钙黏蛋白17对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其PI3K/AKT/mTOR信号通路调节机制

目的:探讨钙黏蛋白17 (Cadherin-17)对结直肠癌(CRC)细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能的机制。方法:构建Cadherin-17基因过表达及小干扰质粒,包装成慢病毒,转染至SW480细胞,构建过表达和干扰病毒稳转株。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测细胞中Cadherin-17 mRNA和蛋白表达水平,验证转染效率并鉴定稳转株。SW480细胞分为对照组、空载体组、 Cadherin-17过表达质粒(OV-Cadherin-17)组和Cadherin-17小干扰质粒(si-Cadherin-17)组,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中Cadherin-17、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素c(Cyt-c)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路相关蛋白表达水平。采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,将细胞分为对照组、 LY294002组、 OV-Cadherin-17+LY294002组和si-Cadherin-17+LY294002组,检测各组细胞增殖活性、细胞凋亡率及细胞中Bcl-2、 Bax、 Cyt-c、 Caspase-3和PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。结果:RT-qPCR和Westernblotting法检测,OV-Cadherin-17和si-Cadherin-17转染和稳转株构建成功。与对照组比较,OV-Cadherin-17组细胞增殖活性明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01),细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显升高(P<0.01),磷酸化PI3K (p-PI3K)、磷酸化AKT (p-AKT)和磷酸化mTOR (p-mTOR)蛋白表达水平明显升高(P<0.01),si-Cadherin-17组和LY294002组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与LY294002组比较,OV-Cadherin-17+LY294002组细胞增殖活性明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01),细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显升高(P<0.01),p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显升高(P<0.01),si-Cadherin-17+LY294002组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:Cadherin-17可促进CRC细胞增殖,抑制CRC细胞凋亡,其机制可能与Cadherin-17调控PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活有关。

钙黏蛋白17在白细胞介素-10诱导胃癌细胞侵袭中的作用

目的探讨钙黏蛋白17（CDH17）在白细胞介素（IL）-10诱导的胃癌细胞侵袭中的作用及机制。 方法应用Transewell侵袭实验，观察IL-10对胃癌细胞MKN-45侵袭的诱导作用；并通过构建CDH17小干扰RNA（siRNA），沉默胃癌细胞中CDH17蛋白，观察比较IL-10在CDH17沉默前后，对MKN-45细胞侵袭诱导作用的差异，同时采用Western blot检测其中细胞信号通路的活化，并给予相应信号通路抑制剂，观察抑制信号通路活化后细胞侵袭能力的变化。 结果IL-10（100 ng/ml）显著诱导胃癌细胞MKN-45细胞表达CDH17及诱导侵袭（10 250±1 500比2 750±450，P＝0.019），同时Western blot检测显示，其磷酸肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号明显活化（P＝0.041）；siRNA转染成功抑制CDH17表达后，IL-10对MKN-45的侵袭诱导作用明显下降（10 250±1 500比2 325±300，P＝0.027），同时PI3K/Akt信号活化受抑制。给予上述未转染MKN-45细胞PI3K/Akt信号通路抑制剂Ly294002（10 nmol/L）预孵育后，PI3K/Akt信号活化抑制，IL-10对其的侵袭诱导能力显著下降（2 050±400比11 500±1 750，P＝0.016）。 结论IL-10通过CDH17活化胃癌细胞PI3K/Akt信号通路促进其侵袭转移。

ADAM12、MUC3A和MUC17在胃癌中的表达及生存预后分析

目的探讨去整合素金属蛋白酶12(a disintergin and metalloprotease 12,ADAM12)、黏蛋白3A(mucin 3A,MUC3A)和黏蛋白17(mucin 17,MUC17)基因在胃癌中的表达及生存预后关系。方法收集癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)、基因表达谱交互分析2(Gene Expression Profiling Interactive Analysis 2,GEPIA2)数据库信息,采用R 4.2.2和SPSS软件分析ADAM12、MUC3A和MUC17基因在胃癌中的差异性表达、生存预后关系、泛癌表达,以及不同临床病理特征与基因表达量之间的相关性。通过人类蛋白质图谱(Human Protein Atlas,HPA)数据库分析三种基因在正常组织中的表达水平。利用基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)功能富集分析评估三种基因在胃癌中的潜在功能。采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q-PCR)进一步验证肿瘤组织与癌旁组织中ADAM12、MUC3A和MUC17的表达情况。结果生物信息学及q-PCR结果显示,ADAM12、MUC3A和MUC17在正常组织中表达量较低,在胃癌组织中表达量均被上调(P<0.05),且ADAM12在胃癌中伴随着不良预后(P<0.05)。三种基因在肿瘤相关通路富集,与胃癌的发生发展有关。结论ADAM12、MUC3A和MUC17在胃癌中高表达,其中ADAM12是胃癌预后的影响因素。三种基因参与肿瘤的进展,均有可能成为胃癌潜在的治疗靶点。

胃癌患者60例血清及黏膜组织CK-18、CDH-17、CA724与CEA检测的临床价值

目的观察细胞角蛋白-18 (CK-18)、肝肠-钙黏连蛋白-17 (CDH-17)、糖类抗原724 (CA724)、癌胚抗原(CEA)在胃癌患者血清与胃黏膜组织中的表达水平,探讨联合检测对胃癌诊断的价值。方法选取经病理明确诊断为胃癌的患者60例(恶性病变组)、胃良性病变60例(良性病变组)和同期门诊健康体检者60例(正常对照组);采用酶联免疫吸附实验检测各组血清CK-18、CDH-17水平,电化学发光法检测血清CA724、CEA,同时采用免疫组化法检测CK-18、CDH-17、CA724、CEA在各组胃组织中的表达。结果 1)恶性病变组血清CK-18、CDH-17、CA724、CEA水平均较正常对照组、良性病变组明显升高(均P<0.05);2)胃癌组织中CK-18、CDH-17、CA724、CEA的阳性表达率均明显高于正常对照组、良性病变组(均P<0.05);3)Spearman分析显示:胃癌患者血清CK-18、CDH-17、CA724、CEA水平与胃癌组织中其表达水平呈正相关;4)联合检测CK-18、CDH-17、CA724、CEA在胃癌中的灵敏度和特异度分别为93.3%和81.7%,与单项检测胃癌灵敏度相比较,联合检测胃癌的灵敏度均升高(P<0.05)。结论检测血清CK-18、CDH-17、CA724、CEA的水平有助于胃癌的诊断,联合检测胃黏膜组织CK-18、CDH-17、CA724、CEA可提高胃癌诊断的灵敏度。

外周血ctDNA中PCDH8和PCDH17基因甲基化在高级别浆液性卵巢癌筛查和预后中的临床价值

目的:探讨外周血循环肿瘤DNA(ctDNA)中原钙黏蛋白(PCDH)8和PCDH17基因甲基化在高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)筛查和预后中的临床价值。方法:选取2016年7月至2018年7月在自贡市第一人民医院诊治并接受手术治疗的85例HGSOC患者(HGSOC组)和35例非恶性诊断患者(对照组)作为研究对象,收集手术组织标本和诊断时的血液样本。采用甲基化荧光(MethyLight)定量分析组织和ctDNA中PCDH8、PCDH17基因甲基化水平,以甲基化百分比参数(PMR)表示。随访截至2021年7月,记录复发时间。结果:HGSOC组肿瘤组织和ctDNA中PCDH8、PCDH17基因PMR值高于对照组(P<0.05),且HGSOC组肿瘤组织与ctDNA中PCDH8基因PMR值、PCDH17基因PMR值均呈正相关(r_(s)分别为0.465、0.432,均P<0.001)。ctDNA中PCDH8和PCDH17基因PMR值联合用于筛查HGSOC的曲线下面积(AUC)为0.857(95%CI 0.785~0.929),灵敏度和特异度分别为83.5%、80.0%。PCDH8、PCDH17基因甲基化与FIGO分期、血清CA-125水平、肿瘤直径有关(P<0.05)。经多因素Cox比例风险回归模型分析,外周血ctDNA中PCDH8和PCDH17基因甲基化是HGSOC患者术后复发的独立预测因子(P<0.05)。结论:外周血ctDNA中PCDH8、PCDH17基因甲基化检测可以作为HGSOC筛查或预测肿瘤术后进展的潜在的生物标志物。

CDH17表达及其SNPs在胃癌发生发展中的意义

目的:探讨CDH17表达与胃癌临床病理学特征的关系及其SNPs与胃癌遗传易感性的关系。方法:制作模拟胃癌侵袭转移动态的组织芯片,免疫组织化学SP法检测CDH17蛋白的表达,PCR-LDR技术检测CDH17基因2个SNPs位点rs2514813和rs3214050的多态性并行测序验证。结果:胃癌CDH17表达上调与组织学分化程度呈正相关(P<0.01);肠型胃癌表达高于弥漫型胃癌;随着侵袭过程的进展,黏膜层、肿瘤中央区、侵袭前沿区胃癌的CDH17表达水平呈下降趋势;CDH17表达与胃癌术后生存时间未见明显相关(P=0.209)。胃癌CDH17基因SNP位点rs3214050等位基因C、T频率及CC、CT和TT的基因型频率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),携带等位基因T的胃癌患者术后生存时间长于CC基因型(P<0.01)。rs2514813位点基因型与等位基因频率与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:CDH17表达升高与胃癌腺样结构的维持及进展相关,rs3214050位点为T等位基因者患胃癌风险低且预后好,提示该位点与中国福建汉族人群胃癌的遗传易感性及预后有关。

血清PG、G-17、CDH-17在胃癌中的表达及其诊断意义

目的探讨血清胃蛋白酶原(PG)、胃泌素(G-17)、肝肠-钙黏连蛋白-17(CDH-17)在胃癌中的表达及其诊断意义。方法选择70例胃癌患者设为观察组,并选择同期体检健康者50例作为对照组,分析血清PGⅠ、PGⅡ、G-17、CDH-17在胃癌中的变化。结果观察组患者血清PGⅡ、G-17及CDH-17水平显著高于对照组,PGⅠ水平显著低于对照组(P<0.05)。早期胃癌组患者PGⅡ、G-17及CDH-17水平显著低于进展期胃癌组(P<0.05),PGⅠ显著高于进展期胃癌组患者(P<0.05)。将胃癌全组、早期胃癌及进展期胃癌作为因变量,将血清PGⅠ、PGⅡ、G-17及CDH-17分别作为自变量,在相关性分析结果中显示,PGⅡ、G-17、CDH-17和胃癌、早期胃癌及进展期胃癌之间均呈正相关(P<0.05),PGⅠ和胃癌、早期胃癌及进展期胃癌之间均呈负相关(P<0.05)。PGⅠ诊断胃癌的AUC为0.983,95%CI为0.962~1.000;PGⅡ诊断胃癌的AUC为0.797,95%CI为0.716~0.878;G-17诊断胃癌的AUC为0.986,95%CI为0.958~1.000;CDH-17诊断胃癌的AUC为0.928,95%CI为0.880~0.975;PGⅠ+PGⅡ+G-17+CDH-17诊断胃癌的AUC为1.000,95%CI为1.000~1.000。PGⅠ、PGⅡ、G-17、CDH-17单独检测分别和联合检测曲线下面积比较,差异均具有统计学意义(Z=1.546、4.951、1.000、3.000,P均<0.05)。联合检测PGⅠ+PGⅡ+G-17+CDH-17的特异度、准确度分别为91.83%、93.15%。结论在胃癌患者中PGⅠ、PGⅡ、G-17、CDH-17的表达和病情严重程度之间存在着密切关系,为靶向药物治疗胃癌提供了新思路,且联合检测具有较高的特异度、准确度,临床应用价值高。

MUC17基因在胃癌组织、细胞中的表达及对胃癌细胞侵袭增殖能力影响

目的观察人黏蛋白17(MUC17)基因在胃癌组织、细胞中的表达及对胃癌细胞侵袭增殖能力影响。方法收集胃癌及其对应癌旁组织标本各31例份,另取胃癌细胞AGS、MKN45、SGC7901、BGC823和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,采用qRT-PCR法检测组织和细胞中MUC17基因。取AGS细胞并分为观察组和对照组,观察组利用RNA干扰技术敲低AGS细胞中MUC17基因的表达,Western blotting法检测两组MUC17基因的表达(以评价干扰效果),Transwell细胞体外侵袭实验以及细胞划痕实验检测细胞侵袭能力,MTS法、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中MUC17基因表达升高(P均<0. 05);与GES-1细胞比较,AGS、MKN45、BGC823、SGC7901细胞MUC17基因表达升高(P均<0. 05)。与对照组比较,观察组AGS细胞MUC17表达降低,侵袭细胞个数减少,细胞划痕愈合率及细胞增殖率降低,克隆形成能力减弱(P均<0. 05)。结论 MUC17在胃癌组织和细胞中表达上调,敲低MUC17表达可抑制AGS细胞的侵袭和增殖能力,这提示MUC17或将可能成为胃癌治疗的新靶标。

早期胃癌患者外周血CDH-17,RHBDD1和miR-135表达水平与临床病理特征的相关性研究

目的 探究早期胃癌患者外周血肝肠-钙黏连蛋白-17(liver-intestine cadherin-17,CDH-17)、菱形结构域蛋白1(rhombic domain-containing protein 1,RHBDD1)和微小核糖核酸(micro RNA,miR)-135表达水平与临床病理特征的相关性。方法 回顾性选取2018年5月~2021年6月石家庄市第三医院105例早期胃癌患者作为观察组,另选取同期健康体检者60例作为对照组,以酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定CDH-17和RHBDD1水平,实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence PCR,RT-PCR)测定miR-135表达,比较两组外周血CDH-17,RHBDD1和miR-135表达,分析外周血CDH-17,RHBDD1和miR-135与早期胃癌及临床病理特征的关系,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,评价外周血CDH-17,RHBDD1和miR-135对早期胃癌的诊断价值。结果 与对照组相比,观察组外周血CDH-17(72.41±20.14 pg/ml vs59.69±14.37pg/ml),RHBDD1(374.26±115.74 ng/ml vs 214.37±56.41ng/ml)和miR-135(3.87±1.26 vs 2.47±0.81)表达均升高,差异有统计学意义(t=4.304,10.032,7.736,均P<0.05);Logistic回归分析,结果显示外周血CDH-17[OR=11.497,95%CI=7.415~17.825],RHBDD1[OR=13.748,95%CI=9.827~19.234]和miR-135[OR=11.654,95%CI=7.946~17.991]表达为早期胃癌独立危险因素(Wald χ^(2)=38.417,33.771,37.877,均P<0.05)。外周血CDH-17,RHBDD1和miR-135表达对早期胃癌的诊断价值的ROC曲线显示外周血CDH-17,RHBDD1和miR-135表达对早期胃癌的诊断价值的AUC分别为0.736,0.903和0.828。应用Logistic二元回归拟合,构建各指标联合诊断的AUC为0.947;外周血CDH-17,RHBDD1和miR-135表达与临床分期、组织学分级有关(r=0.625,0.631,0.657;-0.633,-0.625,-0.674,均P<0.05)。结论 早期胃癌患者外周血CDH-17,RHBDD1和miR-135表达明显上调,且与临床分期及组织学分级有关。临床可通过检测其水平,准确诊断早期胃癌,为临床治疗提供一定依据,对改善患者预后具有重要意义。

miR-107靶向PCDH17表达调控EMT通路抑制胃癌细胞迁移、侵袭的分子机制

目的 探讨微小RNA(miR)-107靶向原钙黏蛋白(PCDH)-17调控EMT通路影响胃癌细胞迁移、侵袭的作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-107、PCDH17 mRNA在胃癌组织中表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-107对PCDH17转录活性的影响;胃癌MKN-28细胞转染pcDNA-PCDH17或siRNA-PCDH,Transwell迁移及侵袭实验检测PCDH17的表达对MKN-28细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测PCDH17的表达对EMT通路的蛋白表达水平的影响.miR-107过表达验证细胞迁移及侵袭.结果 miR-107在胃癌组织中高表达,PCDH17在胃癌组织中低表达;过表达PCDH17后,细胞迁移及侵袭能力明显降低,E-Cadherin表达水平明显升高,而N-Cadherin、Vimentin表达水平明显降低;抑制PCDH17表达后,细胞迁移及侵袭能力明显增强,E-Cadherin表达水平明显降低,而N-Cadherin、Vimentin表达水平明显升高;双荧光素酶报告基因系统检测结果 显示,miR-107可直接调控PCDH17的转录活性;miR-107可通过负向调控PCDH17而促进EMT转化进而增强胃癌细胞迁移及侵袭能力.结论 miR-107靶向PCDH17表达从而调控胃癌细胞迁移及侵袭能力,其可能通过激活EMT通路而发挥作用.

鼻咽癌中基因甲基化及治疗意义

鼻咽癌是高度恶性的肿瘤,伴随局部浸润和早期远处转移。鼻咽癌的病因主要包括遗传易患性、地方环境因素和EB病毒感染。一旦发生转移,预后很差,所以,迫切需要找到早期临床诊断、预后的生标志物和新的有效的治疗靶点。新近研究表明,原钙黏蛋白(PCDH)8、PCDH17、RRAD等因表观遗传学改变导致基因在鼻咽癌中失活,这些抑癌基因的失活可能与鼻咽癌的发生、发展有关。去甲基化治疗以及表观遗传学联合治疗在血液系统肿瘤及有些实体肿瘤中取得了可喜的进展,有望开拓鼻咽癌治疗的新天地。

胃癌患者Bmi-1、CDH17、胃蛋白酶原检测及与临床病理特征的关系

目的:探究胃癌患者黏膜组织细胞特异性莫洛鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)、肝肠钙黏连蛋白17(CDH17)及胃蛋白酶原(PGC)表达,并分析这3项指标与患者临床病理特征的关系。方法:随机选取2016年12月—2019年12月确诊并行手术的胃癌患者80例,另选择同期30例胃良性病变患者作为对照组。取手术标本切片,进行免疫组织化学法测定胃黏膜组织Bmi-1、CDH17、PGC及肿瘤标志物[血清糖类抗原50(CA50)、CA199、CA242、CA724及癌胚抗原(CEA)]表达,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所有患者血清肿瘤标志物水平,根据胃癌TNM分期分为Ⅰ~Ⅳ期,对比不同分期各指标差异,并分析Bmi-1、CDH17及PGC与临床病理特征的相关性。结果:胃癌患者Bmi-1、CDH17及PGC表达阳性水平均显著高于胃良性病变患者(P<0.05);随着胃癌患者TNM分期升高,Bmi-1、CDH17及PGC表达阳性率进一步升高,胃癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者Bmi-1、CDH17及PGC阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌患者血清及胃黏膜组织中CA50、CA199、CA242、CA724及CEA水平显著高于胃良性病变患者,且随着胃癌患者TNM分期升高,血清CA50、CA199、CA242、CA724及CEA水平进一步升高,各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman等级相关分析结果显示,胃癌组织中Bmi-1、CDH17、PGC、CA50、CA199、CA242、CA724及CEA表达存在呈正相关性(P<0.05)。胃癌患者不同性别、不同年龄、是否远处转移Bmi-1、CDH17、PGC阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同肿瘤分化程度、不同TNM分期、是否淋巴转移、不同肿瘤大小、不同浸润深度Bmi-1、CDH17、PGC阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在胃癌的发生发展过程中,Bmi-1、CDH17、PGC表达明显提高,并与胃癌患者的临床病理特征存在相关性,检测Bmi-1、CDH17、PGC表达对于反映胃癌生物学行为具有重要意义。