阴道毛滴虫黏附蛋白33基因原核表达载体的构建及表达

目的构建阴道毛滴虫黏附蛋白33基因原核表达载体并诱导其体外表达。方法pMD-18T-ap33重组质粒和pUC18空质粒经BamH Ⅰ和XbaⅠ限制性内切酶双酶切,将ap33基因亚克隆入pUC18载体并进行筛选和鉴定。重组质粒经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳及Western-blot杂交鉴定重组蛋白。结果经双酶切及PCR鉴定,构建的重组质粒为阳性重组子,诱导出的重组蛋白大小约为Mr36000,与理论值基本相符。结论成功构建重组质粒并获得体外表达。

阴道毛滴虫症状株和带虫株黏附蛋白33基因的克隆和序列比较

目的分析和比较阴道毛滴虫症状株和带虫株黏附蛋白33基因序列。方法提取阴道毛滴虫各分离株基因组DNA,PCR扩增目的基因,构建重组质粒,克隆,鉴定和序列比较。结果黏附蛋白33基因长度约为930bp,成功构建pMD-18T-ap33重组质粒。同GenBank上的黏附蛋白33基因序列比较,症状株黏附蛋白33基因序列与已知序列有2个碱基不同,而带虫株黏附蛋白33基因序列与已知序列有1个碱基存在差别。结论阴道毛滴虫症状株和带虫株黏附蛋白33基因序列存在差异。

阴道毛滴虫黏附蛋白33基因真核表达载体的构建与鉴定

目的构建并鉴定阴道毛滴虫黏附蛋白33基因(adhesionprotein33gene,ap33gene)真核表达载体。方法提取阴道毛滴虫分离株基因组DNA,PCR扩增黏附蛋白33基因,克隆入pMD-18T线性质粒,重组子经双酶切、PCR鉴定及测序分析。鉴定出的重组质粒pMD-18T-ap33和pcDNA3.1(+)空质粒经BamHⅠ和XbaⅠ限制性内切酶双酶切,凝胶电泳后回收ap33目的基因和pcDNA3.1(+)空质粒酶切片段,将ap33基因亚克隆入pcDNA3.1(+)载体并进行筛选和鉴定。结果PCR扩增出阴道毛滴虫黏附蛋白33基因,重组质粒pMD-18T-ap33经双酶切,PCR及序列分析,ap33基因的长度为930bp,与GenBank上公布的ap33基因序列同源性达99%。经凝胶电泳、PCR鉴定和限制性酶切鉴定,构建出pcDNA3.1(+)-ap33重组质粒。结论成功构建了阴道毛滴虫pMD-18T-ap33克隆质粒及pcDNA3.1(+)-ap33重组质粒。

阴道毛滴虫AP33基因克隆与序列分析

目的 :阴道毛滴虫黏附蛋白AP33基因的克隆与序列分析。方法 :提取阴道毛滴虫mRNA ,逆转录合成cDNA ,PCR得到阳性条带 ,将其克隆到pUCm T载体进行PCR、酶切及测序分析 ,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性分析。结果 :阳性克隆经酶切鉴定 ,目的基因片段长度为 92 7bp。测序结果目的基因与阴道毛滴虫黏附蛋白AP33 1、阴道毛滴虫黏附蛋白AP33 3、阴道毛滴虫黏附蛋白AP33 2分别具 99%、97%和 94 %的同源性。结论 :成功克隆出阴道毛滴虫AP33基因序列 ,与已公布的AP33序列有很高的同源性。这为今后该蛋白的原核表达和大量制备提供一定的基础。

阴道毛滴虫AP33基因的乳酸菌表达载体的构建

目的:构建阴道毛滴虫AP33基因的乳酸菌表达载体。方法:提取阴道毛滴虫总RNA为模板,经RT-PCR得到AP33基因的PCR特异性产物,将其连接入乳酸菌分泌表达载体pVE5523质粒中,并转化入TOP10菌中保存。结果 :构建的AP33-pVE5523重组表达载体,经PCR鉴定正确;获得的目的基因片段经测序与GenBank公布的阴道毛滴虫AP33基因序列100%符合。结论:成功构建AP33-pVE5523表达载体,为进一步研究阴道毛滴虫AP33基因在乳酸菌中的表达打下基础。