响应面法优化超声辅助提取黑果枸杞叶片总黄酮的工艺研究

采用单因素试验,研究乙醇浓度、料液比、超声时间、超声温度及超声功率对总黄酮提取率的影响,依据Box-Behnken的中心组合设计,采用四因素三水平响应面法优化从黑果枸杞叶中提取总黄酮的最佳工艺条件。结果表明:最佳工艺为,乙醇提取浓度为70%,超声功率400 W,料液比为1∶25,超声提取温度58℃,黑果枸杞叶片总黄酮的平均得率为1.62%。与理论预测值的相对误差为1.22%。说明响应面法优化超声提取黑果枸杞叶片总黄酮的工艺条件稳定可行。

黑果枸杞总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性

应用水提法提取黑果枸杞中总黄酮,采用单因素和Box-Behnken试验设计,利用响应面分析法选取乙醇体积分数、提取时间、提取温度以及料液比进行4因素3水平试验,优化黑果枸杞总黄酮的提取工艺,并测定总黄酮清除超氧阴离子、DPPH和羟自由基的能力,初步考察其抗氧化活性。结果表明:水浴提取的最优工艺参数为乙醇的体积分数为79.6%,提取时间为60.8 min,料液比为1 g∶15.6 mL,提取温度为70.2℃。在此优化条件下,黑果枸杞总黄酮的提取量可达到69.02μg/mL。其中影响提取工艺参数的主次因素为料液比>乙醇体积分数>提取温度>提取时间。总黄酮对超氧阴离子、DPPH和羟自由基清除能力可以达到59.32%、72.68%、46.14%,说明黑果枸杞总黄酮具有一定的抗氧化活性。

响应面法优化超声波-微波协同提取黑果枸杞叶总黄酮工艺

利用响应面法对超声波-微波协同提取黑果枸杞叶总黄酮的工艺进行优化,在单因素试验基础上,以微波功率、液料比、提取时间、乙醇浓度为主要因素,总黄酮提取率为响应值,通过响应面分析法进行四因素三水平BoxBehnken试验对提取条件进行优化。结果显示,各因素对黑果枸杞叶总黄酮提取率相对影响程度为:液料比>乙醇浓度>提取时间>微波功率。且液料比18.9∶1(mL/g),乙醇浓度69%,提取时间9.9 min,微波功率175 W为最佳提取条件,此时黑果枸杞叶总黄酮提取率为(0.997±0.015)%。理论预测值为1.01%,结果与预测值基本符合,证明该模型有效,工艺稳定可行。

黑果枸杞中总黄酮的降脂活性研究

目的研究黑果枸杞中总黄酮提取物对高脂血症SD大鼠的降血脂作用。方法选取造模成功的SD大鼠60只,随机分为6组(n=10),分别为正常对照组(NC组)、高脂血症模型组(MC组)、辛伐他汀组(3.3 mg/kg,S组)以及黑果枸杞总黄酮粗提物高剂量组(100 mg/kg,HF组)、中剂量组(50 mg/kg,MF组)和低剂量组(25 mg/kg,LF组)。连续灌胃给药4周,正常组喂养普通大鼠饲料,其余组喂养高脂饲料,给药结束后,采用酶标仪检测血清和肝组织液中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)的浓度以及SD大鼠试验前后的体重变化率和肝指数等指标。结果黑果枸杞总黄酮中、高剂量组大鼠的血清和肝组织中TG、TC和LDL-C值与模型组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与高脂血症模型组相比,黑果枸杞总黄酮粗提取物中、高剂量组大鼠的血清和肝组织中HDL-C值增高,差异有统计学意义(P<0.05);同辛伐他汀组与高脂血症模型组比较,黑果枸杞总黄酮粗提取物中、高剂量组肝指数显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黑果枸杞总黄酮粗提物对患有高脂血症的SD大鼠有较好的降脂活性。

大孔树脂分离纯化黑果枸杞总黄酮的研究

目的:研究大孔树脂分离纯化黑果枸杞总黄酮的工艺条件及参数。方法:利用单因素试验和多因素正交试验研究大孔树脂分离纯化黑果枸杞总黄酮的最佳工艺条件。结果:AB-8犁大孔树脂分离纯化黑果枸杞总黄酮的最佳工艺条件为:上样液浓度0.200mg/ml,流速2ml/min,pH5;以95%的乙醇洗脱,流速4ml/min,用量为5倍柱床体积。AB-8树脂的饱和吸附量为0.64691mg/g树脂,重复利用9次吸附最仍然很好。采用该工艺分离纯化黑果枸杞总黄酮含量达28%。结论:AB-8树脂分离纯化黑果枸杞总黄酮效果较好,工艺的重复性和稳定性良好,适合于工业化生产。

黑果枸杞叶总黄酮的体外抗氧化活性研究

通过测定黑果枸杞叶总黄酮的还原能力,以及对小鼠血清羟自由基清除能力、小鼠红细胞溶血性、小鼠肝组织脂质过氧化产物MDA生成的影响,探讨黑果枸杞总黄酮的体外抗氧化活性。结果表明:黑果枸杞总黄酮在化学本质上具有一定的抗氧化能力,能显著抑制小鼠红细胞溶血,IC50为0.124mg/mL;能增强小鼠血清抗活性氧能力,抑制小鼠肝组织脂质过氧化产物MDA生成,并显示出一定的量效关系。说明黑果枸杞叶总黄酮在一定浓度范围内具有抗氧化活性。

黑果枸杞类黄酮的提取和精制工艺研究

采用正交试验法研究黑果枸杞类黄酮提取和精制最佳工艺条件。结果表明黑果枸杞叶中类黄酮含量远远大于枝中,从叶中提取最佳工艺条件为:以60%乙醇作提取剂、固液比1:20、60℃提取40 min,类黄酮提取率为0.228 9%,类黄酮含量为0.415 6%;枝中提取最佳条件为:以80%乙醇作提取剂、固液比1:30、70℃提取80 min,类黄酮提取率为0.100 4%,类黄酮含量为0.303 5%;采用AB-8型大孔树脂对叶类黄酮进行精制,精制条件为:上样液浓度0.200 g/L、流速2 mL/min、pH=5.0,以95%乙醇洗脱、流速4 mL/min、用量为5倍柱床体积。经树脂纯化后的精制品中类黄酮含量达到28.0%,含量比粗制品提高了67.37倍。说明该工艺可行,可应用于实际生产。

Plackett-Burnman联合响应面法优化黑果枸杞黄酮提取工艺及抗氧化性研究

Plackett-Burnman(PB)联合响应面法优化黑果枸杞黄酮提取工艺并评价其抗氧化性。依次通过PB实验设计、最陡爬坡实验设计研究了5种影响因素对提取率的影响,确定了显著性影响因素及响应面中心,采用Box-Behnken(BB)实验设计优化了提取工艺;采用FRAP法及ABTS、DPPH法评价了黑果枸杞黄酮的抗氧化性,并与抗坏血酸进行了平行比较。结果表明,最佳提取工艺参数为:51%乙醇(体积分数)与原料之比为30:1(mL/g),62℃、240 W超声辅助提取42 min,提取率可达42.0974 mg/g(原料),与理论预测值的相对标准偏差为3.24%;FRAP法及ABTS、DPPH法均表明,黑果枸杞总黄酮还原力强于抗坏血酸,其对ABTS、DPPH自由基清除的IC_(50)分别为0.0252、0.0272 mg/mL,均较抗坏血酸强,且二者抗氧化性均与浓度呈量效关系,为开发黑果枸杞资源、拉长其产业链提供了一定的理论基础。

正交试验优化黑果悬钩子茎、叶总黄酮的提取纯化及其抗氧化活性

利用单因素试验和正交试验优化了黑果悬钩子(Rubus caesius?L.)茎和叶总黄酮的提取工艺,通过清除DPPH自由基、ABTS+·的方法测定了黑果悬钩子茎和叶的抗氧化活性。优化的总黄酮提取工艺为:提取温度80℃、提取时间70 min、乙醇溶液体积分数60%、料液比1∶90(g/m L)。通过比较AB-8等14种大孔树脂对黑果悬钩子茎、叶总黄酮的吸附分离效果,从中筛选出AB-8大孔树脂是理想的吸附剂。通过单因素试验,确定AB-8大孔树脂对黑果悬钩子总黄酮分离纯化的最优工艺为:上样流速1?m L/min、上样液总黄酮质量浓度0.32?mg/m L、上样体积80?m L,吸附饱和平衡后,以40?m L?60%乙醇溶液1.5?m L/min的流速动态洗脱。经AB-8大孔吸附树脂纯化后,提取液的总黄酮含量和抗氧化能力显著提高,叶和茎总黄酮含量为纯化前的1.4倍和2.4倍,叶和茎的的ABTS+·清除能力分别为纯化前的1.7倍和2.5倍,DPPH自由基清除能力分别为纯化前的1.7倍和2.6倍。这些结果表明:黑果悬钩子叶和茎均具有较高的总黄酮含量和明显的抗氧化活性,是潜在的天然抗氧化剂资源。

宁夏枸杞与黑果枸杞总黄酮含量及抗自由基活性的比较研究

采用索氏提取以75%乙醇为溶剂,料液比1∶14,时间2.5 h,提取宁夏枸杞和黑果枸杞中的总黄酮;用Na NO2-Al(NO3)3-Na OH比色法通过紫外分光光度计在510 nm处测定提取液吸光度值,计算总黄酮含量进行比较;运用DPPH法研究提取液抗自由基活性。研究发现宁夏枸杞中总黄酮含量为1.665%,黑果枸杞中总黄酮含量为2.710%,宁夏枸杞和黑果枸杞都能有效清除DPPH,黑果枸杞对DPPH自由基清除率是95.3%,略高于宁夏枸杞自由基清除率94.1%。

黑果小檗中总黄酮的超声提取及其含量测定

[目的]建立一种测定黑果小檗中总黄酮含量的方法。[方法]用超声波提取黑果小檗果实中的总黄酮,然后以芦丁为标准品,采用分光光度法测定总黄酮含量。[结果]芦丁浓度与吸光度的线性关系方程为A=0.010 74 C+0.009 214(r=0.999 2),表明芦丁在7.5～60.0μg/ml范围内与吸光度值线性关系良好,平均回收率为93.6%;测得黑果小檗果肉、籽粒中总黄酮的含量分别为0.78%和1.89%。[结论]该方法快速、简便、可靠,可用于黑果小檗中总黄酮含量的测定。

基于生物信息学探讨黑果枸杞总黄酮治疗非酒精性脂肪肝的作用机制

本文旨基于生物信息分析揭示非酒精性脂肪肝的关键基因,并基于超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC/MS-MS)、生物信息及分子对接技术识别并探究黑果枸杞总黄酮成分及其治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制,为其药效物质基础研究提供参考依据。本研究用GSE89632数据集,其中包括39名NAFLD患者和24名健康对照组。Limma包分析得到3375个差异基因,再通过WGCNA分析得到19个模块和95个最相关基因。黑枸杞总黄酮通过进行定性分析和靶点预测得到71个活性成分和375个相关基因。疾病基因和成分靶点基因交集得到24个基因,用CytoHubba筛选出10个Hub基因。通过DAVID数据库得到KEGG通路9条,GO分析条目33条。分子对接结果表明,大多数黑果枸杞总黄酮成分与关键靶点具有较好的结合力。生存分析结果中VEGF与HCC的生存分析密切相关。免疫细胞浸润相关性评估分析结果表明,Hub基因与幼稚B细胞、γδT细胞、单核细胞等8种免疫细胞相关。本研究揭示了非酒精性脂肪肝的关键基因、明确了黑果枸杞总黄酮成分、预测了黑枸杞总黄酮成分治疗非酒精性脂肪肝的作用机制并初步验证了其靶点,为深入阐明黑果枸杞总黄酮的药效物质基础及作用机制提供了实验及理论依据。

玳玳果总黄酮提取物纯化工艺的再优化

目的：再优化玳玳果总黄酮提取物纯化工艺条件。方法：比较AB-8大孔吸附树脂柱以不同径高比纯化后的总黄酮纯度,优选大孔树脂柱装填径高比;考察收集的洗脱液体积对主成分群、总黄酮含量、特征成分新橙皮苷和柚皮苷相对含量的影响,优选收集的洗脱液区段。结果：玳玳果总黄酮提取物纯化工艺改进的条件为,大孔吸附树脂柱装填径高比为1：10,收集洗脱液区段为0.6-1.0 BV。采用再优化后的纯化工艺条件经3批验证实验,总黄酮纯度提高到90%,提取物中新橙皮苷和柚皮苷含量达60%以上,并保留主成分群相对含量的原有特征。结论：改进后工艺适合于总黄酮含量大于90%的玳玳果总黄酮提取物的制备。

黑果枸杞总黄酮对HepG-2细胞增殖与凋亡的影响

目的探究黑果枸杞总黄酮抗肝癌作用的可能机制。方法采用噻唑蓝比色法检测不同浓度黑果枸杞总黄酮对LO-2细胞存活率和HepG-2细胞抑制率的影响,确定最佳干预时间和浓度,再以确定的3个质量浓度黑果枸杞总黄酮(25、50和100μg/mL)和20μg/mL顺铂给药48 h,使用细胞仪检测细胞凋亡和周期变化,通过检测细胞凋亡相关酶的活性,初步考察黑果枸杞总黄酮抗肝癌的作用机制。结果黑果枸杞总黄酮对HepG-2细胞的增殖有一定的抑制作用,抑制率可达98.27%。黑果枸杞总黄酮诱导HepG-2肝癌细胞周期阻滞于S期,使细胞停止分裂和增殖,同时可通过上调Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和半胱氨酸蛋白酶3(cysteine proteinase-3,Casp-3)及下调B细胞淋巴瘤因子2(B-cell leukemia-2,Bcl-2)的表达水平来诱导HepG-2肝癌细胞的凋亡。结论黑果枸杞总黄酮对肝癌细胞具有一定的抑制作用。本研究可为后期进一步研究黑果枸杞抗肝癌作用机制提供依据。

短梗五加果提取物中总黄酮、总酚及3种指标成分的含量测定

目的建立短梗五加果提取物中总黄酮与总酚及原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷3种指标成分的含量测定方法。方法采用紫外-可见分光光度法:以芦丁为对照品,AlCl3显色,在273 nm处测定短梗五加果提取物总黄酮含量;以绿原酸为对照品,Al(NO3)3显色,在520 nm处测定短梗五加果提取物总酚含量。采用HPLC法测定3种指标成分含量:色谱柱为Hypersil ODS2柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-水-冰醋酸溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL.min-1,柱温40℃,检测波长254 nm。结果紫外-可见分光光度法:芦丁质量浓度在5.00～40.00 mg.L-1(r=0.9998)内、绿原酸质量浓度在4.98～59.70 mg.L-1(r=0.999 9)内线性关系良好,芦丁、绿原酸的平均回收率分别为101.8%1、00.7%,RSD分别为1.1%、0.74%。HPLC法:3种指标成分线性范围分别为:原儿茶酸0.1～2.5 mg.L-1、绿原酸16.8～420 mg.L-1、金丝桃苷3.68～92 mg.L-1r,均为0.999 9,平均回收率为96.8%～101.2%,RSD分别为1.7%、1.2%和0.99%。结论两方法简便、准确、重复性好,可综合用于短梗五加果提取物的质量控制。

Plackett-Burman设计和响应面法优化黑果小檗果实总黄酮超声提取工艺

目的优化黑果小檗干燥果实总黄酮超声提取工艺。方法采用Plackett-Burman(PB)设计评价影响超声提取黑果小檗果实总黄酮得率的因素,筛选了3个主要影响因素,经响应面分析法进一步优化,最终得到最佳提取条件。结果黑果小檗干燥果实总黄酮超声提取最优工艺条件为:乙醇浓度64%、液料比29∶1、提取时间32min、超声功率350 W、提取次数3次,总黄酮提取率为6.213%。结论该方法简便、合理,适用于黑果小檗干燥果实中总黄酮的提取。

黑果枸杞总黄酮固体分散体的制备

目的:采用不同载体制备黑果枸杞总黄酮固体分散体,并进行物相表征。方法:以体外累积释放百分率为考察指标,以载体的种类、载体与原料比例、搅拌时间为考察因素,采用L9(34)正交试验设计筛选黑果枸杞总黄酮固体分散体制备工艺参数,并以扫描电镜、粉末X-射线衍射(XRD)和热重分析(TGD)技术进行形态表征。结果:当载体为(PEG6000)、原料药与载体的比例为1∶3、搅拌时间为75 min时黑枸杞总黄酮固体分散体的累积释放百分率可达到90.3%,物相表征结果表明黑果枸杞总黄酮与PVP-K30形成无定形状态固体分散体累积释放百分率在30 min之内达到89.3%。结论:将黑果枸杞总黄酮制备成固体分散体可显著提高药物体外溶出度,该工艺稳定,可以用于黑果枸杞总黄酮固体分体的制备。

超高效液相色谱-质谱联用技术解析黑果枸杞超临界CO2萃取物中黄酮类天然产物结构

以青海柴达木黑枸杞为研究材料,对其超临界CO2萃取物,采用超高效液相色谱-质谱联用技术和PeakView色谱工作站拟合进行分析,并通过二级质谱解析和紫外光谱及质谱数据比对,阐明其中的黄酮组分及其结构。共鉴定出黑果枸杞果的超临界CO2萃取物中含有13种黄酮类化合物(7种黄酮醇苷元及黄酮醇苷,3种二氢黄酮醇苷元,2种黄酮苷元和1种二氢黄酮苷元),包括芦丁、槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷即槲皮素-3-O-吡喃半乳糖苷、二氢槲皮素、二氢异鼠李素、二氢山柰酚、槲皮素、芹菜素、橙皮素、苜蓿素、山柰酚、异鼠李素和山柰素,其中橙皮素和苜蓿素在黑果枸杞成分研究中未被发现过。

Box-Behnken设计响应面法优化黑果枸杞总黄酮纯化工艺

目的应用Box-Behnken设计响应面法优化黑果枸杞总黄酮纯化工艺条件及相关参数。方法考察6种大孔吸附树脂静态、动态吸附和解吸性能,用单因素试验分别对上样浓度、上样体积、上样pH、洗脱液浓度、洗脱液体积和洗脱流速进行考察,以黑果枸杞总黄酮纯化后含量为指标,再从6个单因素中选出对解吸附试验影响最显著的3个因素进行三因素三水平Box-Behnken设计响应面实验。结果NKA-9型大孔树脂为纯化黑果枸杞总黄酮的最佳树脂,最佳纯化工艺条件为总黄酮提取液浓度为4 mg/mL,pH为4.0,按5 BV进行上样,再用3 VB的80%乙醇在2 mL/min流速下进行洗脱,黑果枸杞总黄酮含量可以从4.54%提高到43.19%。结论此工艺对黑果枸杞总黄酮的纯化效果较好,工艺简单且稳定性良好,适用于工业化生产。

黑果枸杞总黄酮对高脂模型小鼠抗氧化活性的影响

目的:研究黑果枸杞总黄酮的体内抗氧化活性。方法:利用高脂血症小鼠模型进行试验。结果:黑果枸杞总黄酮可以提高小鼠血浆T-AOC、肝脏GSH-Px、SOD酶活力,降低MDA生成量。结论:黑果枸杞总黄酮具有体内抗氧化生物活性,可以作为预防动脉粥样硬化的新药来源。