金黄色葡萄球菌婴幼儿分离株黏附毒素与细胞毒素编码基因研究

目的调查金黄色葡萄球菌婴幼儿分离株的黏附毒素与细胞毒素编码基因携带状况。方法收集儿童医院2013年10-12月金黄色葡萄球菌婴幼儿分离株20株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析9种黏附毒素编码基因、9种细胞毒素编码基因及2种荚膜抗原编码基因。结果 20株金黄色葡萄球菌共检出7种黏附毒素编码基因,5种细胞毒素编码基因,荚膜抗原编码基因cap5占15.0%、cap8占85.0%;黏附毒素、细胞毒素及荚膜抗原3类编码基因每一株均有阳性检出;阳性基因可分为7种模式,携带≥10种基因的菌株占大多数。结论黏附毒素和细胞毒素编码基因的高检出率是该组金黄色葡萄球菌在患儿皮肤软组织和病灶部定植和感染的重要原因,对金黄色葡萄球菌婴幼儿分离株进行9种黏附毒素编码基因、9种细胞毒素编码基因及2种荚膜抗原编码基因检测研究尚为国内外首次。

ICU主动筛查分离的金黄色葡萄球菌黏附毒素和超抗原基因研究

目的调查ICU主动筛查分离的金黄色葡萄球菌黏附毒素和超抗原基因携带情况,为治疗和制定预防控制方案提供参考依据。方法收集2013-2014年鼻拭子主动筛查的金黄色葡萄球菌46株,采用法国生物梅里埃公司产品chromID S.aureus平板筛查和Vitek-2细菌鉴定仪鉴定;采用聚合酶链反应(PCR)法检测16种黏附毒素基因、20种超抗原基因。结果 46株金黄色葡萄球菌共检出9种黏附毒素基因、10种超抗原基因,黏附毒素基因总检出率达100.0%、超抗原基因总检出率达65.0%。结论金黄色葡萄球菌黏附毒素和超抗原基因高检出率是造成ICU患者肺部或血流感染的重要原因。

产肠毒素大肠杆菌K88ac-STa-LTB嵌合抗原多克隆抗体制备及植物乳杆菌表面表达研究

为了研究植物乳杆菌(Lactobacillus,plantarum,L.plantarum)表面表达黏附素-肠毒素(K88ac—STa—LTB)嵌合抗原的可行性,试验利用原核表达载体pET28a表达纯化此嵌合抗原,蛋白复性后免疫Babl/c小鼠制备多克隆抗体,以制备的多克隆抗体作为一抗,采用Westem-blot、流式细胞术及间接免疫荧光试验研究此嵌合抗原在植物乳杆菌表面表达情况。结果表明:K88ac—STa—LTB嵌合抗原在大肠杆菌中以包涵体形式表达,纯化并复性的重组蛋白大小约为32.5 ku,制备的抗体效价为121b。重组菌株NC8-pLP1261-8576表达的K88ac-STa-LTB嵌合抗原经Western-blot分析,能被鼠抗LTB单克隆抗体及自制的鼠抗K88ac-STa-LTB多克隆抗体识别,流式细胞术及荧光显微镜观察证明此嵌合抗原在菌体表面表达。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒素的主要编码基因研究

目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的毒素编码基因携带情况,对血液分离株MRSA,进行黏附毒素、细胞毒素、侵袭性酶、超抗原、外毒素、荚膜抗原等6类39种毒素编码基因检测,为临床治疗提供参考依据。方法收集医院2011年1月-2012年12月临床住院患者送检血液标本分离的MRSA 20株,聚合酶链反应(PCR)法检测包括7种黏附毒素(sasX、fnbA、clfA、clfB、icaA、cna、efb)、9种细胞毒素(hla、hlb、hld、hlg、hlg-2、pvl、lukE、lukM、psm-mec)、6种侵袭性酶(ssp、splB、sak、nuc、hysA、lip)、4种超抗原(sea、seb、eta、tst)、11种外毒素、2种荚膜抗原(cap5、cap8)等6类毒素39种主要编码基因检测。结果 20株MRSA中黏附毒素、细胞毒素、外毒素等3类毒素编码基因每一株至少有≥2种编码基因检出,侵袭性酶编码基因19株阳性率95.0%、超抗原编码基因5株阳性率25.0%、荚膜抗原编码基因19株阳性率95.0%,39种毒素编码基因检测结果的样本聚类分析,发现3、4、20与6、18号株分别处在同一单元,可能为菌株的克隆播散。结论患者被产黏附毒素、细胞毒素、侵袭性酶、外毒素、荚膜抗原等5类毒素的MRSA定植或体表感染,在菌株细胞毒素、侵袭性酶作用下,MRSA侵入血液循环系统引起感染,样本聚类分析提示可能存在菌株的克隆播散。