pH值渐变条件下双酶协同水解猪皮制备胶原蛋白寡肽的研究

本文研究了在没有外加碱的pH渐变条件下,用枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)和黑曲霉酸性蛋白酶(3000U/g)双酶协同水解从猪皮胶原蛋白制备寡肽水解物的可行性。考察了单酶单因素水解条件、双酶加入方式对猪皮降解率和蛋白质水解度的影响,并在此基础上通过正交试验进一步优化出双酶一次性投料方案下水解猪皮的最佳条件:水解温度为60℃,碱性蛋白酶加入量为25μl/g蛋白,酸性蛋白酶加入量为4%(g/g),底物浓度为60g/L,水解时间为12h。在上述最佳条件下,新鲜猪皮的降解率可达94.7%,蛋白质的水解度可达17.7%,水解物中分子量小于1000(10个氨基酸以下的肽)的寡肽选择性达到了42.5%。结果表明,在不外加碱的条件下,采用双酶协同水解方法能够显著提高猪皮降解率,特别是蛋白质水解度。

大豆蛋白水解液脱苦的研究

大豆蛋白酶解常常会产生苦味,蛋白质水解物苦味肽的苦味是长期困扰其应用的问题。本文研究了酶法与微生物法对大豆蛋白水解液脱苦的效果。结果表明:采用端肽酶黑曲霉酸性蛋白酶(3000u/g)与内切酶枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)协同作用水解大豆蛋白可有效降低水解液苦味,并且由酿酒酵母对水解液进一步处理后,大豆蛋白水解液的苦味降至更低。

β-伴大豆球蛋白酶解物的抗消化性及免疫活性变化的研究

试验旨在研究经过胃蛋白酶和黑曲霉酸性蛋白酶处理之后β-伴大豆球蛋白的降解和免疫活性变化情况,从而为开发低致敏性大豆产品提供理论基础。将胃蛋白酶或黑曲霉酸性蛋白酶与β-伴大豆球蛋白按照酶与底物比(E/S)为1∶1的比例混合,然后水浴(37℃,100 r/min)消化,反应时间分别为0、0.5、1、15、30、60 min和120 min。SDS-PAGE结果显示在酶与底物1∶1条件下,15 min的胃蛋白酶与黑曲霉酸性蛋白酶处理可以将а′和а2个亚基完全消化,而β亚基表现出很强的抗消化性,即使胃蛋白酶与黑曲霉酸性蛋白酶联合酶解和连续酶解也不能将β亚基完全消化。ELISA分析结果表明:经过黑曲霉酸性蛋白酶和胃蛋白酶连续酶解后,具有免疫活性的β-伴大豆球蛋白最多约有89.5%被去除。综上可知,黑曲霉酸性蛋白酶和胃蛋白酶处理后β-伴大豆球蛋白的β亚基依然表现出较强的完整性和免疫活性。

内切酶与端肽酶协同水解大豆蛋白的研究

大豆蛋白酶解常常会产生苦味,端肽酶可有效水解苦味肽,但它们对于完整的蛋白大分子几乎没有作用,因此必须与内切酶联合使用或在其后使用。研究了内切酶枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)与端肽酶黑曲霉酸性蛋白酶(3000U/g)协同水解大豆蛋白制备寡肽的可行性,结果表明:采用端肽酶黑曲霉酸性蛋白酶与内切酶枯草杆菌碱性蛋白酶协同作用水解大豆蛋白,不但水解液的苦味值显著下降,而且大豆蛋白降解率和水解液水解度显著提高。