黑枸杞多糖的提取及其对副干酪乳杆菌L9、嗜热链球菌G2生长特性及抗氧化能力的影响

以野生黑枸杞为原料,优化超声波提取黑枸杞多糖的工艺条件,研究黑枸杞多糖对嗜热链球菌G2(Streptococcus thermophilus G2)与副干酪乳杆菌L9(Lactobacillus paracasei L9)生长特性的影响以及对2株乳酸菌抗氧化能力的影响。结果显示:超声波提取黑枸杞多糖的最佳工艺参数为液料比41.50(mL∶g),超声波功率418 W,提取时间16 min,黑枸杞多糖的提取率可达(14.13±0.74)%;各浓度梯度的黑枸杞多糖可促进G2的生长并加快其降酸速度,其中0.5 g/L的多糖组相较于无多糖组生物量增加了26.7%,显著(P<0.05)促进了G2的生长;黑枸杞多糖还可延长L9的对数生长期,但对其生长影响不显著(P>0.05)。此外,黑枸杞多糖对G2与L9的抗氧化能力均产生促进效果,当多糖添加量为1.5 g/L时,G2完整细胞与无细胞提取物清除DPPH自由基的能力分别增强了300.0%、243.6%,还原力增强了6.7%、4.7%;L9完整细胞与无细胞提取物清除DPPH自由基的能力分别增强了18.7%、116.7%,还原力增强了4.1%、4.1%。结果表明,黑枸杞多糖可成功改善2株乳酸菌的抗氧化能力。

提取温度对黑果枸杞多糖理化特性及抗氧化、免疫调节活性的影响

以提取温度(20、40、60、80、100℃)条件为变量,采用水提醇沉法提取得到黑果枸杞多糖(Lycium ruthenicum Murr.polysaccharides,LRPs);通过分析多糖得率、碳水化合物含量、糖醛酸含量、紫外光谱、特征性红外光谱、相对分子质量和单糖组成,研究提取温度对LRPs理化特性的影响;通过检测DPPH、ABTS+、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除活性及铁氰化钾的还原能力,分析提取温度对LRPs抗氧化活性的影响;通过分析LRPs对RAW264.7细胞活力及细胞因子分泌的影响,研究提取温度对LRPs免疫调节活性影响。结果表明:不同提取温度可以影响LRPs的理化特性及其抗氧化和免疫调节活性。在60℃(LRP60,2.38%±0.11%)和80℃(LRP80,2.30%±0.25%)时,多糖的提取得率显著高于其他温度;LRP20、LRP40、LRP60、LRP80和LRP100的相对分子质量分别为293.34、227.94、233.45、273.53和233.66 kDa。LRPs单糖组成主要为L-Ara、D-Gal、D-Glc、D-Man、L-Rha和D-GlcA,并含有少量D-Xyl,其中LRP80和LRP100含有D-GalA;在60和80℃温度下提取得到的黑果枸杞多糖LRP60和LRP80具有良好的抗氧化活性和免疫调节活性,提取温度60℃时,黑果枸杞多糖单糖组成中D-Gal和L-Ara比例升高,抗氧化活性较好;提取温度80℃时,D-GlcA、D-Glc和D-GalA比例升高,黑果枸杞多糖免疫调节活性较好。黑果枸杞多糖LRP60和LRP80可作为潜在的天然抗氧剂或免疫调节剂。

超声辅助提取黑枸杞多糖及其体外抗氧化、抗肿瘤活性研究

研究利用超声辅助提取黑枸杞多糖,以其得率为考察指标,对料液比、提取温度、提取时间和超声功率4个因素进行单因素试验,再进一步进行四因素三水平的正交试验优化黑枸杞多糖的提取工艺参数,并对超声辅助提取得到的黑枸杞多糖(LRP-U)与热水浸提法所得黑枸杞多糖(LRP-H)进行抗氧化和抗肿瘤活性对比分析。结果表明,超声辅助提取黑枸杞多糖的最佳提取条件为料液比1∶30 g/mL、提取温度70℃、提取时间70 min和超声功率300 W,在此条件下提取率为24.53%。所得多糖对DPPH·、OH·和ABTS+·的清除率最大分别达到82.52%,35.81%和76.68%,均高于LRP-H。并且对抑制肝癌细胞HepG2具有显著效果, LRP-U和LRP-H的最高抑制率分别达到34.31%和31.04%。以上结果显示,超声辅助提取的黑枸杞多糖具有良好的体外抗氧化和抗肿瘤活性。

黑果枸杞多糖的提取及抗肿瘤活性分析

为了研究黑果枸杞多糖的最佳提取工艺条件和枸杞多糖抗肿瘤活性,通过改变料液比、提取温度、提取时间等影响因素设计正交试验.提取的黑果枸杞多糖溶液经醇沉、抽滤、干燥等处理得粗多糖粉末,该粉末经大孔树脂脱色、Sevage法脱蛋白,精制得到黑果枸杞多糖.结果表明,黑果枸杞多糖的最佳提取工艺条件为:料液比1∶25,提取温度80℃,提取时间3 h,多糖提取率为11.58%;黑果枸杞多糖体外有抑制人慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖的作用,有望成为一种理想的抗肿瘤佐剂.

黑果枸杞多糖对大鼠肝损伤的保护研究

目的:探讨黑枸杞多糖(LBP)对丙烯酰胺(AA)致大鼠肝损伤的保护作用。方法:取健康成年大鼠70只,随机分为7组:染毒模型组(AA,灌胃AA水溶液20 mg/kg bw)、阳性对照组(NAC+AA,灌胃AA水溶液20 mg/kg bw和N-乙酰半胱氨酸水溶液200 mg/kg bw)、毒性抑制组(LBP+AA,分黑枸杞多糖低、中、高剂量组,灌胃AA水溶液20 mg/kg bw后分别灌胃黑枸杞多糖50、100、150 mg/kg bw)、高剂量多糖组(LBPH,灌胃黑枸杞多糖200 mg/kg bw)、正常对照组(CT,给予同等体积生理盐水)。连续给药饲喂4周,实验期间每周对大鼠进行称重,结束给药后进行各类相关指标测定及观察肝脏组织结构。结果:与CT组相比较,AA染毒组大鼠体重减少显著,大鼠肝组织细胞内SOD、CAT、GSH-Px的含量均呈显著性降低,MDA、AST、ALT的含量显著增高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。AA染毒组肝组织出现严重病变,肝小叶排列紊乱,肝细胞之间边缘界限模糊;与AA染毒组相比较,摄入不同浓度LBP实验组与NAC阳性对照组大鼠体重都得到明显改善,细胞中SOD、CAT、GSH-Px的活力均有显著性提高,肝组织中MDA、AST、ALT的含量均显著性降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。NAC+AA组和LBP+AA各组肝组织病变情况得到很好的改善,肝细胞没有明显的病例症状,肝细胞排列正常,细胞边缘界限清楚,细胞结构完整。结论:黑枸杞多糖能够改善AA染毒大鼠的肝损伤,提高肝脏抗氧化水平。

黑果枸杞多糖对菌群人源化小鼠肠道微生物调节研究

[目的]以菌群人源化小鼠(HFA-小鼠)作为模型,研究不同浓度黑果枸杞多糖对HFA小鼠肠道微生物的影响。[方法]征集一名健康志愿者,通过接种志愿者的粪便悬液构建HFA小鼠模型,将40只HFA小鼠随机分为4组,黑枸杞多糖低剂量组(CT+LPL)灌胃枸杞多糖50 mg/kg,黑枸杞多糖中剂量组(CT+LPM)灌胃枸杞多糖100 mg/kg,黑枸杞多糖高剂量组(CT+LPH)灌胃枸杞多糖200 mg/kg,正常对照组(CT)每天灌胃同体积的生理盐水。连续灌胃21 d,试验期间记录各组小鼠的体重变化,第22天处死小鼠后,取标本进行各项指标检测。[结果]CT+LPM组小鼠体重低于CT组,呈显著性差异(P<0.05),CT+LPM组HFA小鼠肠道中乳酸杆菌和双歧杆菌数量较CT组均增加,肠杆菌和肠球菌数量均减少,差异显著(P<0.01),CT+LPM组HFA小鼠肠黏膜sIgA含量极显著高于CT组(P<0.01)。[结论]黑枸杞多糖能够改善HFA小鼠肠道菌群环境,具有益生元作用,也能促进HFA小鼠肠黏膜sIgA的分泌。

NF-κB信号通路在小鼠阻塞性黄疸及运动与黑果枸杞多糖干预中的差异表达

目的:探讨NF-κB信号通路在小鼠阻塞性黄疸致肝损伤的机理及阐述运动联合黑果枸杞多糖改善肝损伤的效果。方法:KM小鼠随机分为5组:假手术组、模型组、枸杞组、运动组、枸杞+运动组。应用HE染色、免疫组化法、Realtime-PCR技术对肝组织进行检测。结果:1)HE染色显示,假手术组肝细胞索排列整齐;模型组大鼠肝细胞纤维化,可见片状肝细胞变性、坏死,乃至肝细胞索结构紊乱;枸杞组、运动组可见肝细胞少量点、片状坏死,肝小叶结构改变,肝索排列欠整齐;枸杞+运动组无明显组织坏死,肝小叶结构基本正常,肝索排列较整齐。免疫组织化学染色结果显示,枸杞+运动组小鼠肝组织NF-KB P65、TNF-α阳性表达均显著低于模型组。Real-time PCR结果显示,与模型组比较,枸杞+运动组小鼠血清NF-k B、TNF-α、TGF-β、IL-6 m RNA表达降低。结论:运动联合黑果枸杞多糖能改善肝损伤小鼠的免疫功能,对阻塞性黄疸小鼠的肝细胞具有修复作用。

有氧运动和黑果枸杞多糖对慢性脑缺血小鼠的干预及Notch通路相关因子的组织差异表达

目的观察有氧运动(SW)与黑果枸杞多糖(LRM)对慢性脑缺血小鼠的干预作用以及Notch通路相关因子在脑和血液组织差异表达的比较分析。方法 50只雄性KM小鼠,构建慢性脑缺血损伤模型,随机分为模型组(M组)、干预组[包括SW组、LRM组、LRM+SW组、阳性对照组(BLDJ组)],干预组分别进行中等强度有氧运动和/或黑果枸杞多糖(200 mg/kg)灌胃。设假手术组(SO组,10只)。各组进行神经行为学评估;Nissl染色进行脑组织显微结构形态学观察;免疫组化检测相关因子的蛋白表达水平;实时荧光定量技术检测脑组织和血液中Notch通路相关因子的表达。结果脑组织损伤得分M>SW>LRM>BLDJ>LRM+SW>SO(P<0.05)。M组脑组织神经元结构出现大面积损伤,LRM+SW组干预效果最佳(P<0.01)。SO组小鼠脑Notch1、Jagged1、NCX1、SYP阳性表达最高,干预组阳性表达均高于M组(P<0.01,P<0.05);LRM+SW组阳性表达较LRM组合BLDJ组高(P<0.01)。干预组调节神经细胞修复相关因子在组织和血液中的表达明显高于M组(P<0.01),其中LRM+SW组表达水平最高。Notch1、Jagged1、NCX1在组织和血液中的表达呈正相关,且在组织中的表达含量高于血液中的表达(P<0.05)。结论有氧运动与黑果枸杞多糖对小鼠慢性脑缺血引发的脑损伤有明显缓解作用,能不同程度促进神经元修复,且两者联合效果更为显著,其作用可能是通过调节Nocth通路中相关神经修复因子的表达,从而抑制脑损伤。

黑果枸杞多糖提取工艺及其含量测定中显色条件优化研究

目的:以响应面法优化黑果枸杞多糖提取工艺,正交法优化显色条件。方法:在单因素考察的基础上,选定提取温度、提取时间和料液比3个因素为自变量,以多糖提取率为响应值,利用响应面法建立数学模型,获得最佳工艺。选择对多糖含量测定结果产生显著影响的4个显色因素:5%苯酚用量、浓硫酸用量、反应温度、水浴显色时间进行正交试验。结果:最优工艺为:提取时间2h,提取温度90℃,液料比30∶1,在此优化条件下,平均提取率为3.21%,得率为5.0%。与理论值的相对误差为0.31%;最佳显色反应条件是质量分数为5%苯酚加入量为1.5mL,浓硫酸5mL,显色温度为90℃,水浴显色时间为30min。结论:响应面法优化黑果枸杞多糖提取工艺及正交法优化显色条件,方法简便,结果可靠。

基于UPLC-MS/MS分析黑果枸杞中多糖的研究

建立了超高效液相色谱串联质谱同时测定黑果枸杞中蔗糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、棉子糖、甘露糖含量的方法。样品经热水浸提,采用BEHC18色谱柱分离,以0.1%氨水溶液和0.1%氨水-乙腈溶液作为流动相,负离子模式扫描,外标法定量。结果表明,7种多糖在1.0~100.0μg/mL范围内呈良好线性关系,相关系数均大于0.99,7种多糖的检出限均为5 mg/kg,定量限均为10 mg/kg。该检测方法简单、灵敏度高,适用于黑果枸杞中多糖的测定。

黑果枸杞多糖对中波紫外线诱导HaCaT细胞增殖活性及P16蛋白表达的影响

目的观察经黑果枸杞多糖处理过的HaCaT细胞对中波紫外线(UVB)辐射引起的细胞的增殖活性变化,及对p16蛋白表达水平变化的影响。方法培养HaCaT细胞并随机分为3组,以黑果枸杞多糖(30mJ/cm^2UVB,2mg/m L)处理3组HaCaT细胞,以MTS法检测各组UVB辐射后的细胞增殖活性;以Western blot法检测各组UVB辐射后p16蛋白的表达水平。结果 UVB辐射HaCaT细胞后细胞增殖活性下降,p16蛋白表达水平升高(P<0.05)。与UVB辐射组相比,黑果枸杞多糖干预后再经UVB辐射的HaCat细胞增殖活性上升,p16蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论黑果枸杞多糖可升高UVB辐射后的HaCaT细胞增殖活性以及下调p16蛋白表达水平。

微波法提取黑果枸杞多糖工艺条件优化

以黑果枸杞为主要原料,采用微波辅助法提取黑果枸杞多糖,结合单因素试验和正交试验法优化黑果枸杞多糖的提取工艺条件。结果表明,通过单因素试验确定的最佳提取料液比为1∶25(g:mL)、微波功率为500 W、微波时间为20 min、提取次数为2次。再通过正交试验确定的最佳工艺参数为料液比1∶20(g:mL)、微波功率700 W、微波时间20 min、提取次数2次,在此条件下得到的黑果枸杞多糖提取率最高为6.52%。

响应曲面法优化黑果枸杞多糖的超声提取工艺

采用超声浸提法提取黑果枸杞多糖,并利用响应曲面法对提取工艺进行了合理优化。在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计模拟液固比、提取温度、超声功率和提取时间4个因素对黑果枸杞多糖得率综合影响的模型,得到最佳工艺条件,并验证了模型的可靠性。试验过程中,考察蛋白脱除率和多糖损失率2个指标,合理选取脱蛋白的方法;再经脱色、醇沉等步骤纯化多糖;采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,计算得率。试验条件下,Sevag法脱蛋白的效果最优,蛋白脱除率和多糖得率分别为35.85%和12.76%。黑果枸杞多糖超声提取的最佳工艺条件为:液固比30 m L/g、提取温度72℃、超声功率198 W、提取时间29 min,多糖得率理论最大值为12.91%,响应曲面法的Desirability达到0.900,优化结果可靠。验证结果多糖得率为12.58%,与预测值的相对误差为2.56%。该研究为黑果枸杞多糖的超声提取工艺条件的优化提供了理论支持。

黑果枸杞多糖对H_(2)O_(2)诱导的ARPE-19细胞的保护作用

目的:分离纯化黑果枸杞多糖并进行含量分析,研究其对氧化应激损伤的视网膜色素上皮ARPE-19细胞的保护作用。方法:通过层析分离得到4组黑果枸杞多糖,分别命名为LMP-1-1、LMP-2-1、LMP-3-1、LMP-4-1。采用CCK-8法检测细胞存活率;检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量变化;Hoechst/PI染色观察细胞形态;流式细胞仪双染法考察细胞凋亡情况;Western Blot检测正常情况、H_(2)O_(2)诱导和黑果枸杞多糖干预下细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平。结果:DEAE-52纤维素分离得到4个组分LMP-1、LMP-2、LMP-3、LMP-4;Sephadex G-100层析柱纯化得到组分LMP-1-1、LMP-2-1、LMP-3-1、LMP-4-1;经Sephadex G-100柱纯度鉴定为分子量均匀的单一组分;黑果枸杞多糖浓度增高至500μg/mL时,细胞活性受抑制(P<0.05);H_(2)O_(2)浓度为400μmol/L时,ARPE-19细胞半数存活(P<0.01);黑果枸杞多糖浓度为25~200μg/mL时有保护作用(P<0.01);与模型对照组比较,LMP-2-1组SOD、GSH-Px活力显著升高,MDA含量显著下降(P<0.01);与模型对照组比较,LMP-2-1低、中剂量组ARPE-19的总凋亡率显著降低(P<0.05)。与空白对照组比较,模型对照组NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达显著增加(P<0.01,P<0.05);与模型对照组比较,LMP-2-1低、中剂量组NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达显著下降(P<0.01),LMP-2-1高剂量组NLRP3、IL-1β蛋白表达显著下降(P<0.01,P<0.05)。结论:纯化后的黑果枸杞多糖可提高ARPE-19细胞的抗氧化能力,并且可能通过下调NLRP3、Caspase-1及IL-1β的蛋白表达,抑制ARPE-19细胞焦亡。

不同提取工艺对黑果枸杞糖类物质的影响

通过响应面法优化热水浸提法、超声辅助提取法和酶提取法对黑果枸杞多糖的提取工艺条件,分析3种提取方法对黑果枸杞多糖提取率的影响。建立超高效液相色谱串联质谱同时测定黑果枸杞中棉子糖、蔗糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖,并对3种最优提取工艺提取出的黑果枸杞多糖进行分析测定。结果表明:响应面优化后黑果枸杞粗多糖得率为酶法>超声辅助法>热水浸提法。经UPLC-MS/MS分析酶法提取阿拉伯糖较多,超声辅助法提取出葡萄糖较多,而热水浸提法能提取出少量蔗糖,热水浸提法提取出的糖类组分多于酶提取法和超声辅助提取法。提取黑果枸杞多糖7种糖类物质总量依次为酶法72.7 g/kg,超声辅助提取法62.3 g/kg,热水浸提法63.3 g/kg。