不同品系黑腹果蝇细胞系的建立(Ⅱ)——黑条体突变型(BSR)细胞系的建立和生物学特征

为了广泛选择外源真核基因高频扩增及高效表达的载体和受体系统，利用改良的Ｍ３（ＢＦ）培养基从黑腹果蝇（ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＭｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）黑条体（Ｂｌａｃｋｓｔｒｅａｋｂｏｄｙ·ＢＳＲ）的胚胎中建立了一株细胞系命名为ＢＳＲ９８０４．原代培养４０ｄ形成单层细胞，以１∶２分种率７ｄ传代一次，连续传代４０代次，细胞倍增时间为１８ｈ，细胞系以２倍染色体为主，未发现结构异常的染色体，２％胎牛血清为维持细胞生存的最小需要量，细胞系可在４℃普通冰箱中保存复苏．

稀有的黑檀体基因(ebony)5′UTR自发突变导致黑腹果蝇的黑条体突变

由于果蝇Drosophila群体中有很多自发突变其中包括多种体色突变,因此它是一个研究自发突变的优秀的模式体系。本研究证实我们实验室发现的一个可以引起果蝇体色突变的自发突变(bsr)是一个黑檀体(e)的等位基因,将其命名为ebsr。序列分析显示ebsr的5′端缺失了953个碱基,其中包括外显子1后端的206个碱基及相连的内含子1的747个碱基。逆转录PCR结果显示5′端的缺失导致内含子1不能从mRNA中剪接掉,由此导致该mRNA的翻译起始密码子AUG前端增加了一个3.2kb的序列。该序列导致ebsr的mRNA的5′UTR(5′-untranslated region)区较野生型基因增加近3kb的长度。通过mRNA二级结构分析发现这个增加的3kb的片段可以形成复杂的颈环结构(stem-loop)。免疫印迹结果显示该突变基因没有基因产物产生。本研究进一步证实了由于mRNA的5′UTR序列结构的改变可以影响到蛋白质的翻译。