异位子宫内膜组织中黏附斑激酶表达及其与临床分期的关系

目的观察黏附斑激酶(FAK)在异位子宫内膜组织中的表达及其意义。方法收集30例(临床分期Ⅱ期6例、Ⅲ期11例、Ⅳ期13例)子宫内膜异位症(EMS)患者异位和在位子宫内膜组织、10例因输卵管阻塞因素不孕行试管婴儿患者的正常子宫内膜组织,采用免疫组化Elivision两步法检测不同子宫内膜组织中的FAK。结果EMS患者在位子宫内膜组织中FAK阳性表达率为73.33%、异位子宫内膜组织中为93.33%、正常子宫内膜组织中为35.00%,不同组织间两两比较,差异有统计学意义(P均<0.05);临床分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期EMS患者异位子宫内膜组织中,FAK阳性表达率分别为66.67%、100%、100%,Ⅲ、Ⅳ期EMS患者异位子宫内膜组织中FAK阳性表达率均高于Ⅱ期(P均<0.05)。结论 FAK在EMS患者异位子宫内膜组织中高表达,且临床分期高者FAK表达水平越高。

壮骨镇痛胶囊对裸鼠乳腺癌移植瘤细胞局部黏附斑激酶的影响

目的探讨壮骨镇痛胶囊对裸鼠乳腺癌转移瘤细胞局部黏附斑激酶的作用。方法 32只裸鼠随机分为壮骨镇痛胶囊预防组、壮骨镇痛胶囊治疗组、参一胶囊阳性药物对照组和空白模型组,每组各8只,接种乳腺癌细胞后,对各组裸鼠的抑瘤率及肿瘤细胞FAK等方面进行测定对比。结果壮骨镇痛胶囊预防组抑瘤率最高,与其它各组相比,P<0.05,差异有统计学意义;壮骨镇痛胶囊治疗组和参一胶囊治疗组抑瘤率相当,两者比较,P>0.05,差异无统计学意义。采用免疫组化方法检测移植瘤组织黏附迁移整合素信号传导通路上FAK蛋白表达活性,壮骨镇痛胶囊预防组所得数据与参一胶囊组比较抑制率相当,P>0.05,差异无统计学意义,而壮骨镇痛胶囊预防组、参一胶囊对照组分别与壮骨镇痛胶囊治疗组的积分光密度值比较,均得到P<0.05,差异具有统计学意义。结论壮骨镇痛胶囊能抑制裸鼠FAK蛋白表达活性,预防组较治疗组疗效更佳。

黏附斑激酶及其信号通路在胚胎早期发育中的作用研究进展

黏附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是胞内外信号转导的中枢分子,可以接受胞外的刺激、细胞黏着等各方面的信息以调控细胞的生长、代谢等。现有研究表明,FAK介导的信号传导在胚胎早期发育过程中具有重要作用。本文将介绍FAK信号通路最新的实验和理论进展,对其与胚胎早期发育过程的关系研究进展进行综述,为后续研究提供参考。

黏附斑激酶与子宫内膜异位症的关系研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是在位子宫内膜异位生长、浸润和周期性出血所致的多种临床病理表现,具有和恶性肿瘤相似的生物学行为,是一种性激素依赖性疾病。黏附斑激酶是一种胞质非受体酪氨酸蛋白激酶,其高表达或活性增强与肿瘤细胞的凋亡、生长、增殖、迁移、侵袭、转移和血管形成等多种生物学行为密切相关。与正常子宫内膜组织比较,黏附斑激酶在EMs患者子宫在位内膜、异位内膜组织中高表达。EMs在位内膜具有异位种植生长的特性,在位内膜间质细胞黏附斑激酶表达水平与其增殖活性、黏附和迁移能力呈正相关;富含黏附斑激酶的异位内膜更易侵袭、种植、生长,使病情逐渐加重。雌激素可使EMs在位内膜黏附斑激酶的表达增加,孕激素对黏附斑激酶表达水平无显著影响。

整合素β_1-黏附斑激酶在心肌纤维化中的作用及机制

目的初步探讨整合素β_1-黏附斑激酶(integrin β_1-FAK)在心肌细胞纤维化中的作用与机制。方法将培养的心肌细胞随机分为对照组、血清脂肪酶(LPS)处理组、integrin β_1抑制组、黏附斑激酶(FAK)抑制组及integrin β_1阻断+FAK抑制组。免疫荧光双标法检测原代心肌细胞纯度,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-RCR)检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)、Ⅰ型胶原(Col1A1)、Ⅲ型胶原(Col3A1)和整合素β_1(integrin β_1)mRNA水平的变化,Western blot检测FAK的表达。结果 (1)与对照组比较,LPS能够刺激心肌细胞上调MMP-9、TGF-β_1、Col1A1、Col3A1及integrin β_1表达;(2)与LPS组比较,integrin β_1阻断可以抑制LPS诱导的TGF-β_1、MMP-9、Col1A1及Col3A1信使核糖核酸(mRNA)的上调(P<0.05),并阻断LPS诱导的磷酸化FAK的激活(P<0.05);(3)FAK蛋白抑制剂PF-573228可抑制LPS诱导的TGF-β_1和MMP-9 mRNA上调水平,同时加入integrin β_1封闭性抗体显示相似的效果。结论 Integrin β_1阻断能抑制FAK的磷酸化,下调TGF-β_1、MMP-9、Col1A1及Col3A1的表达,从而改善在持续炎症刺激条件下心肌细胞的纤维化反应进程,为未来临床治疗拓展新思路。

黏附斑激酶对恶性肿瘤的抗失巢凋亡作用及其机制研究进展

黏附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)作为胞质内一种非受体酪氨酸激酶,参与胞内多条信号通路的转导,近年来,随着人们对FAK的逐渐了解,大量研究表明FAK与细胞失巢凋亡密切相关,并参与调控失巢凋亡。本文针对近年来FAK对恶性肿瘤的抗失巢凋亡作用及其机制的研究进展进行综述。

黏附斑激酶在宫颈癌组织中表达及意义

目的探讨黏附斑激酶(FAK)在宫颈癌组织中表达及意义。方法选取2010年2月至2012年12月在湖北省宜昌市第二人民医院妇产科择期行宫颈癌手术治疗的患者76例,免疫组化法检测宫颈癌和癌旁组织中FAK蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测宫颈癌和癌旁组织中FAK基因表达,生存分析采用Kaplan-Meier法和Cox比例风险模型。结果宫颈癌组织中FAK蛋白阳性表达率和FAK m RNA相对表达量高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组织中FAK蛋白阳性表达率和FAK m RNA相对表达量均与FIGO分期、病理分级和淋巴结转移有关(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,FAK蛋白阴性表达患者平均生存时间56.84个月,FAK蛋白阳性表达患者平均生存时间40.32个月,Log-Rank检验差异有统计学意义(χ2=4.029,P=0.045);Cox比例风险模型分析结果显示,FIGO分期、淋巴结转移和FAK蛋白阳性是影响患者预后的风险因素(OR=2.262、2.120和2.037,P<0.05)。结论 FAK在宫颈癌组织中呈高表达,且与宫颈癌恶性程度有关,可作为评估患者预后的参考指标。

胞质分裂蛋白调节因子1通过激活黏附斑激酶调控膀胱癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨胞质分裂蛋白调节因子1(PRC1)对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响及黏附斑激酶(FAK)在其中的作用。方法设计合成靶向抑制PRC1的小干扰RNA(siRNA),分别转染人膀胱癌细胞系EJ和T24,两种细胞系各分为对照组(转染对照siRNA)和敲低组(转染PRC1 siRNA),通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹法检测两组PRC1、FAK、桩蛋白(Paxillin)的mRNA和蛋白质表达水平以及FAK和Paxillin的磷酸化水平。通过细胞迁移和侵袭实验分析两组的迁移和侵袭能力。采用t检验进行组间比较。结果敲低组EJ、T24细胞PRC1 mRNA表达量(0.43±0.11、0.55±0.07)低于对照组(1.00±0.19、1.00±0.20,t=4.533、3.699,P<0.05)。敲低组FAKmRNA表达量(0.95±0.05、1.09±0.14)与对照组差异无统计学意义(1.00±0.20、1.00±0.20,t=0.423、0.622,P>0.05)。敲低组PaxillinmRNA表达量(1.12±0.01、1.02±0.10)相较对照组差异无统计学意义(1.00±0.08、1.00±0.04,t=2.521、0.360,P>0.05)。敲低组EJ、T24细胞FAK和Paxillin蛋白质表达量(0.90±0.02、0.99±0.02和0.93±0.01、1.10±0.02)相较对照组差异无统计学意义(0.88±0.12、0.99±0.01和0.91±0.30、1.08±0.02,t=0.714、0.147和0.806、1.019,P>0.05)。敲低组EJ、T24细胞FAK和Paxillin蛋白质磷酸化水平(0.25±0.02、0.20±0.01和0.47±0.02、0.84±0.04)显著低于对照组(2.22±0.30、2.73±0.15和0.86±0.02、1.13±0.04,t=11.510、28.390和20.450、8.576,P<0.01)。迁移实验中敲低组穿越的细胞数[(38.33±3.21)、(34.67±2.52)个]显著少于对照组[(114.00±7.55)、(71.33±4.04)个,t=15.970、13.340,P<0.01],差异有统计学意义。侵袭实验中敲低组穿越的细胞数[(24.67±3.21)、(29.00±3.00)个]显著少于对照组[(84.00±5.56)、(69.33±3.21)个,t=15.980、15.890,P<0.01]差异有统计学意义。结论下调PRC1的表达可通过抑制FAK的磷酸化降低膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力.

基于黏附斑激酶跨膜信号系统探讨化瘀消癥复方对输卵管妊娠滋养细胞迁移的调控机制

目的:基于黏附斑激酶(FAK)为中心的细胞外基质-整合素-细胞骨架跨膜信号系统,探讨化瘀消癥复方对输卵管妊娠滋养细胞迁移的调控机制。方法:对输卵管妊娠绒毛滋养层细胞进行体外培养与鉴定,以含化瘀消癥复方水提液的培养基对输卵管妊娠滋养细胞进行培养,分为A(空白)组、B(FAK抑制剂Y15)组、C(Y15+中药中剂量)组、D(中药低剂量)组、E(中药中剂量)组、F(中药高剂量)组;应用Transwell法检测各组药物对滋养细胞迁移力的影响,Western Blot法检测各组药物对FAK、p-FAK、整合素β1(Integrinβ1)、桩蛋白(Paxillin)、尿激酶型纤溶酶激活物(uPA)蛋白表达的影响。结果:与A组比较,各给药组均能显著抑制细胞的迁移能力(P<0.05),各中药组呈一定的剂量依赖性;与A组、B组比较,C组、F组均可下调FAK、p-FAK、Integrinβ1、Paxillin、uPA蛋白表达水平(P<0.05);各中药组对蛋白的影响呈一定的浓度依赖性。结论:化瘀消癥复方可能发挥与FAK抑制剂类似的效应,起到抑制输卵管妊娠滋养细胞迁移的作用,其机制可能是与下调Integrinβ1,抑制FAK的信号转导,引起下游Paxillin的表达减少,负调控uPA,进而降调滋养细胞黏附斑激酶跨膜信号系统活性相关。

18β-GA对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、黏附和侵袭能力的影响

目的观察18β-甘草次酸(18β-GA)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、黏附和侵袭能力及黏附斑激酶(FAK)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响。方法将18β-GA作用于HO-8910PM细胞,采用MTT法检测HO-8910PM细胞增殖抑制率;细胞黏附试验检测细胞黏附能力;Transwell chamber法检测细胞侵袭能力;Westernblot法检测细胞FAK、MMP-9蛋白表达水平。结果 18β-GA明显抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的生长增殖、黏附和侵袭能力;Western blot法检测表明药物能下调FAK、MMP-9蛋白的表达。结论 18β-GA可抑制HO-8910PM细胞黏附、侵袭,其机制可能是通过下调FAK、MMP-9蛋白表达而进行的。

苦杏仁苷抑制人肺癌NCI-H1299细胞体外侵袭的机制

探讨天然产物苦杏仁苷对人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞体外侵袭与转移的抑制作用及其机制。采用MTS法检测苦杏仁苷对肿瘤细胞生长的影响;采用Transwell小室和划痕试验检测苦杏仁苷对细胞侵袭和迁移能力的影响;采用Western blot和RT-PCR试验检测苦杏仁苷对MMP-2/9、integrinβ1、integrinβ4、整合素连接激酶(ILK)、黏附斑激酶(FAK)、p-FAK和β-catenin的表达水平,以及Akt和RICTOR的磷酸化水平的影响。结果表明:苦杏仁苷可显著抑制H1299细胞体外增殖,0.5和1 mg/m L苦杏仁苷作用H1299细胞48 h后,肿瘤细胞侵袭、迁移能力显著下降,MMP-2/9、integrinβ1/4、ILK、FAK、β-catenin蛋白和mRNA表达,MMP-2/9活性以及FAK、Akt和RICTOR磷酸化水平显著下调(P均<0.05)。

丹参素对肝星状细胞RhoA/RockⅠ信号通路的影响

目的:观察丹参素对肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSC)RhoA/RockⅠ信号通路的影响。方法:体外分离、培养大鼠肝HSC,以RockⅠ特异性抑制剂Y-27632 30μmol/L、0.062 5～0.25 mmol/L丹参素分别与纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)刺激的HSC共同孵育。四甲基偶氮唑盐法测定HSC增殖,酶联免疫吸附试验测定Ⅰ型胶原分泌,Western blot测定RhoA,p-Mlc(Thr18/Ser19)p,-FAK(Tyr397)蛋白表达。结果:FN作用24h能刺激HSC增殖,Ⅰ型胶原分泌,且上调了RhoAp、-Mlc(Thr18/Ser19)蛋白,p-FAK(Tyr397)蛋白的表达;丹参素和RockⅠ特异性抑制剂Y-27632均能明显抑制上述效应。结论:FN刺激活化了HSC的RhoA/RockⅠ信号通路、整合素信号通路;丹参素抑制HSC增殖,胶原分泌的作用与阻断RhoA/RockⅠ信号通路有关;RhoA/RockⅠ信号通路阻断后对整合素信号通路关键酶FAK下调效应为丹参素经RhoA/RockⅠ信号通路抗纤维化的分子机制之一。

华蟾素联合阿霉素对脑胶质瘤细胞增殖、体外侵袭能力的影响及机制研究

目的:研究华蟾素联合阿霉素(Dox)作用于脑胶质瘤U251细胞对其体外侵袭能力的影响。方法:将脑胶质瘤U251细胞株消化处理成3×10^(4)/ml的悬液,接种于96孔板中,分四组。阿霉素组分别加入0.10、0.25、0.50、1.00、2.00 ng/ml的Dox;华蟾素组分别加入5.00、10.00、15.00、20.00、25.00μg/ml的华蟾素;联合组加入0.10、0.50、2.00 ng/ml的阿霉素和10.00μg/ml的华蟾素;对照组以同剂量RPMI-1640培养液替换。各组分别培养24、48、72 h,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)法检测各组不同干预下脑胶质瘤U251细胞增殖抑制力的变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测在不同干预下桩蛋白(Paxillin)、局部黏附斑激酶(FAK)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)在各组细胞中的表达差异;Boyden chamber小室体外侵袭实验检测华蟾素联合阿霉素对脑胶质瘤U251细胞侵袭、迁移能力的影响。结果:阿霉素、华蟾素单药组、联合组均能抑制脑胶质瘤U251细胞增殖,但阿霉素达到一定浓度后抑制脑胶质瘤U251细胞的增殖效果欠佳,华蟾素联合阿霉素组对脑胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用强于各单药作用组,且显示与药物浓度、作用时间呈正相关性。联合组对脑胶质瘤U251细胞的抑制增殖效果最显著。联合组中Paxillin、FAK和MMP-2的基因和蛋白表达水平明显下调,与其它单药组比较,差异具有统计学意义(均P<0.05);Boyden chamber小室体外侵袭实验结果显示,对照组穿膜细胞数最多,细胞迁移能力最强,且显著高于阿霉素、华蟾素单药组和联合组的穿膜细胞数,组间比较差异也具有统计学意义(均P<0.05)。结论:华蟾素联合阿霉素可以减弱脑胶质瘤U251细胞的体外侵袭能力,可能与Paxillin、FAK和MMP-2的基因、蛋白表达降低密切相关,这为脑胶质瘤U251细胞联合化疗和靶向治疗提供可行的实验理论依据。

下坡跑运动对骨骼肌α7β1整合素及FAK表达的影响

通过观察下坡跑运动后α7β1整合素及FAK的表达和FAK活性的变化,探讨α7β1整合素在运动重复效应中作用机制。将32只小鼠随机分为安静对照组,运动后3 h组、24 h组、8 d组。小鼠进行一次性下坡跑运动,速度为17 m/min,坡度为-20°,时间为30 min。各组于各时刻点摘眼球取血及取双侧腓肠肌。比色法检测血清CK活性,Real-time PCR检测α7β1整合素及FAK的m RNA表达,Western blot检测α7β1整合素及p FAK397的蛋白表达。结果显示一次下坡跑运动后CK活性升高显著,且在24 h增幅增大。α7 integrin m RNA在一次运动后3 h显著增加,但在24 h变化不明显,但8 d时仍增加显著,其蛋白水平在运动后3 h显著增加,虽在24 h和8 d时升高程度逐渐降低但仍呈显著。β1 integrin m RNA在一次运动后3 h显著增加,24 h及8 d变化不明显,蛋白水平在一次运动后3 h呈显著升高,24 h升高程度增加,在8 d时回复。FAK m RNA在一次运动后3 h显著增加,24 h及8 d变化不明显,p FAK397水平在一次运动后呈现显著升高,24 h升高程度降低,8 d时基本回复。结果表明α7β1整合素-FAK信号通路介导了运动重复效应。

健脾解毒中药延长肝癌裸鼠带瘤生存时间及对PTEN/FAK的影响

目的探讨健脾解毒方提高裸鼠人肝癌模型的"带瘤生存"作用和对PTEN、FAK的影响。方法 40只裸鼠随机分为4组,每组10只,其中3组制作裸鼠人肝癌模型,分别给予健脾解毒方、生理盐水、替加氟(FT-207)灌胃,每天1次,持续71 d;第4组不造模作空白对照,每天给予生理盐水。实验过程中记录裸鼠生存时间和体质量,免疫组化SP法检测各组肝组织和癌组织PTEN、黏附斑激酶(FAK)的表达,IPP6.0分析平均光密度。结果生存分析表明健脾解毒方组裸鼠累积生存率显著高于其余各组(P<0.05或0.01);健脾解毒方组体质量减轻率显著低于其余各组(P<0.05或0.01);累积生存率和体质量减轻率FT-207组最差(P均<0.05);各组肿瘤体积比较无显著性差异(P均>0.05);PTEN在肝组织中的表达水平(平均光密度)显著高于癌组织(P<0.01);肝癌模型肝组织中PTEN表达水平明显低于空白组(P<0.05或0.01);FT-207组肝组织和癌组织中PTEN表达水平明显低于健脾解毒方组和生理盐水组(P<0.05或0.01);FAK在各组肝组织中的表达水平显著高于癌组织(P<0.01);健脾解毒方组肝组织中FAK表达水平显著高于其余各组(P均<0.01),癌组织中FAK表达水平显著低于其余各组(P均<0.01)。结论健脾解毒方能延长荷瘤鼠的带瘤生存时间,延缓体质量下降,其作用可能与健脾解毒方能良性调节PTEN、FAK的表达有关。

miR-181d-5p对人结肠癌细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨微小RNA-181 d-5 p(microRNA miR-181 d-5 p)对人结肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法:采用miR-181d-5p抑制物转染人结肠癌细胞系HCT116细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Real-time PCR和Western blot技术检测细胞miR-181 d-5 p、第10染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)、黏附斑激酶(FAK)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、半胱天冬蛋白酶3(Caspase-3)mRNA和PTEN、FAK、p-FAK、Bcl-2、激活型Caspase-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达,Targetscan软件在线预测及双荧光素酶实验分析miR-181 d-5 p和PTEN的调控关系。结果:与阴性对照组比较,miR-181d-5p抑制物组miR-181 d-5 p mRNA表达明显下调(P<0.01),凋亡细胞明显增加(P<0.01),PTENmRNA表达水平明显上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达水平明显下调(P<0.01),PTEN、cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),p-FAK、Bcl-2蛋白表达水平显著下调(P<0.01),其余各组之间差异均无统计学意义(P>0.05);Targetscan软件预测显示PTEN基因3′UTR含有miR-181 d-5 p的结合位点,双荧光素酶结果显示与突变型PTEN 3′UTR联合miR-181 d-5p模拟物组相比,野生型PTEN 3′UTR联合miR-181d-5p模拟物组荧光素酶活性明显降低,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论:miR-181 d-5 p可通过靶向调控PTEN抑制人结肠癌细胞凋亡,可成为结肠癌临床分子靶向治疗的潜在靶点。

抗纤抑癌方对肝癌前病变大鼠整合素α5β1/FAK信号通路的影响

目的:基于整合素α5β1/FAK信号通路探讨抗纤抑癌方干预肝癌前病变的作用机制。方法:雄性Wistar大鼠85只,随机分为正常组、模型组、抗纤抑癌低、中、高剂量组及鳖甲软肝组。采用二乙基亚硝胺腹腔注射制备肝癌前病变模型,用抗纤抑癌方进行干预,以复方鳖甲软肝片作为对照;采用HE、Masson染色观察大鼠肝脏组织病理情况,实时荧光定量PCR及Western blot法检测肝组织中ITG-α5、ITG-β1、FN及FAK mRNA及蛋白的表达水平。结果:抗纤抑癌方可明显改善大鼠肝脏组织纤维化程度,降低肝细胞的变性、坏死;与模型组相比,抗纤抑癌中、高剂量组能显著降低ITG-α5、ITG-β1、FN、FAK mRNA的表达及ITG-α5、ITG-β1蛋白的表达(P<0.01,P<0.05);与鳖甲软肝组相比,抗纤抑癌中、高剂量组能显著降低ITG-α5、ITG-β1、FN mRNA的表达及ITG-β1蛋白的表达(P<0.05)。结论:抗纤抑癌方可通过调控整合素α5β1/FAK信号抑制肝癌前病变。

PTEN在石英诱导的HELF细胞FAK和α-SMA改变中的作用

目的探讨第10号染色体丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN)在石英诱导人胚肺成纤维细胞(human embryo lung fibroblasts, HELF)黏附斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)和平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)改变中的作用。方法分别在含0、25、50、100和200μg/cm2石英的低血清培养基中培养HELF细胞24 h,用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)法确定石英染毒HELF细胞的剂量,同时在倒置显微镜下观察不同剂量石英对HELF细胞形态的影响。50μg/cm^(2)石英溶液分别染毒HELF细胞0、1、2、4、8、12和24 h, 0 h组HELF细胞作为对照组,并用Western blot实验检测HELF在不同染毒时间点的PTEN、p-PTEN、FAK、p-FAK和α-SMA蛋白水平。2×10^(-3) mol/L PTEN抑制剂VO-Ohpic与石英共同处理HELF细胞24 h,同时设空白HELF细胞组和HELF石英染毒组,用Western blot实验检测各组HELF细胞FAK、p-FAK和α-SMA蛋白表达情况。结果随着石英浓度增加,HELF细胞活力呈先增加后下降的变化,其中50μg/cm2石英染毒组细胞活力(144.91±5.10)显著高于0μg/cm2组(101.23±6.57)(P<0.05)。与对照组相比,12 h和24 h的PTEN和p-PTEN表达水平均显著降低[PTEN:12 h为(0.44±0.08),24 h为(0.25±0.02);p-PTEN:12 h为(0.09±0.01),24 h为(0.01±0.00)];而12 h(0.92±0.05)和24 h(0.89±0.01)的FAK,以及24 h时的p-FAK(0.77±0.02)和α-SMA(1.32±0.01)表达水平则显著升高(P<0.05)。石英和PTEN抑制剂共同处理组HELF细胞FAK(0.25±0.03)、p-FAK(0.40±0.02)和α-SMA(0.36±0.01)表达水平均显著高于石英染毒组(P<0.05)。结论在石英诱导HELF细胞FAK、p-FAK和α-SMA表达水平增高的过程中,PTEN负调控FAK、p-FAK和α-SMA表达水平。

补阳还五汤对高脂血症模型大鼠FAK-PI3K-AKT信号通路的作用影响

目的基于黏附斑激酶(FAK)-磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路探讨补阳还五汤对高脂血症模型大鼠血小板异常的调控机制。方法选取清洁级健康SD大鼠50只,其中40只采用高脂饲料(基础饲料+15%猪油+20%蔗糖+1.2%胆固醇+0.2%胆酸钠)喂养4周建立高脂血症模型,并将其分为补阳还五汤高剂量组(高剂量组,14.0 g/kg)、补阳还五汤低剂量组(低剂量组,3.5 g/kg)、辛伐他汀对照组(对照组,0.004 g/kg)、模型组,每组10只;另10只大鼠作为空白组,空白组继续伺以普通饲料,其他组继续高脂饲料喂养。各给药组灌服相应药物,空白组和模型组灌服等体积蒸馏水,每天1次,连续4周。末次给药后,检测各组大鼠血浆中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;Western blot法检测FAK、4-磷酸-磷脂酰肌醇-5-激酶(PIP5K)、磷脂酰肌醇激酶β抗体(PI3Kp110β)、磷酸化蛋白激酶B[p-AKT(Ser473)]、磷酸化蛋白激酶1/2/3抗体[p-AKT1/2/3(Thr308)]、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)相关蛋白的表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠血浆TC、TG和LDL-C水平均明显升高(P<0.01),且蛋白FAK、PI3Kp110β、PIP5K、p-AKT(Ser473)和p-AKT1/2/3(Thr308)水平均上调;与模型组比较,各给药组大鼠血浆TC、TG和LDL-C水平均明显降低(P<0.05);对照组和低剂量组均抑制了该信号通路的蛋白表达。结论补阳还五汤能降低高脂血症模型大鼠血脂异常状态,其作用机制可能与抑制FAK-PI3K-AKT信号通路的激活有关。

FAK对VEGF诱导小鼠肺血管内皮通透性升高作用研究

目的黏附斑激酶(FAK)是由细胞因子激活的一种细胞质酪氨酸激酶,对细胞增殖、迁移及血管通透性起重要调控作用。本研究探讨FAK在肿瘤细胞分泌的血管内皮生长因子(VEGF)诱导肺血管内皮细胞通透性升高过程中的作用机制。方法将4T1细胞(小鼠乳腺癌细胞系)接种至Balb/c小鼠乳腺部位建立乳腺癌实验动物模型。选取鼠龄、质量大致相同的小鼠分为荷瘤组(4T1组,n=6)、空白对照组(PBS组,n=6)和贝伐珠单抗治疗组(BEVA组,n=6),测定小鼠肺组织的湿干质量比,评价肺水肿和肺组织血管通透性。ELISA法检测血清VEGF水平,免疫组织化学法检测肺组织中FAK的表达。结果对照组小鼠肺组织湿干质量比为3.13±0.24,4T1组为4.25±0.33,4T1组比对照组明显升高,差异有统计学意义,P<0.05。对照组小鼠血清VEGF水平为(10.65±3.97)pg/mL,4T1组为(119.11±60.52)pg/mL,4T1组比对照组明显升高,差异有统计学意义,P<0.05。免疫组化检测结果显示,在小鼠肺组织中,FAK主要定位于肺血管内皮细胞的细胞质,肺上皮细胞也有表达。FAK在4T1组小鼠肺组织中呈弥漫性表达,表达水平高于对照组。VEGF阻断剂贝伐珠单抗处理荷瘤小鼠,BEVA治疗组小鼠肺水肿减轻,肺组织湿干质量比为3.42±0.39,较4T1组(4.25±0.33)明显下降,差异有统计学意义,P<0.05。BEVA治疗组小鼠肺组织中FAK表达明显降低。结论原发肿瘤分泌的VEGF可诱导肺组织血管通透性升高,诱发肺水肿,其发生机制可能与血管内皮细胞FAK的活化表达相关。