聚氨酯/黑种草子伤口敷料的制备与性能表征

利用静电纺丝技术制备了负载不同浓度黑种草子提取物(NSS)的聚氨酯(PU)纳米纤维膜(PU/NSS)。对该纳米纤维膜的力学性能、亲水性、溶胀性、透气性、抗氧化性、抗菌性以及细胞毒性进行了表征,探讨了其在伤口敷料领域的应用潜力。结果表明:PU/NSS纳米纤维膜的纤维直径随着NSS含量的增加而增大,且NSS的加入改善了PU纳米纤维膜的亲水性。另外,NSS中的活性成分使PU/NSS纳米纤维膜表现出优异的抗氧化性和抗菌性,可以有效避免伤口感染。细胞毒性试验结果证明PU/NSS纳米纤维膜具有良好的生物相容性。

瘤果黑种草子总皂苷的抗炎和免疫调节作用

目的 考察瘤果黑种草子总皂苷(TSSN)的抗炎和免疫调节作用。方法 建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎症模型,采用Griess法检测NO分泌水平,ELISA法检测细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β含量,采用qRT-PCR方法考察TSSN对NF-κB信号通路相关靶点mRNA表达水平的影响;酶动力学实验检测总皂苷对环氧酶-2(COX-2)以及5-脂氧酶(5-LO)的抑制活性;通过MTS法及ELISA法检测TSSN对静息期淋巴细胞的影响,并以TSSN对刀豆蛋白(ConA)、LPS分别诱导的小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响,以及对T淋巴细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-γ的影响来考察TSSN的免疫调节作用。结果 在LPS诱导的RAW 264.7炎症模型中,TSSN能显著降低LPS诱导的RAW264.7分泌炎症介质NO和促炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平,显著抑制TNF-α、IL-6、IL-1β m RNA表达水平,抑制iNOS、NF-κB p65 mRNA表达水平;在12.5~200μg·ml-1剂量时能显著抑制COX-2活性,在1 000~4 000μg·ml^(-1)剂量时对5-LO也具有显著抑制作用;此外,TSSN对ConA、LPS分别诱导的小鼠T、B淋巴细胞增殖具有显著抑制作用,明显抑制T淋巴细胞分泌TNF-α、IL-2、IL-6及IFN-γ。结论 TSSN具有较好的抗炎活性,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。此外,TSSN具有较好的免疫调节作用,其机制有待进一步研究。

维药瘤果黑种草子总皂苷镇咳祛痰及抗炎作用研究

目的研究探讨维药瘤果黑种草子总皂苷的镇咳、祛痰和抗炎作用。方法选择昆明种小鼠及健康新西兰种家兔为实验动物,采用小鼠浓氨水引咳法观察总皂苷的镇咳作用,小鼠气管苯酚红排泌法、家兔促进气管纤毛粘液实验法观察总皂苷的祛痰作用,二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠足跖肿胀实验观察总皂苷的抗炎作用。结果总皂苷可明显延长小鼠咳嗽的潜伏期,其高剂量组可显著降低氨水致小鼠的咳嗽次数(P<0.01);总皂苷能明显增加小鼠气管酚红排泌量(P<0.05～0.01),增加家兔气管纤毛粘液流运动速度(P<0.01);总皂苷能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀及角叉菜胶所致的足趾肿胀(P<0.01)。结论维药瘤果黑种草子总皂苷具有明显的镇咳、祛痰和抗炎作用。

黑种草子不同组分抑制亚硝酸盐积累、血小板聚集和血管收缩的体外实验研究

目的研究黑种草子不同组分对巨噬细胞活化后含亚硝酸盐量、血小板诱导后聚集、离体血管经苯肾上腺素引起收缩的影响。方法黑种草子醇提物经萃取分别得到乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物,后经大孔树脂纯化分别得到组分Ⅰ(总黄酮类成分)、Ⅱ(总皂苷类成分)和Ⅲ(总多糖类成分);组分Ⅳ(总生物碱成分)为黑种草子经酸水提取后乙醇洗脱乙酸乙酯萃取。以脂多糖和干扰素γ诱导小鼠巨噬细胞活化引起细胞上清液中亚硝酸盐累积;以二磷酸腺苷、花生四烯酸、胶原诱导大鼠体外血小板聚集;以苯肾上腺素引起大鼠离体血管收缩,而后考查黑种草子不同组分对上述指标的影响。结果组分Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ抑制亚硝酸盐形成,组分Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ具有抗血小板聚集作用,组分Ⅳ具有部分内皮依赖性血管舒张活性。结论黑种草子Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组分可干预血管系统中炎症的多个环节,且各有偏重,这是其活血通经药效的物质基础。

瘤果黑种草子提取物对慢性阻塞性肺病大鼠模型肺部炎症的影响

目的观察瘤果黑种草子提取物(油脂、非油脂)对大鼠慢性阻塞性肺病模型肺部炎症的影响。方法采用气管内滴入脂多糖(LPS)后雾化吸入木瓜蛋白酶建立慢性阻塞性肺病大鼠模型,28 d后分别灌胃给药治疗,正常组和模型组给予生理盐水,每天给药1次,连续给药20 d。观察各组大鼠的一般状况,HE染色观察肺组织的病理形态学改变,取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行炎性细胞分类,酶联免疫法测定肺泡灌洗液上清液中的IL-8、TNF-α和NF-κB的水平。结果瘤果黑种草子油脂、非油脂均可改善模型大鼠的一般状况,对其肺组织的病理变化有不同程度的减轻;肺泡灌洗液中的巨噬细胞、中性粒细胞所占比例明显下降(P<0.01或P<0.05),IL-8、TNF-α和NF-κB的水平均降低(P<0.01或P<0.05)。结论瘤果黑种草子提取物(油脂、非油脂)有一定的抗慢性阻塞性肺病大鼠模型肺部炎症作用,其机制可能与减弱炎性细胞对LPS的反应,抑制炎症因子的合成和释放有关。

黑种草子油对大鼠体外血栓形成和抗血小板聚集的作用

黑种草子油 0 2 5g/kg、0 5 g/kg能明显的抑制ADP、collagen诱导的大鼠血小板聚集 ,0 5 g/kg、1g/kg能抑制大鼠体外血栓长度 ,1g/kg能减轻大鼠体外血栓重量 ,明显延长大鼠血爆时间 ,还能降低甘油三脂 。

维药瘤果黑种草子质量标准研究

目的:建立瘤果黑种草子的质量标准。方法:采用TLC法对瘤果黑种草子药材中常春藤皂苷元进行定性鉴别:硅胶G板,以苯-甲醇-甲酸(17∶6∶1)为展开剂进行展开。采用HPLC测定瘤果黑种草子中常春藤皂苷元的含量:Kroma-sil100-5C18(250mm×4.6mm,5.0μm)色谱柱,乙腈-0.05%磷酸水(68∶32)为流动相,柱温20℃,检测波长为208nm,流速为1.0mL/min。结果:通过薄层色谱可鉴别常春藤皂苷元。常春藤皂苷元在0.252～10.08μg/mL(r=0.9999,n=6)与峰面积具有良好的线性关系,平均回收率为100.7%(RSD=2.3%)。结论:所建立的瘤果黑种草子质量标准研究方法可行,重复性好,能有效的控制该药材的质量。

黑种草子抑制乳腺癌细胞增殖的组分筛选及机制分析

目的结合体外筛选确定黑种草子抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖的有效组分并进行初步的机制分析。方法通过有机溶剂萃取和大孔树脂富集获得黑种草子各提取物,结合体外MTT法筛选黑种草子的各提取物中对4T1细胞具增殖抑制作用的有效组分;集落形成法考察有效组分对细胞集落形成的影响;Western Blot法考察黑种草子有效组分干预前后4T1细胞中p-JAK2的蛋白表达。结果黑种草子总黄酮(相对含量为60.19%)抑制4T1细胞增殖的IC50为最低,同时呈剂量依赖性抑制4T1细胞的集落形成,并下调细胞中p-JAK2的蛋白表达。结论黑种草子总黄酮是黑种草子抑制乳腺癌4T1细胞增殖和集落形成的有效组分,部分是通过抑制JAK/STAT信号转导通路中关键蛋白的磷酸化而发挥抗增殖效果的。

瘤果黑种草子挥发油平喘作用的研究

目的研究瘤果黑种草子挥发油平喘作用及其机制。方法采用整体动物喷雾致喘实验观察瘤果黑种草子挥发油的平喘作用;通过豚鼠肺支气管灌流法及离体回肠实验考察对气道平滑肌的舒张作用。结果低、高剂量(0.1和0.4mL·kg-1)瘤果黑种草子挥发油可明显延长小鼠哮喘反应的潜伏期,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01);低、中、高剂量(3,6和12μL·mL-1)挥发油明显增加豚鼠肺灌流量,降低豚鼠回肠平滑肌收缩张力,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论瘤果黑种草子挥发油具有一定的平喘作用,其作用机制可能与激动β2受体、拮抗M受体有关。

瘤果黑种草子总黄酮对RAW264.7细胞及豚鼠气管平滑肌的作用

目的探讨瘤果黑种草子总黄酮(TFNG)对RAW264.7细胞及豚鼠气管平滑肌的作用。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)、Griess Reagent法检测高、中、低剂量(20,40,80μg/mL)TFNG对脂多糖(LPS)体外诱导的RAW264.7细胞分泌白细胞介素8(IL-8)、IL-6、一氧化氮(NO)的影响;采用离体气管恒温灌流的方法,制备豚鼠气管螺旋条标本,通过观察其张力变化考察1,2,4 g/L不同剂量TFNG和10 g/L水煎液对张乙酰胆碱(ACh)和组胺(His)所致痉挛离体豚鼠气管平滑肌解痉作用。结果 TFNG低于100μg/mL时对RAW264.7细胞无明显的毒性作用;与LPS组比较,TFNG低、中、高剂量(20,40,80μg/mL)均能抑制RAW264.7细胞过量分泌IL-6,IL-8,NO(P<0.05),且呈一定量效关系;TFNG低、中、高剂量组(1,2,4 g/L)可明显舒张ACh及His引起的豚鼠支气管平滑肌痉挛,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TFNG具有一定的体外抗炎及支气管解痉功能。

HPLC法测定瘤果黑种草子中常春藤皂苷元及齐墩果酸含量

目的建立HPLC法同时测定瘤果黑种草子中常春藤皂苷元及齐墩果酸的含量。方法色谱柱:HypersilODS C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水-冰醋酸-三乙胺(85∶15∶0.04∶0.02);流速:0.5 ml/min;检测波长210 nm。结果 TLC能检出齐墩果酸、常春藤皂苷元相应的斑点;HPLC法测定常春藤皂苷元、齐墩果酸分别在22.76～227.6、40.28～201.4μg/ml范围内线性关系良好,r值分别为0.9998、0.9997,平均回收率分别为94.6%、93.8%,RSD分别为1.8%、1.2%。结论本法可用于瘤果黑种草子中皂苷的质量控制,方法简单,结果准确,灵敏度高。

瘤果黑种草子挥发油对RAW264.7细胞及豚鼠气管平滑肌的作用研究

目的研究瘤果黑种草子挥发油(volatile oil fromNigella glandulifera,VONG)对小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7及豚鼠气管平滑肌的作用。方法细胞水平实验:分为空白对照组、脂多糖(LPS)组、水煎液组(100μg/mL)和VONG 6.25、12.5、25μg/mL组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测VONG对LPS刺激的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分泌白介素-8(Interleukin-8,IL-8)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)的影响,采用Griess Reagent法检测RAW264.7细胞上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)的浓度;动物水平实验,分为生理盐水组、阳性对照组(氨茶碱0.008g/L)、水煎液组(10g/L)和VONG 3、10、30g/L组,采用离体气管恒温灌流的方法,制备豚鼠气管螺旋条标本,通过观察其张力变化考察药物对乙酰胆碱(acetylcholine chloride,Ach)和组胺(histamine,His)所致痉挛离体豚鼠气管平滑肌的解痉作用。结果与LPS组比较,VONG 6.25、12.5、25μg/mL组RAW264.7细胞IL-6、IL-8及NO水平降低(P<0.05),且呈一定的量效关系;VONG 3、10、30g/L具有可明显地舒张Ach及His引起的豚鼠支气管平滑肌痉挛,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 VONG具有抑制小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分泌IL-6、IL-8及NO及支气管解痉功能。

瘤果黑种草子超临界CO_2流体萃取物的GC-MS分析

目的:研究瘤果黑种草子超临界萃取物的化学成分。方法:采用气相色谱-质谱(GC-MS)法对瘤果黑种草子超临界CO2流体萃取物的化学成分进行分析,并通过面积归一化法对各色谱峰进行定量分析。结果:从瘤果黑种草子超临界CO2流体萃取物中共鉴定出26种化合物,其中挥发性成分16种,脂肪酸10种。结论:挥发性成分以烯酸、酮为主,脂肪酸以不饱和脂肪酸为主,与其活血通经等药理作用相符。

维药瘤果黑种草子总黄酮苷的药效学及急性毒性研究

目的研究维药瘤果黑种草子总黄酮苷的药效学及急性毒性作用。方法选择昆明种小鼠及健康新西兰种家兔为实验动物,采用角叉菜胶致小鼠足跖肿胀实验观察黄酮苷的抗炎作用,喷雾致喘实验观察黄酮苷平喘作用,家兔促进气管纤毛粘液流实验观察黄酮苷的祛痰作用,小鼠急性毒性实验观察黄酮苷毒性作用。结果低、中、高剂量的总黄酮苷均可明显抑制角叉菜胶所致的小鼠足趾肿胀程度(P<0.01),延长小鼠哮喘反应的潜伏期(P<0.01),增加家兔气管纤毛粘液流运动速度(P<0.01),并呈剂量依赖性,总黄酮苷的最大耐受量为5.4g/kg。结论维药瘤果黑种草子中的总黄酮苷具有一定的抗炎、平喘及祛痰作用,对实验动物未见明显毒性。

瘤果黑种草子组合物对豚鼠气管致痉及RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

目的观察维药瘤果黑种草子组合物对豚鼠气管致痉及RAW264.7细胞致炎作用的影响。方法取豚鼠气管螺旋条连接于肌张力换能器进行实验,记录各供试药物对乙酰胆碱和组胺致气管条平滑肌张力改变(痉挛)的影响,计算解痉率;培养RAW264.7细胞,通过MTT法,观察供试药物对RAW264.7细胞存活率的影响;以脂多糖刺激,ELISA法分别检测RAW264.7细胞分泌炎症因子IL-6、IL-8和NO的含量,计算供试药物对RAW264.7细胞分泌炎症因子IL-6、IL-8和NO的抑制率。进行较大范围的实验剂量-效应反应筛选,分别确定气管条和RAW264.7细胞实验的各种组合物剂量。实验设正常对照组、阳性对照组(氨茶碱)、单用挥发油和黄酮对照组及组合物(A^I)组。结果对乙酰胆碱致痉作用,组合物C组的解痉率高于阳性对照组(P<0.05),其组合物中黄酮与挥发油剂量之比为1∶10,组合物B、F、G组与阳性对照组无明显差异(P>0.05),组合物B、C、E、F、G、I组均高于单用黄酮和挥发油组(P<0.05);对组胺致痉作用,组合物A、B、C、E组的解痉率与阳性对照组无明显差异(P>0.05),组合物A、C、D、E组均高于单用黄酮和挥发油组(P<0.05)。对于抑制RAW264.7细胞分泌炎症因子IL-6、IL-8的作用,组合物Ⅲ-Ⅸ的抑制率均较单用黄酮和挥发油组高(P<0.05),组合物间比较,组合物Ⅸ抑制率最高,其组合物中黄酮与挥发油剂量之比为80∶25。结论瘤果黑种草子组合物的抑痉和抑泌作用优于单用瘤果黑种草子挥发油或瘤果黑种草子黄酮,实验效应与组合物中挥发油和黄酮的剂量比呈现一定的对应关系。

新疆黑种草子总黄酮体外抗宫颈癌活性研究

目的:检测新疆民族药材黑种草子总黄酮的体外抗宫颈癌活性,并初步探讨新疆黑种草子总黄酮成分的体外抗肿瘤机制.方法:以宫颈癌细胞株SiHa和HeLa为实验对象,分为空白对照组和处理组(2.5、5、10、15、20、25、50μg/mL),使用MTT法检测不同浓度的黑种草子总黄酮体外对宫颈癌细胞株的抗增殖活性,最终确定有效药物浓度范围及半数抑制率(IC50),通过划痕实验检测其对宫颈癌细胞株的抗迁移作用,使用流式细胞术分别检测对照组和处理组宫颈癌细胞凋亡率.结果:与空白对照组相比较,黑种草子总黄酮处理组SiHa和HeLa细胞的增殖均受到抑制,并呈浓度依赖性,黑种草子总黄酮对SiHa细胞株的IC50为16.935μg/mL,对HeLa细胞株的IC50为18.366μg/mL.处理前后划痕宽度比较发现,SiHa细胞株空白对照组的肿瘤细胞相对迁移距离为(223.333±13.868)px,处理组的相对迁移距离为(56.333±10.970)px;HeLa细胞株空白对照组的肿瘤细胞相对迁移距离为(360.667±15.308)px,处理组的相对迁移距离为(13.000±3.606)px.黑种草子总黄酮处理可诱导SiHa和HeLa细胞发生凋亡,SiHa细胞株10、15、25μg/mL组凋亡率分别为(8.5±0.5)%、(35.9±1.3)%、(85.7±1.6)%;HeLa细胞株10、15、25μg/mL组凋亡率分别为(5.3±0.4)%、(11.4±0.8)%、(85.9±1.9)%,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论:新疆黑种草子总黄酮在体外具有抗宫颈癌细胞增殖和迁移的药理活性,同时能够诱导宫颈癌细胞株发生凋亡.

维药瘤果黑种草子挥发油、脂肪油含量及相对密度测定

目的:了解瘤果黑种草子(Nigella Glandulifera Freyn,NG)挥发油、脂肪油含量,与国外果黑种草子(Nigella Sativa,NS)、黑种草子(Nigella Damascena,ND)比较,测定NG挥发油、脂肪油相对密度。方法:用水蒸气蒸馏(hydrodistillation,HD)提取挥发油,索式提取脂肪油,测定含量,与果黑种草子、黑种草子比较,用比重瓶法测定相对密度。结果:NG、NS、ND挥发油含量分别为0.33%、0.39%、0.39%,脂肪油含量分别为:32.24%、18.33%、32.90%, NG挥发油相对密度为0.873,NG脂肪油相对密度为0.917。结论:三个种属挥发油含量相似,NG与NS脂肪油含量高。

维药瘤果黑种草子生物碱对豚鼠离体平滑肌作用的实验研究

目的观察维药瘤果黑种草子生物碱对豚鼠离体平滑肌的作用。方法健康普通级豚鼠36只,随机分为模型组、阳性药(异丙肾上腺素或硫酸阿托品)对照组、水煎液对照组及生物碱低、中、高剂量组,共6组。通过豚鼠离体支气管—肺灌流实验观察生物碱对组胺所致的离体支气管平滑肌痉挛的影响;采用豚鼠离体回肠实验,观察生物碱对乙酰胆碱所致的离体回肠平滑肌痉挛的影响。结果生物碱高剂量组可显著降低豚鼠离体支气管-肺灌流速度,减少灌流量(P<0.01),生物碱可明显增加豚鼠离体回肠的收缩张力,随着浓度的增加,收缩不断加强(P<0.01)。结论维药瘤果黑种草子生物碱对豚鼠离体平滑肌具有一定的M受体激动作用。

维吾尔药材黑种草子的生药学鉴别

目的 研究维吾尔药材黑种草子的鉴别方法。方法 应用来源、性状、显微鉴定及薄层色谱方法。结果 详细描述了黑种草子的性状及显微鉴别特征 ;在薄层色谱分析中 ,具有三个明显的斑点。结论 特征明显 。

瘤果黑种草子抗慢性阻塞性肺疾病的物质基础与作用机理研究

目的探索防治慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）的维吾尔药-瘤果黑种草子（nigell aglandulifera seeds,NGS）.方法采取超临界CO2萃取、乙醇提取、大孔树脂分离等工艺,制备纯度大于50%的NGS化学部位-油脂、非油脂、挥发油、黄酮、皂苷和生物碱;利用气相色谱-质谱和液相色谱等分析方法,建立化学部位制备工艺质量控制方法;通过小鼠氨水引咳、酚红祛痰、组胺引喘和二甲苯耳廓致炎及角叉菜胶足跖肿胀实验,筛选综合效应较好的NGS有效部位;通过大鼠棉球肉芽肿和建立COPD模型干预实验、豚鼠肺支气管灌流、家兔气管纤毛粘液流运动、人血液中性粒细胞弹性蛋白酶抑制实验、以及COPD大鼠模型肺组织HE染色观察结构和炎细胞浸润病理改变、HE涂片和ELISA法检测支气管-肺泡灌洗液（broncho-alveolar lavagefluid,BALF）中炎症细胞和TNF-α、IL-8、NF-κB活性的方法,探索NGS有效部位的作用机理.结果有效提取分离6种NGS化学部位;综合效应较好的有效部位为NGS挥发油和黄酮;NGS挥发油和黄酮可以阻止大鼠COPD形成,抑制大鼠棉球肉芽肿,缓解乙酰胆碱和磷酸组胺引起的豚鼠肺支气管痉挛,促进家兔气管纤毛粘液流运动,抑制人血液中性粒细胞弹性蛋白酶活性,减少COPD大鼠肺组织及BALF中中性粒细胞和肺泡巨噬细胞的数量,降低BALF中TNF-α、IL-8、NF-κB活性.结论NGS可以抑制大鼠形成COPD,其物质基础是NGS挥发油和黄酮;NGS挥发油和黄酮具有明显的抗急慢性炎症和肺支气管扩张作用,其抗COPD炎症的作用机理可能与抑制单核细胞和中性粒细胞浸润肺组织,减少炎症因子TNF-α、IL-8、NF-κB的产生,减轻肺组织被伤害有关;NGS挥发油和黄酮有望成为防治COPD的先导化合物.