碳源和氮源对黑盖木层孔菌菌丝生长的影响

研究了四种碳源(蔗糖、乳糖、葡萄糖、可溶性淀粉)和九种氮源(玉米面、麸皮、马铃薯、大豆粉、酵母粉、蛋白胨、硝酸钾、硝酸铵、尿素)对黑盖木层孔菌菌丝生长的影响。从不同代数的菌丝体中提取多糖,并测定多糖含量、分子量分布范围及单糖组成。结果表明:黑盖木层孔菌菌丝生长的最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为玉米面,最优碳氮组合为蔗糖和玉米面的组合。不同代数的菌丝体多糖性状基本稳定。

黑盖木层孔菌发酵液多糖的分离纯化及活性研究

首次分离得到黑盖木层孔菌发酵液粗多糖(PNM),糖含量达到49.0%,对小鼠离体淋巴细胞有极显著的增殖作用。PNM经冻融分级、Sevag法脱蛋白、SepharoseCL-6B柱层析得单一级份(PNMⅠ),分子量约29kDa。气相色谱分析PNMⅠ为一杂多糖,主要由甘露糖、半乳糖、葡萄糖组成。初步考察,PNMⅠ对小鼠离体淋巴细胞也有极显著的增殖作用,可以抑制小鼠体内S-180肉瘤的生长。

响应面法优化黑盖木层孔菌菌丝体液体发酵培养基研究

应用Plackett-Burman设计法对影响液体发酵黑盖木层孔菌菌丝体产量的培养基组分进行筛选,确定影响菌丝体产量的关键因素为玉米粉、麸皮和VB1。在此基础上,采用最陡爬坡试验结合Box-Behnken响应面法优化黑盖木层孔菌液体发酵培养基。结果表明:当培养基组分中玉米粉为65 g/L、麸皮为49.31 g/L、VB1为214.61μg/L时,菌丝体产量预测值为10.75 g/L,最佳条件下菌丝体产量可达11.16 g/L,预测值与验证值吻合得较好。

黑盖木层孔菌菌丝体多糖的提取、纯化及活性研究

从黑盖木层孔菌发酵菌丝体中提取水溶性多糖(PNW).设计正交试验,优化PNW的最佳提取条件,结果表明:在提取温度为100℃的条件下,提取4次,浸提比为1∶30,浸提时间为2 h.PNW经醇沉分级,Sevag法脱蛋白,Sepharose CL-6B柱层析纯化得级分(PNWⅠ).高效液相色谱分析表明PNWⅠ为单一级分,相对分子质量约为3.3×104.气相色谱分析PNWⅠ的单糖组成为:岩藻糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其物质的量比为1.00∶0.81∶5.22∶7.11∶2.64.初步考察了PNW和PNWⅠ对小鼠体外淋巴细胞增值的影响,结果显示PNWⅠ在200μg/mL时对淋巴细胞有显著的促进增殖作用,PNW对淋巴细胞的增殖作用不显著.

黑盖木层孔菌发酵菌丝体和发酵液中活性多糖的结构鉴定

黑盖木层孔菌经液体发酵培养后,分别从菌丝体和发酵液中分离纯化得到水溶性多糖PNW1和PNM1.PNW1和PNM1均能抑制小鼠体内移植性肉瘤Sarcoma180的生长.在400mg/kg剂量时,连续灌胃10天,菌丝体多糖PNW1的抑瘤率可达74.70%,优于发酵液多糖PNM1(55.84%).两种多糖平均分子量分别为33和29kD.气相色谱分析表明,两种多糖均由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成.经部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、13CNMR、甲基化及其产物的GC-MS分析,确定了PNW1和PNM1的结构.