萝卜黑腐病的病原鉴定及室内药剂筛选

在天津萝卜种植区发现一种严重危害萝卜的腐烂病,从发病组织中分离到5株细菌菌株,经过形态观察、致病性测定和16S rDNA序列分析研究病原种类,并采用抑菌圈法评价病原对20种常见杀菌剂的室内抑菌效果,以期为该病害的诊断和防治提供参考依据。结果表明,病原为野油菜黄单胞杆菌野油菜黑腐病致病变种(Xanthomonas campestris pv. campestris);不同杀菌剂间抑菌效果存在差异,供试的20种杀菌剂中13种杀菌剂对该病原有抑制作用,其中仅0.3%四霉素水剂和80%乙蒜素乳油对病原的抑制效果优于98%硫酸链霉素原药,27.12%碱式硫酸铜悬浮剂等7种杀菌剂对病原无抑制效果。

15种国产药物牙膏对产黑色素类杆菌的作用评价

产黑色素类杆菌是人类牙周病的重要致病菌。现对市售的15种药物牙膏进行随机抽样检测,评价其对产黑色素类杆菌的杀灭作用,结果表明:中药牙膏抑菌能力普遍不及西药牙膏。部分药物牙膏对牙周病致病菌具有较强的非选择性杀灭作用,但长期滥用药物牙膏有可能引起口腔内菌群失调,引起新的疾病。

家蚕黑胸败血芽孢杆菌基因组测序及结构分析和功能注释

黑胸败血芽孢杆菌(Bacillus bombyseptieus)是家蚕细菌性败血病的常见病原之一。在获得黑胸败血芽孢杆菌基因组完成图的基础上,对该菌株的基因组测序、基因组序列结构特征以及基因功能注释等信息进行分析。该菌株的基因组测序数据量达到2.1 Gb,基因组覆盖度超过360倍,基因组组装大小为5.87 Mb,包含2个复制子——1个核基因组(5 295.783 kb)和1个质粒基因组(577.809 kb);基因组重复序列比率为1.179 2%,包含136个非编码RNA和5 298个编码基因。测序得到的基因组数据通过KEGG和COG数据库进行功能注释,主要与物质转运、氨基酸代谢、碳水化合物代谢等相关。基因组共线性分析表明黑胸败血芽孢杆菌与芽孢杆菌属细菌的亲缘关系较近。该研究结果将为鉴定黑胸败血芽孢杆菌的毒力因子以及研究其致病机制和与宿主的相互作用提供重要数据支撑。

透明颤菌血红蛋白基因在生黑葡萄糖酸杆菌中的克隆与表达

目的在生黑葡萄糖酸杆菌中克隆并表达透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla Hemoglobin gene,vgb)。方法构建重组质粒p UC19-vgb并电转化生黑葡萄糖酸杆菌。采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfonate,SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳和一氧化碳(carbon monoxide,CO)-示差光谱进行血红蛋白表达和生物活性测定。结果 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示有大量与目的蛋白大小相当(约15 ku)的蛋白表达。CO-示差光谱在420 nm处有一吸收峰,显示重组质粒p UC19-vgb成功转化入生黑葡萄糖酸杆菌,并表达具有生物活性的透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla Hemoglobin,VHb)。结论成功构建vgb重组质粒,并实现在生黑葡萄糖酸杆菌中表达VHb。

生黑醋酸杆菌的太空诱变选育

目的:通过太空育种的方法选育获得高活性的生黑醋酸杆菌,实现维生素C的高效发酵。方法:采用太空育种的方法,对VC一步发酵菌生黑醋酸杆菌进行神州七号搭载诱变。结果:经过多轮试管初筛、摇瓶复筛,获得1株高效菌,编号为G454。23%醇浓摇瓶发酵,发酵周期缩短约2h;在适度提高通风下,可完成高醇浓度(33%)发酵,发酵周期约24h。该菌经发酵条件优化,连续5批常规生产。结果:新菌株G454的发酵稳定性好,周期均在20h以内,平均周期18.4h;与对照相比,发酵周期缩短2h,山梨糖产率12.34mg/ml/h,较对照提高7.68%。结论:筛选所得菌株454可缩短发酵周期10%。,提高山梨糖产率7.68%。

生黑葡萄糖酸杆菌转化高浓度山梨醇的条件优化

目前，国内维生素C主要采用二步发酵法生产,其中第一步为生黑葡萄酸杆菌（Gluconobacter melanogenus）将D-山梨醇转化为L-山梨糖。考察了该菌株在提高培养基中山梨醇浓度时的发酵特性和发酵条件。实验室摇瓶实验结果显示，通风量、发酵前期及后期pH值控制、接种种液类型都影响高浓度山梨醇摇瓶发酵的转化率。以35％山梨醇浓度发酵液做种子液明显优于生产上采用的三级种子液（12％-17％山梨醇浓度），培养基前期pH值5．0—6．0，后期pH值4．2～3．9，装液量180mL，发酵周期在30h之内，山梨醇转化率在98％以上。培养基山梨醇浓度由23％提高到35％，发酵周期延长8h。上述实验结果对指导生产工艺优化具有重要意义。

微酸性电解水对家蚕黑胸败血芽孢杆菌的杀灭效果及机制研究

微酸性电解水作为一种安全、高效、广谱的新型消毒剂,具有制备简单、成本低、使用后无残留、对人体无毒无害等优点。研究微酸性电解水对家蚕黑胸败血芽孢杆菌的杀灭效果及其杀菌机制,为其在蚕桑生产中的应用奠定基础。体外抑菌试验结果表明,有效氯质量浓度为40 mg/L、pH 5.5、氧化还原电位(ORP)为1100 mV的微酸性电解水处理5 min即可全部杀灭家蚕黑胸败血芽孢杆菌。生物学试验结果表明,该电解水对家蚕黑胸败血芽孢杆菌处理5 min后,家蚕黑胸败血芽孢杆菌的灭活率达到90%;处理15 min时,灭活率为100%。经微酸性电解水处理后,家蚕黑胸败血芽孢杆菌的外部形态发生改变,菌体膨胀、逐渐伸长,之后出现孔洞,最后菌体破裂、死亡;胞外电导率、可溶性蛋白含量和可溶性糖含量逐渐增加;菌体DNA发生降解。试验结果表明微酸性电解水主要通过破坏家蚕黑胸败血芽孢杆菌细胞外部形态,改变细胞膜通透性,导致细胞内容物外渗,DNA结构受到破坏,达到杀菌目的。

肉鸭疫里默氏杆菌病的诊治

阐述了肉鸭疫里氏杆菌病的临床症状、剖检变化与实验室检查方法,提出了防治措施。

一株内蒙古自治区武川县马铃薯黑胫病菌的分离鉴定及全基因组分析

为明确内蒙古自治区武川县马铃薯黑胫病的病原种类及其致病机制,从当地表现黑胫病的马铃薯植株上分离病原菌,利用薯块接种法和盆栽接种法验证其致病性,利用形态学特征结合分子生物学技术对致病菌株进行鉴定,采用Pacbio SequelⅡ三代测序技术测定致病菌株的全基因组序列并对其致病机制进行分析。结果表示:分离获得1株菌株TDHJ7,该菌株能引起马铃薯典型黑胫病症状,经形态学特征、16S rRNA序列分析以及全基因组比较最终将其鉴定为黑腐果胶杆菌Pectobacterium atrosepticum,该菌株的全基因组大小为4997951 bp,有4623个编码序列。致病菌株基因注释结果显示,菌株TDHJ7中共有245个基因参与致病过程,其中参与果胶酶、纤维素酶和蛋白酶合成的基因分别有22、19和12个,参与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型分泌系统的基因有171个,参与编码毒素的基因有21个,表明菌株TDHJ7可能主要通过产生果胶酶、纤维素酶和蛋白酶等细胞壁降解酶,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型分泌系统参与毒素类物质的转运,同时产生毒素类物质来引起植物发病。

四种口腔厌氧菌内毒素对小鼠血清干扰素的诱生作用

用BCG致敏小鼠,再由腹腔注射纯化的4种口腔厌氧菌内毒素(LPS),用微量细胞病变抑制法(CPE)测定,发现内毒素注射2h后,小鼠血清干扰素(IFN)活性达到高峰,4种内毒素诱导的干扰素活性分别为109～126u/ml。内毒素诱导最佳浓度为100μg/mouse。

口腔厌氧菌内毒素对肿瘤坏死因子(TNF)的诱导活性

采用TNF体外细胞毒活性检测法发现,用BCG致敏ICR小鼠,再经腹腔注射不同剂量的口腔厌氧菌内毒素(LPS),可导致血清TNF迅速产生,其高峰位于注射后2h。腹腔注射1.0μg内毒素即可诱导机体产生TNF,并随内毒素剂量增加而呈剂量依赖曲线。至50μg内毒素时,TNF产生曲线趋于平坦,4种内毒素对TNF的诱导活性分别为4896～6580u/ml。

响应曲面法优化Gluconobacter melanlgenu X42培养基

采用Plackett-Burman设计、最陡爬坡试验和中心组合试验相结合的策略对Gluconobacter melanlgenu X42转化培养基进行优化。试验结果表明:最佳转化培养基组成为麦芽抽提物0.46 g/L、蛋白胨2.07 g/L、Ca CO30.70 g/L、Zn SO40.04 g/L。优化后L-山梨糖生成量提高了9.9%。可以应用响应曲面法对G.melanlgenu X42转化培养基进行优化。

山梨糖脱氢酶和氨甲酰化酶的融合表达

利用大肠杆菌-生黑醋杆菌穿梭载体pUG18构建了山梨糖脱氢酶基因sdh和氨甲酰化酶基因hyuC的融合表达质粒pUG18-SDH-HyuC。在JM109/pUG18-SDH-HyuC中检测到山梨糖脱氢酶(SDH)和氨甲酰化酶(HyuC)的酶活性,大量的SDH和HyuC不以融合蛋白形式存在。将质粒pUG18-SDH-HyuC电转化至生黑醋杆菌H24,检测到HyuC活性,但尚未检测到SDH酶活性。从生黑醋杆菌转化子中提取质粒,重新转化至JM109,又可同时检测到SDH和HyuC活性,传代实验和对质粒的鉴定结果也说明该质粒在H24中稳定存在。

致病菌与非致病菌诱导对家蚕抗菌肽基因defensinA/B的表达定量分析

在致病菌(Bacillus bombyseptieus)与非致病菌(Escherichia coli)诱导家蚕后的不同时间,采用实时荧光定量PCR方法,对抗菌肽基因defensinA/B在脂肪体中的表达进行了定量分析。结果表明,在家蚕被注射黑胸败血芽孢杆菌致病菌和非致病菌(大肠杆菌)后的3、9、12 h,检测到脂肪体中的Bm-defA/B的转录活性上调,Bm-defB的响应活性高于Bm-defA,Bm-defB对黑胸败血芽孢杆菌致病菌的响应快于Bm-defA,提示Bm-defensins在家蚕对抗细菌侵染的免疫反应中发挥重要的作用。

四种口腔厌氧菌内毒素对集落刺激因子的诱导作用

采用半固体软琼脂单层细胞培养法,测定4种口腔厌氧菌内毒素(LPS)诱导小鼠集落刺激因子(CSF)的活性。结果发现,0.1μg的内毒素即可诱导CSF增生,并随内毒素剂量增加而呈剂量依赖曲线。但当内毒素剂量超过50μg后,CSF水平反呈下降趋势。血清CSF产生高峰位于内毒素注射后6h。4种内毒素对CSF的诱导活性分别为65～88CFU—C。由内毒素诱生的CSF主要为诱导单核-巨噬细胞分化增殖的GM-CSF。

家蚕类钙粘蛋白BtR-175基因敲除突变体创制和抗性检测

家蚕类钙粘蛋白BtR-175不仅是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)晶体毒素蛋白的受体蛋白,也是黑胸败血芽孢杆菌(Bacillus bombysepticus)晶体毒素蛋白的受体分子。为建立对黑胸败血芽孢杆菌具有抵抗能力的家蚕品系,采用CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术,设计引导RNA(gRNA)对家蚕BtR-175基因进行精确定点编辑,对蚕卵显微注射重组质粒pU C57-hA 4-Cas9和T-U6-BtR-175后,筛选获得2个碱基插入导致蛋白质翻译提前终止的BtR-175基因敲除突变体,命名为ΔBtR-175。4龄起蚕经口添食黑胸败血芽孢杆菌,结果ΔBtR-175突变体家蚕的死亡率为34.4%±5.8%,野生型家蚕的死亡率为57.8%±8.4%,表明ΔBtR-175对黑胸败血芽孢杆菌的侵染抵抗性显著提高。饲养试验显示ΔBtR-175突变体和野生型家蚕的茧层量没有显著性差异。该突变体有望进一步培育为家蚕抗性育种素材。

皮肤紫色着色性细菌病2例报告

皮肤紫色着色性细菌病(chromobacter iuim violaceum disase)较少见,国内仅张氏1982年报告过6例.现将我科所见2例报告如下: