白术多糖对小肠上皮细胞细胞屏障及黏附连接蛋白表达的影响

目的观察白术多糖对小肠上皮细胞(IEC-6)渗透性的影响,并从其对黏附连接蛋白表达影响的角度,探讨白术多糖对肠黏膜上皮屏障的作用及机制。方法在3种实验条件下[正常含钙、含钙+多胺合成抑制剂(DFMO)、无钙培养],以检测Transwell小室酚红透过率的方法观察细胞间渗透性;以Western Blot法检测细胞黏附连接蛋白(E-cadherin、α-catenin和β-catenin)的表达。结果(1)正常含钙培养时,白术多糖(25、50、100 mg·L-1)能降低细胞间渗透性并提高黏附连接蛋白表达(P<0.05或P<0.01);(2)含钙+DFMO负荷时,细胞间渗透性增加且黏附连接蛋白表达下降(P<0.01);各剂量的白术多糖能逆转DFMO所致的细胞间渗透性增加,且对黏附连接蛋白表达下降有拮抗作用(P<0.05或P<0.01);(3)无钙培养时,细胞间渗透性增加且黏附连接蛋白表达下降(P<0.01),各剂量的白术多糖可逆转无钙培养所致的细胞间渗透性增加及E-cadherin表达降低(P<0.05或P<0.01),但对α-catenin和β-catenin表达无明显影响。结论白术多糖有增强小肠上皮屏障的作用,其机制与影响黏附连接蛋白表达有关,研究结果为探讨益气健脾中药白术对胃肠黏膜保护作用提供了参考。

RhoA对小鼠成釉细胞黏附连接的影响

目的:引进在成釉细胞中表达RhoA显性抑制基因的EGFP-RhoADominant Negative(EGFP-RhoADN)转基因鼠模型,研究RhoA通路对成釉细胞黏附连接复合体的影响,探索EGFP-RhoADN转基因鼠牙釉质发育缺陷的机制,为牙胚发育及牙齿再生的研究提供实验依据。方法:所有实验均以EGFP-RhoADN转基因鼠为实验组,以同时期野生型小鼠为对照组。使用扫描电子显微镜观察1月龄的两组小鼠下颌第一磨牙牙釉质外形,每组样本量为20,记录牙釉质厚度。采用RT-PCR、Western blot方法检测并比较出生后4 d(postnatal-4-day,P4)的两组小鼠下颌第一磨牙上皮层细胞间黏附连接复合体成分基因和蛋白表达的改变。结果:1月龄的EGFP-RhoADN转基因鼠下颌第一磨牙牙釉质厚度比同时期野生型小鼠牙釉质厚度下降[(84.60±0.20)μm vs.(106.24±0.24)μm,P<0.05],出生后4 d的EGFP-RhoADN转基因鼠成釉细胞层上皮钙黏附蛋白(epithelium-cadherin,E-cadherin)、α-上皮连环蛋白(α-E-catenin)、pan-钙黏附蛋白(pan-cadherin)表达水平较同时期野生型小鼠下调,β-连环蛋白(β-catenin)表达水平较同时期野生型小鼠上调,E-cadherin基因表达量较同时期野生型小鼠下调(0.93±0.01 vs.1.00±0.02,P<0.05),β-catenin基因表达量较同时期野生型小鼠上调(1.23±0.03 vs.1.00±0.05,P<0.05)。结论:EGFP-RhoADN转基因鼠的下颌第一磨牙牙釉质发育出现缺陷,牙釉质厚度下降,这一现象可能是由于RhoA通路抑制引起成釉细胞黏附连接的改变,从而影响了牙釉质正常发育。

抵当汤早期干预对2型糖尿病大鼠血管内皮细胞黏附连接的影响

目的:探讨抵当汤早期干预对2型糖尿病大鼠血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VEC)黏附连接作用的影响。方法:采用投喂高脂饲料并尾静脉注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型,将大鼠随机分为7组(正常对照组、糖尿病模型组、二甲双胍组、辛伐他汀组及抵当汤早、中、晚期干预组),采用Western-Blot法检测各组大鼠VEC钙黏蛋白(VE-Cad)表达;实时荧光定量PCR方法检测Ras相关蛋白1(RAS-related protein 1,Rap1)、膜相关鸟苷酸激酶1(MAGI1)、酪氨酸蛋白激酶2(Tie2)的表达水平;HE染色后观察各组大鼠胸主动脉结构。结果:与正常对照组比较,糖尿病模型组VE-Cad、Rap1、MAGI1、Tie2表达下降(P<0.05);与糖尿病模型组比较,抵当汤早、中期干预组VE-Cad、Rap1、MAGI1、Tie2表达上升(P<0.05);与抵当汤晚期干预组比较,早期干预组VE-Cad、Rap1、MAGI1、Tie2表达上升(P<0.05)。结论:抵当汤早期干预可增强VEC间黏附连接,增强血管稳定性,改善血管通透性,延缓糖尿病大血管病变的发展。

四种黏附连接功能群在睾丸中的作用回顾

主要对睾丸中已经确定的四种基于肌动蛋白的细胞黏附连接功能群,即钙粘蛋白-连环蛋白(Cadherin-Catenin)、Nectin-Afadin-Ponsin、整合素-层粘连蛋白(Integrin-Laminin)、Vezatin-Myosin等细胞黏附连接功能群进行回顾。从蛋白的结构、功能等方面对睾丸中各功能群主要蛋白成员及其作用方式进行总结分析,同时指出该领域目前存在的问题并对未来发展趋势进行简要展望。

肠易激综合征肠黏膜屏障细胞间黏附连接的改变

目的探讨肠易激综合征（IBS）结肠黏膜是否存在黏附连接——E－钙黏蛋白（E－cad）、β－链蛋白（β－cat）的改变。 方法以结直肠扩张联合束缚应激建立SD大鼠IBS模型，模型组SD大鼠8只，正常对照组SD大鼠8只，取大鼠距回盲部5 cm结肠组织（I）和直肠乙状结肠交界处结肠组织（R），用实时荧光定量PCR、蛋白印迹和免疫荧光检测E－cad、β－cat mRNA和蛋白水平及黏附连接结构变化。根据罗马Ⅲ标准收集2016年于浙江中医药大学附属第一医院消化内镜中心接受肠镜检查的腹泻型IBS（IBS－D）患者17例及健康志愿者（健康对照）17名，取I处和R处结肠的活检标本，用蛋白印迹、免疫荧光和透射电镜检测结肠上皮细胞间E－cad、β－cat蛋白表达以及黏附连接结构的改变情况。 结果（1）IBS模型组大鼠I和R处E－cad的mRNA水平和蛋白表达均明显低于对照组大鼠（均P〈0.05）。IBS模型组大鼠I处和R处β－cat的mRNA水平与对照组大鼠比较差异无统计学意义，β－cat蛋白水平表达在I处低于对照组大鼠（P〈0.05），在R处与对照组大鼠比较差异无统计学意义。免疫荧光结果可见IBS模型组大鼠I处和R处E－cad结构较对照组大鼠模糊；β－cat在对照组和IBS模型组大鼠I和R处无明显差异。（2）IBS－D患者的I处和R处上皮组织中E－cad的蛋白表达均低于健康对照（I处：0.85±0.30比1.24±0.34，P＝0.00; R处：0.86±0.17比1.14±0.48, P＝0.05）；β－cat蛋白表达也均低于健康对照（I处：0.85±0.39比1.22±0.51, P＝0.04; R处：0.92±0.22比1.16±0.31, P＝0.02）。免疫荧光结果可见E－cad和β－cat在健康对照的I处和R处结肠上皮细胞均沿细胞膜分布，呈蜂窝线性荧光，而IBS－D患者E－cad和β－cat结构较模糊，胞质内分布紊乱。透射电镜观察到在IBS－D患者I处和R处上皮细胞间连接间隙较健康对照增宽。 结论IBS－D患者存在细胞间连接间隙增宽，全结肠细胞间黏附连接蛋白E－cad和β－cat的降低伴随结构的紊乱。E－cad和β－cat的改变在IBS－D患者结肠黏膜屏障破坏及肠上皮细胞间通透性的增加中发挥重要的重用，但其具体机制，有待进一步研究。

内皮细胞间黏附连接调节机制的研究进展

血管内皮在维持血管正常的结构和功能中起着重要作用。当机体因各种因素产生炎症反应时，血管内皮均会有相应的损伤改变，导致血管内皮细胞通透性增加，血管通透性的改变与患者的病死率密切相关。

连接黏附分子-A缺失可增强脓毒症小鼠吞噬功能并提高存活率

脓毒症可导致肠道通透性过高,破坏肠上皮屏障,使肠内微生物侵入宿主血液循环,从而造成机体炎症反应。连接黏附分子-A(junctional adhesion molecule-A,JAM-A)是一种表达在肠上皮细胞的紧密连接单次跨膜蛋白,脓毒症时JAM-A的含量增加,但其在介导肠道通透性和免疫功能中的作用尚未完全清楚。

黏附连接及紧密连接与腹泻型肠易激综合征症状之间的关系

目的探讨黏附连接蛋白E-cadherin、β-catenin及紧密连接蛋白Claudin-2与腹泻型肠易激综合征(IBS-D)患者腹痛及症状持续时间之间的关系。方法根据罗马Ⅲ标准,收集26例IBS-D患者和26例健康对照的回盲部组织标本,记录肠易激综合征(IBS)症状持续时间、腹痛评分及每周排便的次数。20只SD大鼠随机分为两组,模型组和对照组各10只,采用结直肠扩张联合束缚应激的方法构建内脏高敏感大鼠模型,采用腹部收缩反射(AWR)评估大鼠敏感性,记录造模成功后1 h内大鼠排便颗粒数。分别采用蛋白印迹和免疫荧光法检测E-cadherin、β-catenin及Claudin-2的表达和分布,用透射电镜观察细胞间隙改变。结果IBS-D患者肠黏膜E-cadherin、β-catenin蛋白表达明显低于健康对照组(P=0.015和P=0.005),而Claudin-2蛋白表达明显高于健康对照组(P=0.000);免疫荧光观察和透射电镜可见IBS-D患者细胞间紧密连接和黏附连接结构破坏;E-cadherin、β-catenin低表达与IBS-D的腹痛评分呈负相关(分别为r=-0.463,P=0.017和r=-0.407,P=0.039),β-catenin低表达与IBS-D腹痛持续时间呈负相关(r=-0.458,P=0.019)。内脏高敏感大鼠肠黏膜E-cadherin、β-catenin蛋白表达明显低于对照组(P=0.004和P=0.003),而Claudin-2蛋白表达明显高于对照组(P=0.008);E-cadherin、β-catenin低表达与IBS大鼠的内脏高敏感呈负相关(r=-0.639,P=0.047和r=-0.888,P=0.001)。结论IBS-D患者和内脏高敏感大鼠的回盲部黏附连接和紧密连接的微观结构和蛋白表达发生改变,E-cadherin、β-catenin蛋白表达降低,其与IBS-D患者腹痛评分相关,和大鼠内脏高敏感相关,β-catenin更与IBS-D患者腹痛持续时间相关。黏附连接蛋白E-cadherin、β-catenin改变可能在IBS内脏高敏感及肠黏膜屏障障碍中发挥重要作用。

基于核心家系的黏附连接相关蛋白1基因多态性与广西白裤瑶族儿童龋病遗传易感性关联分析

目的 探讨黏附连接相关蛋白1(adherens junctional associated protien 1,AJAP1)基因多态性与广西白裤瑶族儿童龋病遗传易感性之间的关联。方法 选取2018年广西河池市南丹县里湖瑶乡12岁白裤瑶族高龋儿童(30人)及其生物学父母(60人)组成的三人核心家系为研究对象。利用SNPscan技术对AJAP1基因rs3896439、rs4654438位点进行分型,通过FBAT 2.0.4软件进行基于核心家系的传递不平衡检验(transmission disequilibrium test,TDT)及单倍型关联分析。结果 TDT分析结果显示,rs3896439位点单核苷酸多态性与龋病的遗传易感性显著相关,G等位基因从杂合子父母向高龋子代过度传递,为龋病的危险因素(加性模型:Z=2.263,P=0.024;显性模型:Z=2.064,P=0.039)。单倍型关联分析结果显示,rs3896439-rs4654438的单倍型G-C从杂合子父母向高龋子代显著过度传递,与龋病的遗传易感性相关联(加性模型:Z=2.180,P=0.029;显性模型:Z=2.206,P=0.027)。结论 AJAP1基因多态性可能与广西白裤瑶族儿童龋病的遗传易感性相关。

微波辐射对大鼠睾丸闭锁蛋白和连接黏附分子-1表达的影响

目的:探讨微波辐射后大鼠血睾屏障紧密连接闭锁蛋白(occludin)及连接黏附分子-1(JAM-1)表达的改变及意义。方法:80只雄性Wistar大鼠经平均功率密度为0、10、30、100mW/cm2微波辐射5min,于辐射后6h,1、3、7、14d,采用Western印迹和图像分析技术检测闭锁蛋白和JAM-1蛋白表达的动态变化。结果:10、30和100mW/cm2微波辐射后分别在3～7d、6h～7d和6h～14d闭锁蛋白表达明显下调(P<0.05),而JAM-1蛋白分别于辐射后3～7d、1～7d和1～14d表达亦明显下调(P<0.05)。结论:闭锁蛋白及JAM-1蛋白表达减少可能在微波辐射致血睾屏障损伤中发挥重要作用。

连接黏附分子C的研究进展

连接黏附分子C(JAM-C)是近几年来研究逐渐增多的一种免疫球蛋白。JAM-C的分子结构、分布及其与特定配体作用的特点,决定了JAM-C在精子的形成、调节细胞旁通透性、调节白细胞的游走、调节血管的发生和肿瘤的增长、转移等多种生理、病理过程中起到了极其重要的作用,也对相关疾病的诊断及治疗提供了新的研究方向。现就JAM-C的分布表达、病理生理作用、与相应疾病的关系以及其可能作为未来疾病治疗的靶点予以综述。

树鼩连接黏附分子A的基因克隆及初步功能研究

目的获取树鼩连接黏附分子A(junctional adhesion molecule A,JAM-A)的全长编码序列并进行分子特征分析,探讨JAM-A作为呼肠孤病毒受体入侵树鼩原代肺细胞的作用机制。方法提取健康树鼩组织总RNA,采用反转录PCR和cDNA末端快速克隆技术获取JAM-A基因;Unipro UGENE分析编码氨基酸,使用MEGA 6.0软件最大似然法构建系统发育树;实时荧光定量PCR检测JAM-A在树鼩25个组织和血液中的表达分布情况;于树鼩原代肺上皮细胞上进行受体的特异性抗体阻断处理,然后采用免疫荧光法观察病毒抗原对呼肠孤病毒感染的影响。结果获取了JAM-A基因cDNA全长序列,2962 bp;系统发育树进化分析显示JAM-A基因与人的亲缘关系较啮齿类更近;JAM-A分子广泛表达于树鼩的外周组织,而在呼吸道和消化道表达水平更高。特异性抗体作用于细胞显著降低病毒抗原的免疫荧光积分吸光度值(P<0.0001)。结论首次克隆并分析了JAM-A的基因序列,验证JAM-A分子是呼肠孤病毒入侵树鼩的主要受体,提示树鼩可作为一种新的呼肠孤病毒动物模型。

系统性硬化患者内皮祖细胞连接黏附分子-A表达

目的研究系统性硬化(SSc)患者外周血内皮祖细胞连接黏附分子-A(JAM-A)表达情况。方法收集13例SSc患者及13例对照组新鲜EDTA抗凝血2ml,采用流式细胞仪方法检测,用PerCP-CY5.5、PE、Alexa Fluor 647和FITC标记CD34、CD133、CD309和JAM-A。内皮祖细胞定义为CD34、CD133、CD309(VEGFR-2,KDR)均阳性的细胞。结果内皮祖细胞表达JAM-A,SSc患者内皮祖细胞中JAM-A表达较正常对照减少(分别为0.0775±0.0385和0.1567±0.1223,P<0.05),SSc患者内皮祖细胞数量亦较对照组少(分别为0.0817±0.0403和0.1746±0.1419,P<0.05)。结论 SSc患者内皮祖细胞中JAM-A的减少是由于患者内皮祖细胞数目减少所致。SSc患者存在血管生成障碍,JAM-A表达异常,并且在SSc发病机制中起一定作用。

黏附连接蛋白在子痫前期患者胎盘血管内皮细胞中的表达及意义

目的检测子痫前期患者胎盘血管内皮细胞中黏附连接蛋白[血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和β-连环蛋白(β-catenin)]的表达水平,为临床诊断和治疗提供参考。方法收集2017年3月至2018年10月在徐州医科大学附属淮海医院诊治的妊娠期高血压疾病患者90例为研究对象,其中妊娠期高血压组30例,轻度子痫前期组30例,重度子痫前期组30例,选择正常妊娠期孕妇(30例)作为对照组。采用免疫荧光法检测4组胎盘组织中胎盘绒毛血管胎盘内绒毛血管密度及直径和VE-cadherin的位置变化,采用Western blot法检测4组胎盘组织中VE-cadherin和β-catenin的蛋白表达变化,RT-PCR法检测其mRNAs表达水平。结果与对照组相比,妊娠期高血压组绒毛血管的密度和直径均有所变化,但差异并无统计学意义(P>0.05);四组中,重度子痫前期组绒毛血管密度最低,绒毛血管直径最长,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫荧光结果示,依对照组→妊娠期高血压组→轻度子痫前期组→重度子痫前期组之序,VE-cadherin蛋白从细胞膜向细胞内转移;Western blot和qRT-PCR结果示,依对照组→妊娠期高血压组→轻度子痫前期组→重度子痫前期组之序,VE-cadherin及β-catenin蛋白和mRNA表达逐步降低,其降低幅度呈重度子痫前期组>轻度子痫前期组>妊娠期高血压组和对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论子痫前期胎盘内绒毛血管密度降低,绒毛血管直径增长,这可能与VE-cadherin的位置内移以及VE-cadherin和β-catenin表达水平的降低有关。

头颈部鳞状上皮细胞癌组织中连接黏附分子A的表达及意义

目的探讨连接黏附分子A(JAM-A)在头颈部鳞状上皮细胞癌组织中的表达及其意义。方法选取22例原发于头颈部的鳞状上皮细胞癌组织及20例头颈部健康的上皮组织。采用蛋白质印迹方法检测各样本组织中JAM-A蛋白的表达。结果对照组及鳞状上皮细胞癌组织中均有一定水平JAM-A的表达。但鳞状上皮细胞癌组织中JAM-A表达显著高于对照组。结论 JAM-A在头颈部鳞状上皮细胞癌组织中高度表达。JAM-A过度表达可能参与了头颈部鳞状上皮细胞癌组织的细胞增殖及转移。

连接黏附分子-1与动脉粥样硬化

连接黏附分子-1是一细胞黏附分子,免疫球蛋白超家族成员,可作为血小板受体参与血小板的活化;作为配基与淋巴细胞功能性抗原结合,促进白细胞的迁移;并参与碱性成纤维细胞生长因子介导的信号转导途径,增强内皮细胞黏附迁移,促进血管新生。连接黏附分子-1参与动脉粥样硬化发生、发展及转归中与内皮细胞有关的多个作用机制,对探讨动脉粥样硬化的防治具有一定的作用。

病原微生物感染破坏上皮细胞黏附连接的研究进展

上皮细胞具有高度规则的结构并为下层组织提供保护层,以防病原微生物侵入。上皮细胞排列整齐的结构基础是细胞间连接,一般是细胞间黏附分子形成的有规律连接复合物,如黏附连接(adherens junctions,AJs)。然而,为了破坏或穿越上皮屏障引起宿主感染,病原体通常采取各种策略靶向作用和调控黏附连接,如细菌通过靶向E-cadherin(E-钙黏蛋白)、β-catenin(β-连环蛋白)或细胞内信号通路破坏AJs,而病毒通过靶向E-cadherin或与nectin(黏连蛋白)相互作用侵入细胞。对病原微生物与黏附连接相互作用的机制研究,不仅能在细胞水平解释上皮屏障的基本生理特性,而且能阐明病原体侵入宿主的机制,为防治病原体感染提供新的思路和理论基础。

连接黏附分子-1和咬合蛋白在人角膜上皮中的表达

目的检测咬合蛋白(Occludin)和连接黏附分子-1(junction adhesion molecule-1,JAM-1)在正常人角膜上皮各层中的表达。方法培养人角膜上皮细胞提取细胞总RNA,以逆转录后获得的cDNA为模板,PCR扩增目的基因JAM-1及Occludin。流式细胞仪检测JAM-1蛋白表达。双重免疫荧光观察JAM-1与Occludin在正常人角膜上皮组织的原位表达。结果RT-PCR在培养人角膜上皮细胞中检测到JAM-1与Occludin扩增片段;流式细胞仪检测到JAM-1蛋白表达;双重免疫荧光结果显示Occludin染色主要位于表层上皮层细胞之间;而JAM-1荧光染色不仅见于上皮表层,在整个上皮层细胞之间均可见其荧光反应。结论Occludin主要位于正常人角膜上皮表层细胞之间,JAM-1在正常人角膜上皮的全层中均有表达。

人参皂苷Rh2对小鼠移植瘤生长及对细胞间连接黏附分子表达的影响

目的:观察人参皂苷Rh2对小鼠移植瘤生长及其对细胞间连接黏附分子(JAM)在癌组织表达的影响,探讨其抗肿瘤作用。方法:昆明种小鼠40只,前肢皮下接种S180小鼠癌性腹水0.2 mL,成瘤后随机分为2组,实验组给予人参皂苷Rh2(20 mg.kg-1)灌服,2 mL/只;对照组给予等量生理盐水,6周后取材。用免疫组化法观察JAM-1,JAM-2在癌细胞、淋巴管及血管的表达。结果:对照组JAM-1阳性表达的肿瘤细胞吸光度(A)549.90,实验组340.55,P<0.05;JAM-2阳性表达弱。对照组JAM-1和JAM-2阳性表达的血管数密度分别为2.33和1.34,实验组分别为1.09和0.9。对照组JAM-1和JAM-2阳性表达的淋巴管数密度分别为2.23和1.88,实验组分别为0.99和0.79;两组间的差异均为P<0.05。结论:人参皂苷Rh2通过下调JAM在肿瘤细胞的表达,抑制肿瘤组织血管及淋巴管的生成,进而抑制肿瘤生长。

人参皂甙Rh-2对细胞间连接黏附分子在小鼠移植瘤淋巴管表达的影响

目的观察细胞间黏附分子(JAM)在小鼠移植瘤淋巴管内皮细胞的表达及人参皂甙Rh-2的影响,探讨JAM在癌淋巴管转移中的意义。方法于小鼠前肢皮下接种S180小鼠癌性腹水,成瘤后给予人参皂甙Rh-2灌服,6周后取材。用免疫组化法观察LYVE-1、JAM-1、JAM-2在淋巴管内皮细胞的表达。结果在对照组肿块的周边部可见LYVE-1阳性表达的淋巴管,JAM-1、JAM-2在淋巴管有阳性表达,用药组表达减少。结论JAM-1、JAM-2在淋巴管内皮细胞的表达可能与癌淋巴管转移有关。