基于脂质与动脉粥样硬化通路探讨侯氏黑散治疗脑缺血再灌注损伤的机制研究

目的利用网络药理学和动物实验验证分析《金匮要略》侯氏黑散治疗脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)的成分、靶点及信号通路,并通过脂质与动脉粥样硬化通路研究其作用机制。方法在TCMIP、GeneCards和OMIM疾病数据库获取侯氏黑散与CIRI的交集靶点,使用STRING网站构建交集靶点的蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,使用Cytoscape软件筛选核心靶点和成分并构建“成分-靶点”网络。使用R语言进行GO和KEGG富集分析,使用AutoDock Vina验证成分与靶点的对接能。动物实验中将60只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组和侯氏黑散低、中、高剂量组。用线栓法制备大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)大鼠模型,造模7 d后通过改良神经功能评分(modifiedneurological severity score,mNSS)评估神经功能,TTC染色检测脑梗死体积,HE染色观察脑组织病理变化,全自动生化分析仪检测血清低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(how density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglycerides,TG)含量,ELISA检测血清白介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,免疫组织化学和RT-qPCR检测脑组织中HSP90AA1、NF-κB1、SRC的蛋白及mRNA表达水平。结果从侯氏黑散中筛选得到508种有效成分及549个药物靶标,1592个CIRI疾病靶点,交集靶点共153个,核心靶点为HSP90AA1、SRC、NF-κB1,与棕榈酸、三磷酸腺苷、穿贝海绵甾醇、腺苷等核心成分均具有较强的结合力。GO富集分析的生物过程主要涉及对外源性刺激的反应、位置维护、炎症反应的调节等,KEGG通路分析主要富集在脂质和动脉粥样硬化、cAMP信号通路、花生四烯酸代谢等。与模型组相比,侯氏黑散各剂量组mNSS评分、脑梗死率、血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量、脑组织HSP90AA1蛋白表达水平和HSP90AA1、NF-κB1和SRC mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01);侯氏黑散高剂量组LDL-C、TC、TG水平降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平增高(P<0.05);侯氏黑散中剂量组TG水平降低(P<0.01);西药组和侯氏黑散中、高剂量组NF-κB1和SRC蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。与侯氏黑散低剂量组相比,侯氏黑散中、高剂量组mNSS评分、脑梗死率,血清TG水平,血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量,脑组织中NF-κB1 mRNA表达水平均显著降低(P<0.01);侯氏黑散高剂量组脑组织HSP90AA1、NF-κB1和SRC蛋白表达水平和HSP90AA1、NF-κB1 mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。与侯氏黑散中剂量组相比,侯氏黑散高剂量组mNSS评分、脑梗死率,血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量,脑组织HSP90AA1蛋白表达水平和NF-κB1 mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论侯氏黑散以多成分、多靶点、多通路治疗CIRI,其中抑制核心靶点HSP90AA1、NF-κB1、SRC的mRNA和蛋白表达,调控脂质与动脉粥样硬化通路是侯氏黑散治疗CIRI的重要机制。

侯氏黑散方证中“大风”内涵的考证

本文指出了侯氏黑散方证中“大风”的概念解释存在以偏概全的问题,限制了该方的临床运用。提出大风当指风病体系,即多种风病的集合,并结合三方面理由论证本观点的合理性。其一,《金匮要略》所言中风包括狭义中风以外的多种风病;其二,侯氏黑散的适应证与《诸病源候论》所载“诸风病”高度重合;其三,风病存在对应的方药体系,侯氏黑散的方药绝大多数是该体系中的风药。提出大风具有以下三方面特点:大风本身诊断困难,需借助风病体系下子类疾病的诊断加以确定;大风多发于表部、阳部;大风包含了大量神经系统疾病,以上大风的特点对本病的诊断具有重要提示作用。提出诊断大风之后仍需在辨证论治的规则下使用侯氏黑散,保证方证与病机的相应,以提高处方的准确性。

侯氏黑散加减联合正中神经电刺激治疗缺血性脑卒中后意识障碍临床研究

目的:观察侯氏黑散加减联合正中神经电刺激治疗缺血性脑卒中后意识障碍的临床疗效。方法:采用随机数字表法将94例缺血性脑卒中后意识障碍患者分为对照组、观察组,每组47例。对照组给予正中神经电刺激治疗,观察组在对照组基础上给予侯氏黑散加减治疗。比较2组治疗前后中医证候评分、格拉斯哥昏迷评分、巴氏指数评分、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及血清神经因子(5-羟色胺、脑源性神经营养因子、胶质纤维酸性蛋白)水平,评估2组临床疗效及卒中后主要心血管不良事件(MACE)发生情况。结果:治疗过程中,2组均剔除1例,对照组、观察组各完成研究46例。治疗后,观察组总有效率93.48%,高于对照组78.26%(P<0.05)。治疗后,2组格拉斯哥昏迷评分、巴氏指数评分及血清5-羟色胺、脑源性神经营养因子水平均较治疗前升高(P<0.05),中医证候评分、NIHSS评分、血清胶质纤维酸性蛋白水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组格拉斯哥昏迷评分、巴氏指数评分及血清5-羟色胺、脑源性神经营养因子水平高于对照组(P<0.05),中医证候评分、NIHSS评分、血清胶质纤维酸性蛋白水平低于对照组(P<0.05)。观察组卒中后MACE发生率低于对照组(P<0.05)。结论:侯氏黑散加减联合正中神经电刺激治疗缺血性脑卒中后意识障碍临床疗效显著,能够调节患者神经因子水平,改善神经功能,降低卒中后MACE发生率。

UPLC-PDA法测定十黑散中芦丁、栀子苷和盐酸小檗碱的含量

本实验旨在建立定量检测十黑散中芦丁、栀子苷和盐酸小檗碱含量的UPLC-PDA方法。样品经提取稀释后,采用waters HSS T_(3)色谱柱为分离柱,以PDA为检测器,通过对比色谱图保留时间和光谱图的峰形以及峰面积,进行定性定量。结果显示:栀子苷、芦丁、盐酸小檗碱峰面积与浓度呈良好的线性关系,加样平均回收率分别为98.22%、97.97%、97.88%,相对标准偏差(RSD)均小于1.0%,检出限分别为2、2 ng和1 ng,满足检测需求。本方法快速、灵敏、重现性好,适用于十黑散中3种化合物的检测。

侯氏黑散治疗缺血性中风的研究进展

在祖国医学的观点中,缺血性脑血管疾病被视为“中风”疾病是其中一个重要组成部分。最近几年的研究报告指出,经方侯氏黑散能够通过其降低血压、减少血脂和优化微循环的核心机制,为缺血性脑血管疾病的治疗带来显著的效果。同时还证实了该方药有良好的降低血液粘度的作用。这个药方源于《金匮要略•中风历节病篇》,并被医圣张仲景视为治疗中风的首选药方。该方以柴胡疏肝散合当归四逆汤为主药组方而成,并随症加减变化而有不同功用。从仲景的描述中,我们可以看出中风这一疾病已经形成了“内虚邪中”与“风药治风”的学术观点。因此,我们认为该方应成为防治缺血性脑血管病的重要基础方之一。本研究旨在深入探索侯氏黑散在治疗缺血性脑血管疾病中的作用机制,期望为后续的深度研究和临床实践提供有益的指导和参照。

侯氏黑散加减治疗杂病验案4则

吴雄志教授提出“直取其病,随证加减”思想,运用侯氏黑散加减治疗杂病收效显著。吴雄志教授认为病位在头面部的少阳病病机属于少阳病变,热邪炎上,治疗时可以直取其病,用侯氏黑散随证加减治疗。菊花、黄芩、牡蛎是侯氏黑散的核心药物。该文介绍运用侯氏黑散加减治疗神经性耳鸣、带状疱疹、分泌性中耳炎、玻璃体积血验案4则。

经方侯氏黑散对脑缺血损伤大鼠神经可塑性相关蛋白的影响

目的观察经方侯氏黑散对大脑中动脉闭塞大鼠模型缺血脑组织神经生长相关蛋白43(growth-associated protein-43,GAP-43)、微管相关蛋白2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)、突触体素(synatophysin,SYN)表达的影响,探讨其促进脑缺血后大鼠神经功能康复的机制。方法用线栓法阻断大脑中动脉,建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,用免疫组化与图像分析相结合的方法观察缺血脑组织的轴突、树突、胞体以及突触损伤及修复情况。结果模型组大鼠MAP-2免疫阳性树突稀疏,SYN免疫反应物明显减低,仅能看到散在点状物,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。侯氏黑散组大鼠海马CA1区、CA3区GAP-43表达面积和表达强度均明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。侯氏黑散组大鼠MAP-2和SYN积分光密度值均明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论经方侯氏黑散能够上调GAP-43、MAP-2以及SYN的表达,可有效诱导脑损伤修复过程中神经元结构蛋白的合成,促进神经再生和神经功能的康复。

侯氏黑散对脑缺血大鼠神经导向因子及Rho GTP酶的影响

目的探讨侯氏黑散对脑缺血大鼠神经导向因子Netrin-1/DCC和分子开关Rac1/Cdc42/RhoA表达的影响。方法采取线栓法制备永久性大脑中动脉栓塞(permanent middle cerebral artery occlusion,p MACO)模型。大鼠采用数字表法随机分为假手术组、模型组、侯氏黑散小剂量组、侯氏黑散中剂量组、金纳多组。运用Western blotting法和RT-PCR法检测术后7d大鼠缺血侧皮质Netrin-1、DCC、Rac1、Cdc42、RhoA蛋白和基因的表达。结果与模型组相比,侯氏黑散中剂量组、金纳多组大鼠Netrin-1蛋白的表达明显升高(P<0.01),侯氏黑散中剂量组大鼠Netrin-1基因的表达升高(P<0.05);侯氏黑散小剂量组、侯氏黑散中剂量组、金纳多组大鼠DCC、Rac1、Cdc42蛋白和基因的表达明显升高(P<0.05);侯氏黑散小剂量组、侯氏黑散中剂量组、金纳多组大鼠RhoA蛋白和基因的表达则明显下降(P<0.01)。结论侯氏黑散通过对脑缺血大鼠神经导向因子Netrin-1/DCC和分子开关Rac1/Cdc42/RhoA的调节促进脑缺血后神经功能的修复。

侯氏黑散化学成分对脂多糖诱导BV2细胞活化中炎性反应因子分泌平衡的影响

目的探究侯氏黑散方中绿原酸(chlorogenic acid,CGA)、木犀草苷(cynaroside,CYN)、木犀草素(luteolin,LUT)、人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,GS-Rg1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小胶质细胞炎性反应因子表达的影响。方法实验分对照组、模型组、CGA、CYN、LUT、GS-Rg1处理组。利用LPS诱导BV2细胞过度活化,建立脑缺血后小胶质细胞炎性反应损伤体外模型;CCK-8法检测各组细胞活性;Griess法检测各组细胞上清中一氧化氮(nitric oxide,NO)的量;酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-10(interleukin-10,IL^(-1)0)、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)的量;蛋白印迹法(Western blotting,WB)检测各组细胞p-p65、p-IκBα蛋白表达。结果与模型组相比,不影响细胞生存活性的情况下,CGA、CYN、LUT、GS-Rg1可显著降低细胞上清中促炎因子NO、TNF-α、IL-6浓度;GS-Rg1可显著升高抑炎因子IL^(-1)0、TGF-β_1浓度;CGA、CYN、LUT、GS-Rg1可显著降低细胞中p-p65、p-IκBα蛋白浓度。结论 CGA、CYN、LUT、GS-Rg1分别从促炎、抑炎两方面调节脑缺血后炎性反应相关因子分泌的平衡,其机制与核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路活化有关。

侯氏黑散对缺血性脑中风大鼠模型的保护作用

侯氏黑散是张仲景治疗中风的第一方。为了探求侯氏黑散治疗中风的机制,从存活率、神经功能评分、血清乳酸脱氢酶(LDH)三个方面观察其对大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO)的影响。结果:侯氏黑散可以明显提高MCAO大鼠的存活率,降低MCAO大鼠的神经功能评分及其血清LDH水平。

浅析侯氏黑散方后嘱

张仲景承《内经》"邪害空窍"的观点,根据风邪为病的具体情况,采用初服侯氏黑散二十日,用温酒调服,使药物迅速发挥填充皮毛肌腠的空窍;而后冷食之六十日乃图缓治,意在药积在腹中不下填补人体最大空窍。侯氏黑散篇对风邪为病的病因病机进行阐述,可知风邪为病乃因正气亏虚,风邪外致。方后嘱主要包括药物炮制、煎服方法、常用剂型、药后反应及调护等,正确理解方后解对于使用本方有极大的关系。

《金匮要略》侯氏黑散之我见

侯氏黑散载于《金匮要略.中风历节病脉证并治篇》中,因其文法与仲景惯用体例有别,加之组方与常规经方有异,况且方名冠以侯氏二字,故而后世注家对该方认识颇有分歧,褒贬各异,就是否为仲景方等问题争论不休。从注家认识来看,隋唐医家多认为该方是仲景之方;从病机分析来看,该方土虚风动之病机,切合医理;从药证分析来看,方药和病证丝丝入扣;从临证应用来看,该方用之得当疗效卓著,结合四方面的分析认为侯氏黑散应当属于仲景之方。

侯氏黑散对MCAO大鼠大脑皮质TGF-β_1 bFGF蛋白表达的影响

目的:观察侯氏黑散对MCAO(大脑中动脉闭塞模型)大鼠大脑皮质TGF-β1、bFGF蛋白表达的影响。方法:采用线栓法复制大鼠大脑中动脉闭塞模型,利用免疫组化方法观察大鼠大脑中动脉闭塞模型皮质TGF-β1、bFGF蛋白表达的变化,通过给大鼠连续14天灌胃侯氏黑散13g.kg-1.d-1,观察其对TGF-β1、bFGF蛋白表达的影响。结果:侯氏黑散以促进TGF-β1阳性蛋白的表达,与模型组比较具有显著意义;侯氏黑散可以促进bFGF蛋白的表达,但与模型组相比,没有统计学的意义。结论:侯氏黑散治疗中风的机理可能是通过促进TGF-β1蛋白的表达,保护和修复缺血性脑损伤。

侯氏黑散方加减对短暂性脑缺血发作患者血管内皮功能、血清MMP-9、Lp-PLA2水平的影响研究

目的:观察候氏黑散方加减对短暂性脑缺血发作(TIA)患者血管内皮功能、血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平的影响。方法:采用随机数表法将本院于2018年7月~2019年12月收治的104例TIA患者分为对照组与治疗组,各52例。对照组行西医常规治疗,治疗组在对照组的基础上予以候氏黑散方加减治疗,两组均治疗4周。对比两组治疗前后中医主症积分情况,并对血管内皮功能、血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平以及凝血功能等指标进行检测,并对疗效进行评价。结果:两组的临床有效率分别为92.31%和80.77%,治疗组高于对照组(P<0.05)。治疗后治疗组的阵发性偏身麻木、发作性眩晕、短暂性偏身瘫软、一过性视物昏瞀等中医主症积分均低于对照组(P<0.05)。两组治疗后的一氧化氮(NO)水平较治疗前提高,内皮素-1(ET-1)、人血栓素B;(TXB;)和血管性血友病因子(vFW)水平较治疗前下降(P<0.05),且治疗组变化幅度大于对照组(P<0.05)。治疗组治疗后的MMP-9、血管紧张素-(Ang-Ⅱ)以及Lp-PLA2水平均低于对照组(P<0.05)。治疗后,治疗组的红细胞积压(HCT)、红细胞沉降率(ESR)及血小板聚集率(PAR)均低于对照组,凝血酶原时间(PT)高于对照组(P<0.05)。结论:候氏黑散方加减治疗短暂性脑缺血发作,可明显缓解患者主要症状,下调MMP-9、Lp-PLA2水平,改善血管内皮、凝血功能。

侯氏黑散及其拆方对MCAO大鼠神经病理学的影响

目的:研究侯氏黑散及其拆方对大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠的保护作用,并探讨侯氏黑散组方配伍的意义。方法:线栓法阻断大脑中动脉建立大鼠局灶性脑缺血损伤模型,以Bederson10分制评分标准对实验大鼠作行为评分,采用HE染色对脑缺血损伤部位进行整体观察,计数海马CA1区和CA3区完整的锥体细胞;尼氏体染色结合图像分析技术检测MCAO大鼠海马锥体细胞尼氏体的变化。结果:侯氏黑散全方及其拆方君加臣药、君加臣加佐药可明显改善MCAO大鼠神经功能缺损,减轻海马神经元变性程度,增加海马锥体细胞数;侯氏黑散全方组海马锥体细胞尼氏体的脱失较模型组减少,积分光密度值显著增高。结论:侯氏黑散具有明显保护海马神经细胞的作用,全方组的疗效明显优于拆方组,符合方剂学整体取性原理。

侯氏黑散对ICVD兔血流变及脂质过氧化物影响的实验研究

目的：探讨侯氏黑散对兔脑缺血．再灌注模型的血液流变、血小板聚集功能、脂质过氧化物的影响。方法：体重2-3kg的纯种大耳白兔90只，随机分为假手术（Ⅰ）组、缺血-再灌注即模型（Ⅱ）组、造模后给药（Ⅲ）组，每组30只，第Ⅲ组灌服侯氏黑散悬浊液，其余两组灌服生理盐水，连续给药1周后处死，进行指标测定。结果：第Ⅲ组的指标均好于前两组。结论：侯氏黑散可使血液粘滞状态明显改善，能降低血小板聚集率，并减少血栓形成，抑制组织匀浆液中的脂质过氧化物反应，降低脂质过氧化物含量。

侯氏黑散治疗2型糖尿病合并脂代谢紊乱的疗效观察

将106例符合诊断标准的患者随机分为侯氏黑散治疗组(53例)和血脂康胶囊对照组(53例),两组均予糖尿病基础降糖治疗,治疗8周后观察血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、Hb A1c、FPG、2h PG及BMI。结果:与治疗前比较,治疗组FBG、P2h BG、Hb A1c、TC、TG、LDL-C等均下降,HDL-C均升高,差异有显著性(P<0.05 or P<0.01);治疗组改善情况优于对照组(P<0.05)。结论:侯氏黑散能有效改善T2DM的糖、脂代谢紊乱。

侯氏黑散治疗痰瘀阻络型缺血性中风恢复期的临床观察

目的:观察侯氏黑散治疗痰瘀阻络型缺血性中风恢复期的临床疗效。方法:入选痰瘀阻络型缺血性脑中风82例随机分成2组,对照组常规西药治疗,血塞通静滴,脑复康口服;治疗组在上药基础上加用侯氏黑散,2个疗程后,分别观察两组神经功能改善程度、中医证候积分及血脂、血流变学指标的改变情况。结果:治疗组在总有效率、降低血脂水平、改善血流变学等方面均优于对照组(P<0.05)。结论:在西医常规治疗的基础上加用侯氏黑散针对痰瘀阻络型缺血性中风的疗效优于单纯的西医常规治疗。

升降散合候氏黑散治疗脑梗塞后假性球麻痹40例

目的:观察加减升降散合候氏黑散对脑梗塞后假性球麻痹患者的临床疗效。方法:对40例选择病例按标准服用加减升降散合候氏黑散汤(蝉蜕、僵蚕、姜黄、大黄、桔梗、菊花、防风)。结果:总有效率97.5%。提示:两方合用中药汤剂治疗脑梗塞后假性球麻痹方便有效。