱癌患者的年龄、性别无关(P>0.05)。上调mucin-4的表达,可以诱导膀胱癌细胞(T24细胞系)的增殖,抑制凋亡;下调mucin-4的表达,可以诱导膀胱癌细胞(T24细胞系)的凋亡,抑制增殖。结论 mucin-4在膀胱癌的发生发展中起着重要作用,其表达水平对膀胱癌的严重程度及预后情况具有一定的参考价值。

黏蛋白-4和基质金属蛋白酶-7在种植体周病中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)-7、MMP-8和黏蛋白(MUC)-4在种植体周围龈沟液(PICF)中的水平,分析二者是否具有区分种植体周围疾病与健康个体的能力,以期为寻找辅助种植体周围疾病诊断、评估和治疗的新型参考指标提供理论基础。方法按照纳入和排除标准选择上部修复体负载2~5年的63位受试者,其中对照组24例,种植体周围炎(PI)组39例。收集受试者一般情况及种植体周围临床指标,X线片测量牙槽骨吸收量,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测PICF中的MUC-4、MMP-7、MMP-8水平。结果PI组和对照组受试者的年龄、性别等参数信息差异无统计学意义,PI组MMP-7(P<0.05)、MMP-8(P<0.001)的表达水平均高于对照组,PI组MUC-4表达水平低于对照组(P<0.001);相关性分析显示,MMP-7与牙周探诊深度(PPD)呈正相关(r=0.451,P<0.001);MMP-8分别与PPD、探诊出血(BOP)、牙龈指数(GI)呈正相关(r=0.619,P<0.001;r=0.478,P<0.001;r=0.332,P=0.009);MUC-4分别与PPD、BOP、GI呈负相关(r=-0.492,P<0.001;r=-0.321,P=0.010;r=-0.396,P=0.001)。MMP-7、MMP-8、MUC-4对PI均具有一定的诊断效能,其中MMP-8对PI的诊断效能最好,当MMP-8>21.21时,其曲线下面积为0.868,诊断PI的灵敏度为0.96、特异度为0.68;MMP-7、MUC-4并联诊断模型的诊断效能高于两种因子单独诊断,模型对PI的诊断灵敏度为0.96,特异度为0.56。结论MMP-7、MUC-4的水平在PI组与对照组之间差异有统计学意义,可能成为预测是否罹患PI的诊断指标;联合MMP-7、MUC-4对炎症具有较好的诊断价值。

斜带石斑鱼T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)基因表达及重组蛋白制备

为研究斜带石斑鱼Epinephelus coioides T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)在免疫应答过程中的作用,通过聚合酶链式反应(PCR)获得斜带石斑鱼TIM-4的蛋白编码区(GenBank登录号:MZ465580),利用生物信息学分析其结构特征,采用荧光定量PCR(qPCR)分析TIM-4在健康鱼体中的组织分布,以及经LPS和Poly I:C刺激后的表达变化,并构建原核表达载体质粒TIM-4-4T,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行TIM-4重组蛋白诱导表达。结果表明:斜带石斑鱼TIM-4基因的蛋白编码区片段长度为702 bp,可编码234个氨基酸,含有V-Type(IGV)、BTK和PRY 3个功能结构域;qPCR显示,TIM-4基因在斜带石斑鱼10种组织中均有表达,在胃中的表达量最高(P<0.05),在脾脏中表达量最低;经LPS刺激后,脾脏细胞中的TIM-4表达量显著降低(P<0.05),而经Poly I:C刺激后,脾脏细胞中的TIM-4表达量显著升高(P<0.05);SDS-PAGE电泳显示,TIM-4重组蛋白相对分子质量约为25100,以包涵体形式表达,在0.4 mmol/L IPTG、37℃下诱导6 h时,TIM-4重组蛋白的表达量最大。研究表明,TIM-4基因可能参与了斜带石斑鱼抗感染免疫反应,本研究结果为深入了解TIM-4的生物学功能提供了理论基础。

人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4在恶性肿瘤中的研究进展

人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(Tim-4)是新近发现的免疫调节分子,主要表达于抗原呈递细胞表面,发挥免疫调控作用。Tim-4在非小细胞肺癌、脑胶质瘤、结直肠癌、宫颈癌等肿瘤细胞上过表达,促进肿瘤的发生、发展、预后以及肿瘤的侵袭转移。而在肝癌组织中,Tim-4低表达并抑制肿瘤进展,提示Tim-4可能具有多重生物学功能。此外,Tim-4单克隆抗体可有效增强癌症疫苗对黑色素瘤的治疗效果,因此应深入研究Tim-4在抗肿瘤中的作用,可为肿瘤的免疫治疗提供新靶点。

人类TIM-4-EGFP融合蛋白重组体的构建、表达和特性分析

目的构建TIM-4-EGFP融合蛋白的原核表达载体,并评价表达的TIM-4-EGFP蛋白生物学活性。方法采用RT-PCR方法分别扩增TIM-4和EGFP的cDNA片段,将其克隆至pET28a重组质粒中。重组载体转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白表达,经镍金属螯合层析柱纯化。通过SDS-PAGE蛋白电泳和Western blot鉴定重组蛋白。并通过荧光显微镜观察评价其生物活性。结果成功构建TIM-4-EGFP的原核表达载体并在大肠埃希菌中表达,TIM-4-EGFP融合蛋白经SDS-PAGE蛋白电泳和Western blot鉴定证实。TIM-4-EGFP融合蛋白可以直接识别和结合凋亡细胞,而与活细胞不能结合。同时证实TIM-4-EGFP融合蛋白与凋亡细胞的相互作用可以被TIM-4-Ig融合蛋白阻断。结论成功构建TIM-4-EGFP表达载体并在大肠埃希菌中表达融合蛋白,表达的融合蛋白具有生物活性,可为将来TIM-4及其受体的研究提供可靠生物来源。

血清TIM-4、HBD2表达水平与肺炎支原体肺炎儿童病情的相关性研究

目的探讨血清T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域分子-4(TIM-4)和人β-防御素2(HBD2)表达水平与肺炎支原体肺炎(MPP)儿童病情的相关性。方法选取本院于2020年7月至2023年1月收治的142例MPP患儿为研究对象,根据病情严重程度分为普通MPP组(n=99)和难治性MPP组(n=43),另选取同期140例健康体检儿童为对照组。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TIM-4和HBD2水平;收集患儿临床资料,并采用多因素Logistic回归分析发生难治性MPP的影响因素;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TIM-4和HBD2水平对难治性MPP的诊断价值。结果普通MPP组和难治性MPP组在发热时间、住院时间、阿奇霉素治疗时间、中性粒细胞百分比、白细胞计数、反复呼吸道感染、肺外并发症方面比较差异具有统计学意义(t/χ^(2)值介于2.195~21.265,P<0.05);与对照组相比,研究组血清TIM-4和HBD2表达水平均明显升高(t=34.527、40.646,P<0.001);与普通MPP组相比,难治性MPP组血清TIM-4和HBD2表达水平均明显升高(t=12.410、15.316,P<0.001);多因素Logistic回归分析结果显示,血清TIM-4水平(OR=1.423,95%CI:1.140~1.776)、HBD2水平(OR=1.436,95%CI:1.162~1.775)、发热时间(OR=1.349,95%CI:1.056~1.724)、中性粒细胞百分比(OR=1.334,95%CI:1.032~1.725)、反复呼吸道感染(OR=1.521,95%CI:1.245~1.858)和肺外并发症(OR=1.432,95%CI:1.152~1.780)均是发生难治性MPP的独立危险因素(P<0.05)。ROC结果显示,血清TIM-4水平单独诊断难治性MPP发生的曲线下面积(AUC)为0.845(95%CI:0.774~0.900),灵敏度、特异度分别为69.77%、85.86%;血清HBD2水平单独诊断难治性MPP发生的AUC为0.815(95%CI:0.742~0.875),灵敏度、特异度分别为74.42%、82.83%;二者联合诊断难治性MPP发生的AUC为0.908(95%CI:0.848~0.950),灵敏度、特异度分别为90.70%、81.82%,显著高于血清TIM-4水平单独诊断(Z=2.047,P=0.040)和血清HBD2水平单独诊断(Z=2.443,P=0.015)。结论血清TIM-4及HBD2水平在肺炎支原体肺炎儿童中表达升高,且二者水平对难治性肺炎支原体肺炎具有一定诊断价值。

重症肺炎患者血清ANXA1、TIM-4表达水平及临床意义

目的 探讨血清膜联蛋白A1(ANXA1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)在重症肺炎患者血清中表达水平及临床意义。方法 选取2019年5月至2021年12月本院收治的90例重症肺炎患者纳入重症肺炎组和90例普通肺炎患者为普通肺炎组为研究对象,另选90例健康体检者为对照组。ELISA法检测血清ANXA1、TIM-4表达水平;多分类Logistic回归分析影响重症肺炎患者预后的因素。ROC曲线分析血清ANXA1、TIM-4对预后的预测价值。Kaplan-Meier曲线分析ANXA1、TIM-4表达与预后的关系。结果 对照组、普通肺炎组、重症肺炎组患者血清ANXA1、TIM-4水平依次上调(P<0.05)。Pearson分析表明,重症肺炎患者血清ANXA1和TIM-4表达水平呈正相关(P<0.05)。与生存组相比,死亡组ANXA1、TIM-4水平明显升高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,ANXA1、TIM-4是影响重症肺炎患者预后的危险因素(P<0.05)。ANXA1、TIM-4联合预测重症肺炎预后的AUC显著大于单独预测。Kaplan Meier生存分析显示ANXA1、TIM-4低表达组生存率显著高于高表达组。结论 重症肺炎患者血清ANXA1、TIM-4表达水平升高,两者是影响重症肺炎患者预后的危险因素,两者联合预测重症肺炎患者预后具有较高的价值。

龈沟液MUC-4、HIF-1α、MCP-1与种植体周围炎ISQ值的关系及联合诊断价值

目的 探讨龈沟液黏蛋白-4(MUC-4)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与种植体周围炎(PI)种植体稳定系数(ISQ)值的关系及联合诊断价值。方法 选取华北石油管理局总医院口腔科2018年6月至2020年6月收治的104例因牙列缺损行种植修复患者,其中PI患者70例作为观察组,种植体周围组织健康的患者34例作为对照组。对比两组临床资料、ISQ值、龈沟液MUC-4、HIF-1α、MCP-1水平,分析各指标及其联合检测与ISQ值的关系及对PI的诊断价值。结果 观察组龈沟液MUC-4低于对照组,HIF-1α、MCP-1高于对照组,ISQ值低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);龈沟液MUC-4与ISQ值呈正相关,HIF-1α、MCP-1与ISQ值呈负相关(P<0.05);龈沟液MUC-4、HIF-1α、MCP-1联合诊断PI的AUC为0.900(95%CI:0.826~0.950),敏感度为85.71%,特异度为82.35%,大于各指标单独诊断(P<0.05);以获取的截断值为界分为低水平与高水平,龈沟液MUC-4低水平患者发生PI的危险度是高水平患者的3.044倍;HIF-1α、MCP-1高水平患者发生PI的危险度是分别是低水平患者的2.008倍、2.400倍。结论 龈沟液MUC-4、HIF-1α、MCP-1与ISQ值显著相关,会显著增加PI风险,且联合检测能取得相对可靠的诊断价值。

Tim-4对kupffer细胞分泌Th1/Th2类细胞因子及抗原呈递功能的影响

目的探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白(Tim)-4对肝脏巨噬细胞kupffer细胞(KCs)分泌Th1/Th2类细胞因子及抗原呈递功能的影响。方法以非连续梯度离心法体外分离培养BALB/c小鼠KCs,随机分为对照组、过表达Tim-4组、Tim-4-shRNAs组、Tim-4单克隆抗体组,以过表达Tim-4、Tim-4-shRNAs质粒及Tim-4单克隆抗体处理KCs,以100 ng/ml脂多糖(LPS)活化后,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western印迹检测各组细胞Tim-4表达;免疫组化鉴定KCs,台盼蓝染色判断活率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养液中Th1类细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、干扰素(IFN)-γ及Th2类细胞因子IL-10水平;流式细胞仪检测KCs表面共刺激分子(MHC)-Ⅱ、CD80、CD86、CD40表达水平;分离BALB/c小鼠脾细胞悬液,制备纯化T细胞,与上述各组KCs共培养,噻唑蓝(MTT)法检测T细胞增殖情况;膜联蛋白异硫氰酸荧光素Ⅴ/碘化丙啶(AnnexinV-FITC/PI)法观察T淋巴细胞凋亡情况,进而检测KCs抗原呈递功能。结果免疫组化结果显示KCs表面特异性分子CD68表达强阳性,台盼蓝染色结果显示KCs拒染蓝染,其活性良好。与对照组相比,过表达Tim-4组细胞Tim-4表达、IL-10水平、T细胞凋亡率明显升高,TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平明显降低,MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CD40表达水平明显降低,T细胞相对增殖率明显降低(均P<0.05);Tim-4-shRNAs组细胞Tim-4表达、IL-10水平、T细胞凋亡率明显降低,TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平明显升高,MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CD40表达水平明显升高,T细胞相对增殖率明显升高(均P<0.05);Tim-4单克隆抗体组细胞Tim-4表达无明显变化(P>0.05),其他指标变化趋势与Tim-4-shRNAs组相同。结论上调Tim-4可促进KCS分泌Th2类细胞因子,抑制其分泌Th1类细胞因子,降低其抗原呈递功能。

阻断TIM-4分子对M1/M2型巨噬细胞极化及同种异体免疫排斥反应的影响

目的:运用特异性单克隆抗体阻断抗原T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域蛋白-4(T-cell immunoglobulin and mucin domain containing protein-4,TIM-4),探讨其对巨噬细胞(M1/M2)极化及同种异体免疫排斥反应的影响。方法:构建同种异体免疫排斥模型,将BALB/c小鼠脾细胞悬液注入C57BL/6小鼠腹腔,分为同型对照组(n=6)和抗TIM-4组(n=6);分别腹腔注射同型对照免疫球蛋白和抗TIM-4单克隆抗体,300μg/只;第5天,重复注射1次;第10天,处死两组小鼠,采用流式细胞术检测受体鼠脾和腹腔中M1和M2型巨噬细胞百分比;用实时荧光定量PCR法检测受体鼠脾和腹腔细胞中微小RNA-21(miR-21)、IL-10、p40、p35和EB病毒诱导基因3(Epstein-Barr virus-induced gene-3,EBi-3)等mRNA表达水平。结果:在脾细胞中,与同型对照组相比,抗TIM-4组M1和M2型巨噬细胞百分比、miR-21和p40 mRNA表达水平无明显变化(P均>0.05),但IL-10和p35 mRNA表达水平明显升高(P均<0.05),EBi-3 mRNA表达水平明显下降(P<0.05);在腹腔中,与同型对照组相比,抗TIM-4组M1型巨噬细胞百分比和p35 mRNA表达水平无明显变化(P均>0.05),而M2型巨噬细胞百分比、IL-10、p40和EBi-3 mRNA表达水平均显著升高(P均<0.05),miR-21表达水平显著降低(P<0.05)。结论:阻断TIM-4分子促进小鼠腹腔M2增殖分化,上调脾和腹腔细胞中抑炎因子和促炎因子mRNA表达,减轻同种异体免疫排斥反应。

新型免疫分子TIM-4的结构、配体及其在恶性肿瘤中的研究进展

人类T细胞免疫球蛋白黏蛋白(TIM)-4参与调节T细胞增殖、活化,在免疫调控中发挥作用,参与多种免疫性疾病的发展。TIM-4与其多种配体相互作用参与机体的免疫调控,介导多种免疫相关性疾病的发生、发展。此外,TIM-4与其受体TIM-1结合发生相互作用,为T细胞的活化提供共刺激信号,参与调控T细胞的增殖活化。TIM-4在多种肿瘤中表达并参与肿瘤的发生发展进程,在肿瘤侵袭转移、免疫调节中起重要作用,并可能是肿瘤免疫反应的潜在共刺激分子,有望成为肿瘤新标志物和免疫治疗的新靶点。

外周血TIM-4、IgG4在支气管哮喘急性发作患者中的表达及与病情严重程度的相关性

目的探究外周血免疫球蛋白G4(IgG4)、T细胞免疫球蛋白域及黏蛋白域蛋白-4(TIM-4)在支气管哮喘急性发作患者中的表达及与病情严重程度的相关性。方法前瞻性选择2017年10月-2020年10月空军军医大学第一附属医院西京医院收治的186例支气管哮喘急性发作患者为病例组,同期在本院健康体检者50例为对照组,检测并比较两组血清TIM-4、IgG4水平,比较病情严重程度不同的患者血清TIM-4、IgG4水平,比较患者治疗前后血清TIM-4、IgG4水平,用Spearman相关分析患者血清TIM-4、IgG4水平与病情严重程度的相关性,用受试者工作特征曲线(ROC)分析TIM-4、IgG4对支气管哮喘急性发作患者病情严重程度的诊断价值。结果病例组血清TIM-4、IgG4水平显著高于对照组(P<0.05);重及危重度组血清TIM-4、IgG4水平显著高于轻中度组(P<0.05);患者治疗后血清TIM-4、IgG4水平显著低于治疗前(P<0.05);患者血清TIM-4、IgG4水平与病情严重程度均呈正相关(P<0.05);血清TIM-4、IgG4水平联合诊断支气管哮喘急性发作患者病情严重程度的AUC为0.940(95%CI:0.904~0.976),敏感性为82.70%,特异性为93.30%,准确性为91.69%,截断值为2.46 ng/mL、1.18 g/L。结论TIM-4、IgG4在支气管哮喘急性发作患者外周血中呈高表达,与病情严重程度显著相关,有望成为评估支气管哮喘急性发作患者病情的可靠指标。

TIM-4基因多态性与湖北地区汉族人群支气管哮喘易感性的研究

目的探讨T细胞免疫球蛋白域及黏蛋白域蛋白4（Tcells immunoglobulin domain and mucin domain protein-4，TIM-4）基因外显子2区Lys65Lys（G／A）、外显子9区Val365Met（G／A）的单核苷酸多态性（SNP）与湖北地区汉族人群支气管哮喘易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法对湖北地区185例哮喘患者和162例健康者TIM-4基因外显子2区Lys65Lys（G／A）、外显子9区Val365Met（G／A）的多态性进行分析，计算基因型和等位基因频率。结果（1）湖北地区汉族人群健康者TIM-4基因外显子2区Lys65Lys（G／A）位G／G、G／A、A／A基因型频率分别为0．840、0．160、0，而哮喘人群其频率分别为0．859、0．141、0，其基因型和等位基因型频率与对照组相比差异均无统计学意义（P=0．603，P=0．618）；（2）本试验未检测到TIM-4外显子9区Val365Met（G／A）的多态性。结论湖北地区汉族人群TIM4基因外显子2区Lys65Lys（G／A）存在单核苷酸多态性变异，但该位点的变异与湖北地区汉族人群支气管哮喘易感性无关；TIM-4基因外显子9区VaD65Met（G／A）在湖北地区汉族人群中未发现单核苷酸多态性。

T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子1在脓毒症发病机制中的作用研究进展

脓毒症3.0的定义为宿主对感染的失控反应而引起的危及生命的器官功能障碍,其发病率和病死率均较高,预后较差,是导致重症患者死亡的主要原因之一。由于目前人们对脓毒症发病机制的认识尚不足,导致对脓毒症的治疗缺乏特异性。而T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子(Tim)家族中的Tim-1在脓毒症炎症反应、免疫耐受和细胞凋亡等一系列病理生理改变中起关键作用,并且是预测脓毒症患者预后及疗效评估中特异性相对较高的生物指标,为脓毒症的免疫治疗提供了新靶点,也为脓毒症发病机制的基础研究提供了一个新方向。现就Tim-1的发现和Tim-1的结构、分布与其免疫效应,Tim-1在脓毒症免疫抑制期、淋巴细胞增殖和细胞凋亡中的可能作用,以及未来Tim-1在脓毒症中作用的研究空间进行综述,以期为脓毒症的治疗提供参考。

隔药饼灸对免疫抑制兔Tim-4及PD-1的泛素化的影响

目的:观察隔药饼灸对免疫抑制兔巨噬细胞效应分子T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-4(Tim-4)及细胞程序性死亡受体1(PD-1)泛素化的影响,探讨隔药饼灸改善免疫抑制的可能机制。方法:将32只大耳白兔随机分为空白组、模型组、艾条灸组及隔药饼灸组,每组8只。除空白组外,其余3组均以60 mg/kg剂量腹腔注射环磷酰胺制备免疫抑制模型。艾条灸组予艾条灸,每穴灸1壮;隔药饼灸组予隔药饼灸,每穴灸5壮。均选取“神阙”“肾俞”“足三里”等穴,隔日1次,共干预10次。采用血细胞分析仪检测外周血白细胞含量;流式细胞术检测外周血PD-1在CD_(4)^(+)、CD_(8)^(+)T淋巴细胞及CD_(68)^(+)巨噬细胞中的阳性表达;ELISA法检测血清白细胞介素2(IL-2)、CD8、CD68及Tim-4含量;免疫组化法检测肝脏、脾脏Tim-4及F-box蛋白38(FBXO38)表达。结果:与空白组比较,模型组外周血白细胞计数(WBC)及中性粒细胞百分比(NEU%)降低、淋巴细胞百分比(LYM%)升高(P<0.01);外周血PD-1在CD_(4)^(+)、CD_(8)^(+)T淋巴细胞及CD_(68)^(+)巨噬细胞中的阳性表达率升高(P<0.01);血清IL-2、CD68及Tim-4含量升高(P<0.01),CD8含量降低(P<0.01);肝脏Tim-4及肝脏、脾脏FBXO38平均吸光度值增高(P<0.01)。与模型组比较,艾条灸组与隔药饼灸组WBC及NEU%升高(P<0.01);外周血PD-1在CD_(4)^(+)、CD_(8)^(+)T淋巴细胞及CD_(68)^(+)巨噬细胞中的阳性表达率降低(P<0.01);血清IL-2、CD68与Tim-4含量降低(P<0.01),CD8含量升高(P<0.01);肝脏Tim-4、FBXO38及脾脏FBXO38平均吸光度值降低(P<0.01,P<0.05)。与艾条灸组比较,隔药饼灸组外周血PD-1在CD_(68)^(+)巨噬细胞中的阳性表达率升高(P<0.05);血清Tim-4含量增高(P<0.01);肝脏Tim-4平均吸光度值降低(P<0.05)。结论:隔药饼灸可通过调节巨噬细胞效应分子Tim-4表达及FBXO38介导的PD-1泛素化改善免疫抑制状态,Tim-4可能是其参与免疫调控的特异性指标之一。

TIM-4在相关病毒性疾病中的研究进展

T细胞免疫球蛋白黏蛋白域分子(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein,TIM)-4是只表达于抗原提呈细胞(antigen-presenting cell,APC)表面TIM基因家族的成员之一。TIM-4作为TIM-1天然配体,这两者相互作用可调节T细胞的活化与增殖。TIM-4的另一配体为磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS),TIM-4与PS结合起促进巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬作用。大量研究表明,TIM-4异常表达与病毒感染免疫应答调节、抗病毒免疫反应、慢性病毒感染疾病及恶性肿瘤等密切相关。文章就TIM-4在病毒相关疾病感染中的表达及机制作用进行综述。